Materials and MethodsExperimental.

Materials and Methods
Experimental. Sedimentation velocity experiments were conducted
with an Optima XLI (Beckman Coulter) using an An50
Ti eight-hole rotor and with seven 400-l samples in standard
double-sector Epon centerpieces equipped with sapphire windows.
(Satisfactory results were also achieved with quartz windows.)
Interference and absorbance data were acquired simultaneously
with the absorbance scanner in the continuous mode
without averaging and with radial increments of 0.003 cm. For
the acquisition of multiple absorption signals, characteristic
wavelengths were chosen by avoiding steep slopes of the extinction
profiles of any component because of limited monochromator
accuracy and bandwidth. With this precaution, the wavelength
control was sufficiently accurate for the analysis
described. Wavelength accuracy was also found not to be problematic
when a single absorption signal was combined with
interference optical data acquisition. To accommodate possible
imperfections in the radial calibration of the absorbance and the
interference detection system, the menisci positions in the
different data sets were treated as independent parameters
optimized in the fit.
IgG, rabbit muscle aldolase, and BSA were taken from gel
filtration standard kits (catalog no. 17-0442-01, Amersham
Pharmacia). Hen egg lysozyme (HEL) was purchased from
Worthington, and D1.3 antibody was prepared as described in
ref. 29. A DNA fragment encoding the SH3 domains of phospholipase
C
1 (790–851) (PLC
1) was cloned in the vector
pGEX-4T-1(
) (Novagen) and expressed in Escherichia coli
BL21-CodonPlus(DE3)-RIL cells (Stratagene). The GST–
PLC
1–SH3 fusion protein was purified by using a GSTrap FF
column (Amersham Pharmacia), digested with thrombin protease
(Amersham Pharmacia), and further purified by gel filtration
and anion exchange chromatography. The proline-rich
region of SH2-domain-containing leukocyte protein 76 (SLP-76)
(158–244) was cloned in the vector pET 28a and expressed in E.
coli BL21 cells. His-tagged SLP-76 protein was purified from a
soluble fraction with a HisTrap HP column (Amersham Pharmacia)
followed by gel filtration and anion exchange chromatography.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ
ทดลอง ได้ดำเนินการทดลองตกตะกอนความเร็ว
ด้วยเป็น XLI พติ (Beckman Coulter) ใช้การ An50
ใบพัดแปดรูตี้ กับ 400 l ตัวอย่างที่ 7 ในมาตรฐาน
centerpieces Epon ภาคสองที่เพียบพร้อมไป ด้วยแซฟไฟร์ windows.
(Satisfactory results were also achieved with quartz windows.)
รบกวนและ absorbance ข้อมูลได้รับมาพร้อมกัน
กับสแกนเนอร์ absorbance ในโหมดต่อเนื่อง
โดยหาค่าเฉลี่ย และ มีส่วนเพิ่มรัศมีของ 0.003 ซม. สำหรับ
ซื้อสัญญาณดูดซึมหลาย ลักษณะ
ความยาวคลื่นที่ถูกเลือก โดยหลีกเลี่ยงการลาดชันของการดับ
โพรไฟล์ประกอบใด ๆ ได้เนื่องจากจำกัด monochromator
แบนด์วิดท์และความถูกต้อง พร้อมนี้ระวัง ความยาวคลื่น
ตัวควบคุมถูกต้องเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์
อธิบาย นอกจากนี้ยังพบความแม่นยำความยาวคลื่นที่มีปัญหา
เมื่อสัญญาณเดียวดูดซึมถูกรวมกับ
ซื้อข้อมูลแสงรบกวน รองรับได้
ข้อบกพร่องในการปรับเทียบ absorbance ที่รัศมีและ
รบกวนตรวจสอบระบบ ตำแหน่ง menisci ในการ
ชุดข้อมูลที่แตกต่างกันก็ถือว่าเป็นพารามิเตอร์อิสระ
เหมาะในพอดี
IgG, aldolase กล้ามเนื้อกระต่าย และบีเอสเอได้มาจากเจ
กรองชุดมาตรฐาน (แค็ตตาล็อกหมายเลข 17-0442-01, Amersham
Pharmacia) ไก่ไข่ lysozyme (ด้อย) ถูกซื้อจาก
ธธิง และแอนติบอดี D1.3 ถูกเตรียมใน
อ้างอิง 29 ส่วนดีเอ็นเอรหัส SH3 โดเมนของ phospholipase
1 C (790-851) (PLC 1) ถูกโคลนในเวกเตอร์
() pGEX-4 ที-1 (Novagen) และแสดงใน Escherichia coli
CodonPlus ตัวของ BL21 (DE3) -เหลือเซลล์ (Stratagene) GST –
PLC 1 – SH3 ฟิวชั่นโปรตีนที่บริสุทธิ์โดย GSTrap FF
คอลัมน์ (Amersham Pharmacia), เจ่ากับ thrombin รติเอส
(Amersham Pharmacia) และบริสุทธิ์ต่อไป โดยการกรองเจ
anion exchange chromatography และ ริช proline
ภูมิภาค SH2-โดประกอบด้วย leukocyte โปรตีน 76 (SLP-76)
(158–244) โคลนในสัตว์เวกเตอร์ 28a และแสดงใน E.
coli BL21 เซลล์ พระติดแท็ก SLP-76 โปรตีนที่บริสุทธิ์จากการ
เศษละลายกับคอลัมน์ HisTrap HP (Amersham Pharmacia)
ตาม ด้วยเจลอาบน้ำและ anion exchange chromatography

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
ทดลอง การทดลองความเร็วของการตกตะกอนได้ดำเนิน
กับ Optima XLI (Beckman Coulter) โดยใช้ An50
Ti โรเตอร์แปดหลุมและเจ็ด 400? ตัวอย่างลิตรในมาตรฐาน
สองภาค centerpieces เพ่พร้อมกับหน้าต่างไพลิน
(ผลความพึงพอใจประสบความสำเร็จยังมีหน้าต่างควอตซ์ ).
แทรกแซงและการดูดข้อมูลที่ได้มาพร้อม
กับเครื่องสแกนเนอดูดกลืนแสงในโหมดอย่างต่อเนื่อง
โดยไม่ต้องเฉลี่ยและมีการเพิ่มขึ้นของรัศมี 0.003 เซนติเมตร สำหรับ
การเข้าซื้อกิจการของสัญญาณการดูดซึมหลายลักษณะ
ความยาวคลื่นที่ได้รับการแต่งตั้งโดยหลีกเลี่ยงความลาดชันของการสูญเสีย
รูปแบบขององค์ประกอบใด ๆ เพราะของ monochromator จำกัด
ถูกต้องและแบนด์วิดธ์ มีข้อควรระวังนี้ความยาวคลื่น
ควบคุมมีเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์ที่ถูกต้อง
อธิบาย ความถูกต้องของคลื่นก็ยังไม่พบว่าจะเป็นปัญหา
เมื่อสัญญาณการดูดซึมเดียวรวมกับ
การแทรกแซงการเก็บข้อมูลออปติคอล เพื่อรองรับความเป็นไปได้ที่
ความไม่สมบูรณ์ในการสอบเทียบรัศมีของการดูดกลืนแสงและ
ระบบตรวจจับการรบกวนตำแหน่งคอกม้าใน
ชุดข้อมูลที่แตกต่างกันได้รับการรักษาเป็นพารามิเตอร์อิสระ
ที่ดีที่สุดในพอดี
IgG กระต่ายอัลโดกล้ามเนื้อและบีเอสเอถูกนำมาจากเจล
ชุดมาตรฐานการกรอง (แคตตาล็อกไม่มี. 17-0442-01, Amersham
Pharmacia) ไลโซไซม์ไก่ไข่ (HEL) ซื้อมาจาก
วอร์ชิงตันและ D1.3 แอนติบอดีที่เตรียมตามที่อธิบายไว้ใน
การอ้างอิง 29 ชิ้นดีเอ็นเอเข้ารหัสโดเมน SH3 ของ phospholipase
C 1 (790-851) (PLC 1) เป็นโคลนในเวกเตอร์
pGEX-4T-1 (?) (Novagen) และแสดงออกใน Escherichia coli
BL21-CodonPlus (DE3 ) เซลล์ -RIL (Stratagene) GST-
PLC? โปรตีนฟิวชั่น 1 SH3 บริสุทธิ์โดยใช้ GSTrap FF
คอลัมน์ (Amersham Pharmacia) ย่อยด้วยน้ำย่อย thrombin
(Amersham Pharmacia) และต่อไปโดยการกรองบริสุทธิ์เจล
และการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโต โพรลีนที่อุดมไปด้วย
พื้นที่ของ SH2 โดเมนที่มีเม็ดโลหิตขาวโปรตีน 76 (SLP-76)
(158-244) เป็นโคลนใน 28a pET เวกเตอร์และการแสดงออกใน E.
coli BL21 เซลล์ ของเขาที่ติดแท็ก SLP-76 โปรตีนบริสุทธิ์จาก
ส่วนที่ละลายกับคอลัมน์ HisTrap กับเอชพี (Amersham Pharmacia)
ตามด้วยการกรองเจลและการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
ทดลอง การตกตะกอนความเร็วการทดลอง
ด้วย Optima xli ( Beckman Coulter ) โดยใช้ an50
Ti แปดรูใบพัดและเจ็ด 400 -  l ตัวอย่างมาตรฐาน
คู่ภาคเกรด centerpieces พร้อมกับ Windows แซฟไฟร์ .
( ผลเป็นที่พอใจก็บรรลุกับหน้าต่าง ควอทซ์ )
รบกวนข้อมูลและดูดกลืนได้มาพร้อมกัน
กับค่าสแกนในโหมดต่อเนื่อง โดยเฉลี่ย
และรัศมีเพิ่มขึ้น 1 เซนติเมตร สำหรับการดูดสัญญาณ

ความยาวคลื่นหลายชนิดถูกเลือกโดยหลีกเลี่ยงชันลาดของการสูญพันธุ์
โปรไฟล์ของส่วนประกอบใด ๆเพราะความถูกต้องโมโนโครเมเตอร์
จำกัดแบนด์วิดธ์ กับป้องกันนี้ ความยาวคลื่น
ควบคุมแม่นยำเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์
อธิบาย ความถูกต้องของความยาวคลื่น พบไม่ได้เป็นปัญหา
เมื่อสัญญาณการดูดกลืนเดียวรวมกับ
รบกวนข้อมูลออปติคอล เพื่อรองรับความเป็นไปได้ในการสอบเทียบรัศมี
ของการดูดกลืนแสงและระบบตรวจจับสัญญาณรบกวน
,
คอกตำแหน่งในชุดข้อมูลที่แตกต่างกันได้ถือว่าเป็นพารามิเตอร์อิสระที่ดีที่สุดในพอดี
.
IgG ลโดเลสกล้ามเนื้อกระต่าย ขนาดถ่ายจากเจล
กรองมาตรฐานชุด ( รายการไม่ 17-0442-01 ที่มุ่งมั่น ,
) แม่ไก่ไข่ไลโซไซม์ ( นรก ) ซื้อมาจาก
Worthington และ d1.3 แอนติบอดีที่เตรียมไว้ใน
29 Ref . เป็นดีเอ็นเอโดเมนของ phospholipase
สินค้าการเข้ารหัสC
1 ( 790 ( 851 ) ( มหาชน
1 ) ถูกโคลนในเวกเตอร์
pgex-4t-1 (
) ( novagen ) และแสดงออกในแบคทีเรีย Escherichia coli BL21 ( DE3 ) -
codonplus ริลเซลล์ ( stratagene ) GST )
( 1 )
สินค้าของโปรตีนบริสุทธิ์โดยใช้ gstrap FF
คอลัมน์ ( ที่ย่อยด้วยเอนไซม์โปรติเอสมุ่งมั่น ) ทรอมบิน
( ที่มุ่งมั่น ) และเพิ่มเติมบริสุทธิ์โดย
กรองเจลและโครมาโตกราฟีแลกเปลี่ยนแอนไอออน . การสะสมโพรลีนรวย
ภูมิภาคของโดเมนที่มีโปรตีน ทั้งนี้สินค้า 76 ( slp-76 )
( 158 ( 244 ) ถูกโคลนในเวกเตอร์สัตว์เลี้ยง และแสดงออกใน E . coli 28A
BL21 เซลล์ เขาติด slp-76 โปรตีนบริสุทธิ์จากส่วนที่ละลายน้ำได้ด้วย
histrap HP คอลัมน์ ( ที่มุ่งมั่น )
ตามด้วย Gel filtration chromatography และแลกเปลี่ยนแอนไอออน .