Two engineered plasmids are express

Two engineered plasmids are expressed in the living cells. The first one codes for the green
fluorescent protein fused with the RNA-binding protein from the MS2 bacteriophage. The second one
codes for the reporter RNA that contains in its 3'-untranslated region several copies of a unique hairpin
fragment from the MS2 genome that interacts with the MS2 RNA-binding protein. Nuclear
localization signal is also inserted into the protein tag. Binding of the fluorescent tag to the reporter
RNA can generate a strong fluorescent signal [159,160]. Modified target RNA gene can be integrated
into the cell genome by a homologous recombination with PCR-amplified products [161]. This
approach has been used to design several genetically encoded systems for the direct observation of
intracellular RNA dynamics [157]. However, this method is based on artificial gene constructions and
not on natural cell components. It depends on plasmid transfection and intracellular expression of the
tags and reporter RNA. In addition, high background fluorescence is observed in this case.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Plasmids สองออกแบบจะแสดงอยู่ในเซลล์ชีวิต หนึ่งรหัสสำหรับสีเขียวโปรตีนฟลูออเรส fused ด้วยโปรตีนรวมอาร์เอ็นเอจากแบคที MS2 หนึ่งสองรหัสอาร์เอ็นเอที่ประกอบด้วยในพื้นที่ของ 3-untranslated หลายสำเนาของกิ๊บเฉพาะ โปรแกรมรายงานแยกส่วนจากจีโนม MS2 ที่โต้ตอบกับโปรตีนรวม MS2 อาร์เอ็นเอ นิวเคลียร์แปลสัญญาณจะถูกแทรกลงในแท็กโปรตีน ผูกป้ายเรืองแสงเพื่อโปรแกรมรายงานการอาร์เอ็นเอสามารถสร้างสัญญาณฟลูออเรสแข็งแรง [159,160] สามารถรวมแก้ไขเป้าหมายอาร์เอ็นเอยีนเป็นกลุ่มเซลล์โดย recombination homologous กับ PCR ขยายผลิตภัณฑ์ [161] นี้มีการใช้วิธีการสังเกตโดยตรงของหลายแปลงพันธุกรรมเข้ารหัสระบบdynamics อาร์เอ็นเอ intracellular [157] อย่างไรก็ตาม วิธีการนี้จะขึ้นอยู่กับยีนประดิษฐ์ก่อสร้าง และไม่ได้อยู่ในส่วนประกอบของเซลล์ธรรมชาติ ขึ้นอยู่กับการ plasmid transfection และ intracellular นิพจน์ของการแท็กและโปรแกรมรายงานอาร์เอ็นเอ สูงพื้น fluorescence ถูกสังเกตในกรณีนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สองพลาสมิดวิศวกรรมจะแสดงในเซลล์ที่มีชีวิต คนแรกรหัสสำหรับสีเขียว
เรืองโปรตีนผสมกับโปรตีน RNA ผูกพันจาก bacteriophage MS2 สอง
รหัสสำหรับ RNA นักข่าวที่มีในภูมิภาค 3'-untranslated ของสำเนาหลายกิ๊บไม่ซ้ำกัน
ส่วนจากจีโนม MS2 ที่ติดต่อกับโปรตีน MS2 RNA ผูกพัน นิวเคลียร์
สัญญาณการแปลถูกแทรกเข้าไปในแท็กโปรตีน ผูกพันของแท็กเรืองแสงนักข่าว
RNA สามารถสร้างสัญญาณเรืองแสงที่แข็งแกร่ง [159,160] ดัดแปลงยีน RNA เป้าหมายสามารถบูรณาการ
เข้าไปในจีโนมของเซลล์โดยการรวมตัวกันคล้ายคลึงกันกับผลิตภัณฑ์ PCR-amplified [161] ซึ่ง
วิธีการที่ถูกนำมาใช้ในการออกแบบหลายระบบเข้ารหัสพันธุกรรมสำหรับการสังเกตโดยตรงจาก
การเปลี่ยนแปลงของ RNA ภายในเซลล์ [157] แต่วิธีนี้จะขึ้นอยู่กับการก่อสร้างของยีนเทียมและ
ไม่ได้อยู่ในส่วนประกอบของเซลล์ตามธรรมชาติ มันขึ้นอยู่กับ transfection พลาสมิดและการแสดงออกในเซลล์ของ
แท็กและอาร์เอ็นเอนักข่าว นอกจากนี้ยังมีการเรืองแสงพื้นหลังสูงเป็นที่สังเกตในกรณีนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 ออกแบบเพื่อแสดงที่อาศัยอยู่ในเซลล์ หนึ่งรหัสสำหรับโปรตีนเรืองแสงสีเขียว
ผสมกับยีนโปรตีนจาก MS2 โรงพยาบาล . ตัวที่สอง
รหัสนักข่าวของ RNA ที่มี 3 ' - untranslated ภูมิภาคหลายสำเนาเฉพาะกิ๊บ
เบสจาก MS2 จีโนมที่โต้ตอบกับ MS2 RNA โปรตีน . นิวเคลียร์
จำกัดสัญญาณยังแทรกเข้าไปในโปรตีนแท็ก ผูกป้ายเรืองแสงกับนักข่าว
rna สามารถสร้างแข็งแรงสัญญาณ [ เรืองแสง 159160 ] แก้ไขเป้าหมายอาร์เอ็นเอยีนสามารถบูรณาการ
เข้าสู่เซลล์โครโมโซมโดยการเปรียบเทียบกับวิธีขยายผลิตภัณฑ์ [ 161 ] วิธีการนี้
มีใช้หลายแบบพันธุกรรมเข้ารหัสเพื่อการสังเกตโดยตรงของ
ภายในเซลล์อาร์เอ็นเอพลวัต [ 157 ] แต่วิธีนี้จะขึ้นอยู่กับโครงสร้างยีนเทียมและ
ไม่ใช่ส่วนประกอบของเซลล์ตามธรรมชาติ มันขึ้นอยู่กับชนิดของพลาสมิดและการแสดงออกสำหรับ
แท็กและนักข่าว RNA นอกจากนี้ เรืองแสงพื้นหลังสูงคือการตรวจสอบในคดีนี้