SDS PAGE analysis of spore crystal

SDS PAGE analysis of spore crystal mixture

B. thuringiensis strain SWK1 was grown in LB broth (25 ml) in a shaking incubator (Hasthas Scientific Instruments, India) main- tained at 30 C and 200 rpm, until more than 90% of cells had lysed ( 72 h). The spore crystal mixture was harvested by centrifugation and pellet was washed once with 5 ml of ice-cold Tris–EDTA buffer [Tris 10 mM, EDTA 1 mM, pH 8.0 with 1 mM phenyl methyl sulphonyl fluoride (PMSF)] and one time with 5 ml of ice-cold
0.5 M NaCl followed by two additional washes with 5 ml of Tris– EDTA buffer with 0.5 mM PMSF. All the centrifugations were per- formed at 10,000 rpm for 5 min at 4 C (Superspin R-V/FM Plasto Crafts, Plasto Craft Scientific Pvt. Ltd, Mumbai, India). Finally, thespore-crystal pellet was suspended in 100 ll of sterile distilled water containing 1 mM PMSF and stored in 20 C. Aliquots of spore–crystal mixture of Bt strain SWK1 was analyzed by SDS- PAGE (Laemmli, 1970) using 10% running and 4% stacking gel. The molecular mass of proteins was determined using higher range protein molecular weight marker (myosin rabbit muscle 205 kDa, phosphorylase b 97.4 kDa, bovine serum albumin 65 kDa, ovalbu- min 43 kDa and carbonic anhydrase 29 kDa) obtained from GeNeiTM, Bangalore, India.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์หน้า SDS ของสปอร์ผสมคริสตัลB. thuringiensis สายพันธุ์ SWK1 ถูกปลูกในน้ำซุปปอนด์ (25 มล.) ในการสั่น (เครื่องมือวิทยาศาสตร์ Hasthas อินเดีย) ตู้อบหลัก - tained 30 C และ 200 rpm จนกว่า 90% ของเซลล์มีนาทีที่ 37uc (72 ชม.) ส่วนผสมคริสตัลสปอร์ถูกเก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยง และเม็ดถูกล้างอีกครั้ง ด้วย 5 ml ของฉ่ำทริสเรทติ้ง – EDTA บัฟเฟอร์ [ทริสเรทติ้ง 10 มม. EDTA 1 มม. ค่า pH 8.0 มีฟลูออไรด์ sulphonyl เมทิลฟีนิล 1 มม. (PMSF)] และครั้งเดียวกับ 5 มล.ของฉ่ำ0.5 M NaCl ที่ตาม ด้วยล้างเพิ่มเติมสองกับทริสเรทติ้ง – EDTA บัฟเฟอร์ด้วย 0.5 มม. PMSF 5 มล. Centrifugations ทั้งหมดถูกต่อ - รูปที่ 10,000 rpm 5 นาทีที่ 4 C (Superspin R-V/FM Plasto งานฝีมือ Plasto ฝีมือวิทยาศาสตร์ pvt. Ltd มุมไบ อินเดีย) ในที่สุด เม็ดคริสตัล thespore ถูกระงับใน 100 ll ของหมันกลั่นน้ำ PMSF 1 มม.ที่ประกอบด้วย และเก็บไว้ใน 20 เซลเซียส Aliquots สปอร์ – คริสตัลผสมของสายพันธุ์ Bt SWK1  โดย SDS - เพ (Laemmli, 1970) ใช้ทำงาน 10% และ 4% ซ้อนเจ มวลโมเลกุลของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้สูงช่วงโปรตีนโมเลกุลเครื่องหมาย (ไมโอซินกระต่ายกล้าม 205 kDa, phosphorylase b 97.4 kDa, serum albumin วัว 65 kDa, ovalbu นาที 43 kDa และสึกคาร์บอ anhydrase 29 kDa) ได้จาก GeNeiTM บังกาลอร์ อินเดีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หน้าการวิเคราะห์ระบบ SDS ของสปอร์คริสตัลผสม

บี thuringiensis สายพันธุ์ SWK1 ถูกปลูกในน้ำซุป LB (25 มล.) ในศูนย์บ่มเพาะสั่น (Hasthas เครื่องมือวิทยาศาสตร์, อินเดีย) ลดการดูแลรักษาวันที่ 30 C และ 200 รอบต่อนาทีจนถึงมากกว่า 90% ของเซลล์ได้ lysed (72 ชั่วโมง) ส่วนผสมของสปอร์คริสตัลถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงและเม็ดได้รับการล้างครั้งเดียวที่มี 5 มิลลิลิตรเย็นบัฟเฟอร์ Tris-EDTA [Tris ขนาด 10 MM, EDTA 1 มิลลิพีเอช 8.0 1 มิลลิฟีนิลเมธิล sulphonyl ลูออไรด์ (PMSF)] และครั้งเดียวกับ 5 มิลลิลิตรเย็น
0.5 M NaCl ตามด้วยสองล้างเพิ่มเติมกับ 5 มิลลิลิตร tris- EDTA บัฟเฟอร์ 0.5 มิลลิ PMSF centrifugations ทั้งหมดที่กำลังก่อตัวละ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 C (Superspin RV / FM Plasto หัตถกรรม, Plasto หัตถกรรมวิทยาศาสตร์ Pvt. Ltd, มุมไบประเทศอินเดีย) สุดท้าย thespore คริสตัลเม็ดถูกระงับใน 100 LL น้ำกลั่นปลอดเชื้อที่มี 1 มิลลิ PMSF และเก็บไว้ใน 20 ซี aliquots ของสปอร์คริสตัลส่วนผสมของสายพันธุ์ Bt SWK1 ถูกวิเคราะห์โดย SDS- หน้า (Laemmli 1970) โดย 10% ทำงาน และ 4% ซ้อนเจล มวลโมเลกุลของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้เครื่องหมายช่วงโปรตีนสูงน้ำหนักโมเลกุล (myosin กล้ามเนื้อกระต่าย 205 กิโลดาลตันโฟ B 97.4 กิโลดาลตันวัวซีรั่มอัลบูมิ 65 กิโลดาลตันนาที ovalbu- 43 กิโลดาลตันและ anhydrase คาร์บอ 29 กิโลดาลตัน) ที่ได้รับจาก GeNeiTM บังกาลอร์ประเทศอินเดีย .

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ซีหน้าการวิเคราะห์สปอร์ผสมคริสตัลB . thuringiensis สายพันธุ์ปลูกในน้ำซุป swk1 ปอนด์ ( 25 มล. ) ในการเขย่าเครื่องฟักไข่ ( hasthas เครื่องมือวิทยาศาสตร์ อินเดีย ) หลัก - tained ที่ 30 องศาเซลเซียสและความเร็วรอบ 200 รอบต่อนาที จนถึงมากกว่า 90% ของเซลล์ได้ lysed ( 72 ชั่วโมง ) การสร้างสปอร์ผสมผลึกและเก็บเกี่ยวผลผลิตโดย 3 เม็ดซักครั้งกับ 5 มิลลิลิตรหรือน้ำแข็งเย็น– EDTA บัฟเฟอร์ [ บริษัท 10 มม. , EDTA 1 มม. , pH 8.0 กับ 1 มม. ) เมทิล sulphonyl ฟลูออไรด์ ( PMSF ) ] และหนึ่งในเวลาเย็น กับ 5 มล.0.5 M NaCl ตามด้วยสองเพิ่มเติม 5 มิลลิลิตร โดยล้างและ EDTA บัฟเฟอร์กับ PMSF 0.5 มิลลิเมตร centrifugations ทั้งหมดถูกต่อขึ้นที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 C ( superspin r-v FM / งานฝีมือ plasto ทางวิทยาศาสตร์ plasto หัตถกรรม Pvt . Ltd , มุมไบ , อินเดีย ) ในที่สุด thespore คริสตัลเม็ดถูกระงับใน 100 จะเป็นหมันของน้ำกลั่นที่มี PMSF 1 มม. และเก็บไว้ใน 20 C เฉยๆของสปอร์–คริสตัลผสมของ BT swk1 สายพันธุ์โดยใช้ SDS - หน้า ( laemmli , 1970 ) 10 % และ 4 % ใช้วิ่งซ้อนเจล มวล โมเลกุลของโปรตีนถูกกำหนดโดยใช้โมเลกุลเครื่องหมาย ( สูงกว่าช่วงโปรตีนไมโอซินกระต่ายกล้ามเนื้อ 205 ดาลตันฟอ ฟรีเลส B 97.4 kDa อัลบูมิน 65 kDa ovalbu - Min 43 กิโลดาลตันและฉะนี้แล 29 กิโลดาลตัน ) ที่ได้จาก geneitm , Bangalore , อินเดีย