Materials and MethodsPlant Material

Materials and Methods
Plant Materials and Growth Conditions
Mutant alleles were all in the Col-0 background and were sourced from the ABRC stock center. For growth assays under short days, seeds were sown on soil and placed in a growth chamber and exposed to an 8 h light (150–250 μmol photons m-2 s-1)/16 h dark cycle at 21°C for 6 weeks. Plant weight was recorded and leaf surface area measurements taken by imagining freshly collected leaves and using ImageJ software to determine the surface area of leaf silhouettes. For growth under continuous light conditions, surface-sterilized seeds were germinated on agar media containing mineral salts (MM) with 2% sucrose (MMS) and 0.8% Bacto agar as described by Scholl et al. (1998). Seedlings were grown at 20°C in a climate chamber with a 16 h light (150–250 μmol photons m-2 s-1)/8 h dark cycle for 7 days before transfer to soil in a climate chamber with 24 h continuous light (150–250 μmol photons m-2 s-1).

For comparison of leaf area and chlorophyll fluorescence under short and long day conditions, plants were grown in pots (5 cm square and 5 cm deep) containing four parts Levington F2 compost (Scotts, Maryville, OH, USA) plus one part vermiculite. They were grown in short days (8 h) for 22 days after sowing in a controlled environment room at 23°C and 65% relative humidity with a light intensity of 200 μmol photons m-2 s-1. After 22 days, half the plants were transferred to long days (14 h) under otherwise identical conditions and the leaf area and chlorophyll fluorescence measured over 10 days. The plants were imaged with a CF Imager (Technologica Ltd., Colchester, UK). They were dark adapted for 30 min before measuring basal fluorescence (F0). This was followed by measuring maximum dark adapted fluorescence (Fm) resulting from a saturating light flash (6, 349 μmol photons m-2 s-1 for 0.8 s). Dark-adapted quantum efficiency of photosystem II was calculated as Fv/Fm (Fv = Fm-Fo) (Baker, 2008). Leaf area of the imaged rosettes was extracted from the chlorophyll fluorescence images and the instrument was calibrated with leaf discs of known area.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการวัสดุโรงงานและสภาพการเจริญเติบโตกลายพันธุ์ alleles ในพื้นหลัง 0 คอลัมน์ทั้งหมด และได้มาจากศูนย์ ABRC หุ้น สำหรับ assays เติบโตภายใต้วันสั้น เมล็ดหว่านบนดิน และวางไว้ในห้องเจริญเติบโต และสัมผัสกับการไฟ 8 ชั่วโมง (150 – 250 ไมโครโมลโฟตอน m-2 รายการ s-1) / 16 ชม.เข้มรอบที่ 21 ° C 6 สัปดาห์ บันทึก และการวัดพื้นที่ผิว โดยจินตนาการใบสดเก็บใบน้ำหนักพืช และการใช้ ImageJ ซอฟต์แวร์เพื่อกำหนดพื้นที่ผิวของใบเงา การเติบโตภายใต้สภาพแสงที่ต่อเนื่อง ฆ่าเชื้อพื้นผิวเมล็ดได้งอกบนสื่อวุ้นที่ประกอบด้วยเกลือแร่วุ้น Bacto (มม.) กับน้ำตาลซูโครส 2% (MMS) และ 0.8% ตามที่อธิบายไว้โดย Scholl et al. (1998) ต้นกล้าที่ปลูกที่ 20° C ในห้องอากาศกับไฟ 16 ชม. (150 – 250 ไมโครโมลโฟตอน m-2 รายการ s-1) / 8 ชม.เข้มรอบ 7 วันก่อนการโอนย้ายในดินในอากาศห้องด้วยแสงต่อเนื่อง 24 ชั่วโมง (150 – 250 ไมโครโมลโฟตอน m-2 รายการ s-1)สำหรับการเปรียบเทียบใบตั้งและคลอโรฟิลเรืองแสงภายใต้สภาพวันยาวและสั้น พืชที่ปลูกในกระถาง (ตาราง 5 ซม.และ 5 ซม.ลึก) ที่ประกอบด้วยสี่ส่วน Levington F2 ปุ๋ยหมัก (Scotts แมรี่ OH สหรัฐอเมริกา) และเวอร์มิคูไลท์ส่วนหนึ่ง พวกเขาได้เติบโตขึ้นในวันที่สั้น (8 ชั่วโมง) สำหรับ 22 วันหลังหยอดเมล็ดในห้องที่ควบคุมสภาพแวดล้อมที่อุณหภูมิ 23° C และ 65% ความชื้นสัมพัทธ์มีความสว่างของ 200 ไมโครโมลโฟตอน m-2 s-1 หลังจากวันที่ 22 พืชครึ่งถูกโอนย้ายไปนานวัน (14 ชั่วโมง) ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่เหมือนกันและใบตั้งและคลอโรฟิลล์ฟลูออเรสเซนต์วัดกว่า 10 วัน พืชถูก imaged กับ Imager เป็น CF (Technologica จำกัด Colchester สหราชอาณาจักร) พวกเขาก็เข้มเหมาะสำหรับ 30 นาทีก่อนวัดฐานเรืองแสง (F0) แล้วการวัดสูงสุดเข้มปรับเรืองแสง (Fm) เกิดจากแสงแฟลช saturating (6, 349 ไมโครโมลโฟตอน m-2 รายการ s-1 สำหรับ 0.8 s) Dark-adapted ประสิทธิภาพควอนตัมของ photosystem II คำนวณเป็น Fv/Fm (Fv = Fm Fo) (Baker, 2008) พื้นที่ใบของริบบิ้น imaged ถูกแยกจากภาพเรืองแสงของคลอโรฟิลล์ และตราสารถูกปรับเทียบพื้นที่รู้จักแผ่นใบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
วัสดุพืชและเงื่อนไขการเจริญเติบโตของ
อัลลีลกลายพันธุ์ได้ทั้งหมดในเทือกเขา-0 พื้นหลังและได้รับมาจากศูนย์ ABRC หุ้น สำหรับการวิเคราะห์การเจริญเติบโตภายใต้วันสั้น, เมล็ดถูกหว่านบนพื้นดินและวางไว้ในห้องการเจริญเติบโตและการสัมผัสกับแสง 8 ชั่วโมง (150-250 ไมโครโมลโฟตอน M-2 S-1) / 16 ชั่วโมงวงจรมืดที่ 21 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 สัปดาห์ . น้ำหนักต้นได้รับการบันทึกและการวัดพื้นที่ผิวใบที่ถ่ายโดยจินตนาการใบสดที่เก็บรวบรวมและการใช้ซอฟต์แวร์ ImageJ เพื่อตรวจสอบพื้นที่ผิวของเงาใบ สำหรับการเจริญเติบโตภายใต้สภาพแสงอย่างต่อเนื่อง, เมล็ดผิวฆ่าเชื้องอกบนวุ้นสื่อที่มีเกลือแร่ (mm) ด้วย% ซูโครส 2 (MMS) และ 0.8% Bacto วุ้นตามที่อธิบาย Scholl, et al (1998) ต้นกล้าปลูกที่ 20 ° C ในห้องสภาพภูมิอากาศที่มีแสง 16 ชั่วโมง (150-250 ไมโครโมลโฟตอน M-2 S-1) / 8 ชั่วโมงวงจรมืดเป็นเวลา 7 วันก่อนที่จะโอนให้กับดินในห้องสภาพภูมิอากาศด้วยแสงอย่างต่อเนื่อง 24 ชั่วโมง (150-250 ไมโครโมลโฟตอน M-2 s-1).

สำหรับการเปรียบเทียบของพื้นที่ใบและคลอโรฟิลเรืองแสงภายใต้เงื่อนไขที่วันสั้นและระยะยาว, พืชที่ปลูกในกระถาง (5 ตารางเซนติเมตรและลึก 5 ซม.) ที่มีสี่ส่วน Levington F2 ปุ๋ยหมัก ( สกอตส์, แมรีวิล, OH, USA) บวกส่วนหนึ่ง vermiculite พวกเขาได้รับการปลูกในวันสั้น (8 ชั่วโมง) สำหรับ 22 วันหลังหยอดเมล็ดในห้องพักสภาพแวดล้อมที่ควบคุมได้ที่ 23 องศาเซลเซียสและ 65% ความชื้นสัมพัทธ์ที่มีความเข้มของแสง 200 ไมโครโมลโฟตอน M-2 S-1 หลังจากวันที่ 22 ครึ่งพืชถูกย้ายไปนานวัน (14 ชั่วโมง) ภายใต้เงื่อนไขที่อื่นเหมือนกันและพื้นที่ใบและคลอโรฟิลเรืองแสงวัดกว่า 10 วัน พืชที่ถูกถ่ายภาพกับ CF Imager (Technologica Ltd. , โคลเชสเตอร์, สหราชอาณาจักร) พวกเขาได้รับการปรับมืดเป็นเวลา 30 นาทีก่อนที่จะวัดการเรืองแสงพื้นฐาน (F0) นี้ตามมาด้วยการวัดความเข้มสูงสุดดัดแปลงเรืองแสง (FM) เกิดจากแสงแฟลชอิ่มตัว (6, 349 ไมโครโมลโฟตอน M-2 S-1 สำหรับ 0.8 s) เข้มปรับประสิทธิภาพควอนตัมของ photosystem II ที่คำนวณได้เป็น Fv / FM (FV = FM-Fo) (เบเกอร์ 2008) พื้นที่ใบของโบถ่ายภาพที่ถูกสกัดจากคลอโรฟิลภาพเรืองแสงและตราสารที่ได้รับการสอบเทียบกับแผ่นใบของพื้นที่ที่เป็นที่รู้จัก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการวัสดุโรงงานและเงื่อนไขการเจริญเติบโตยีนกลายพันธุ์อยู่ใน col-0 ประวัติและที่มาจากศูนย์หุ้น abrc . สำหรับวิธีการเจริญเติบโตภายใต้สั้นวัน เมล็ดที่หว่านในดินและวางไว้ในการเจริญเติบโตและหอการค้าตาก 8 H แสง ( 150 – 250 μ mol โฟตอนด้วยที่สุด ) / 16 H มืดรอบที่ 21 °องศาเซลเซียส เป็นเวลา 6 สัปดาห์ บันทึกน้ำหนักและการวัดพื้นที่ผิวของพืชใบถ่ายด้วยจินตนาการและเก็บใบสดใช้โปรแกรม ImageJ เพื่อหาพื้นที่ผิวของ silhouettes ใบไม้ สำหรับการเจริญเติบโตภายใต้สภาพแสงอย่างต่อเนื่อง ฟอกฆ่าเชื้อเมล็ดงอกบนอาหารวุ้นที่มีเกลือแร่ ( มม. ) 2 % ซูโครส ( MMS ) และ 0.8% Bacto วุ้นตามที่อธิบายไว้โดย Scholl et al . ( 1998 ) ต้นกล้าที่ปลูกที่ 20 ° C ในห้องบรรยากาศกับแสง 16 ชั่วโมง ( 150 – 250 μ mol โฟตอนด้วยวงจรมืดที่สุด ) / 8 ชั่วโมง เป็นเวลา 7 วัน ก่อนที่จะย้ายไปในดินในอากาศในห้องที่มีแสง 24 ชั่วโมงต่อเนื่อง ( 150 – 250 μ mol โฟตอนด้วยที่สุด )สำหรับการเปรียบเทียบของพื้นที่ใบ และคลอโรฟิลล์ฟลูออเรสเซนซ์ ภายใต้เงื่อนไขที่สั้นและวันยาว ปลูกในกระถาง ( 5 ตร. ซม. 5 ซม. ลึก ) ประกอบด้วยสี่ส่วน เลวิงตัน F2 ปุ๋ยหมัก ( Scotts Maryville , , โอ้ , USA ) บวกหนึ่งส่วน vermiculite . พวกเขาเติบโตขึ้นในสั้นวัน ( 8 ชั่วโมง ) สำหรับ 30 วันหลังปลูกในสภาพแวดล้อมที่ควบคุมห้องที่ 23 ° C และความชื้นสัมพัทธ์ 65 เปอร์เซ็นต์ มีความเข้มแสง 200 μ mol โฟตอนด้วยที่สุด . หลังจาก 22 วัน ครึ่งของพืช คือ วันยาว ( 14 ชั่วโมง ) ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันก็ตาม และพื้นที่ใบ และคลอโรฟิลล์ฟลูออเรสเซนซ์ที่วัดกว่า 10 วัน พืชที่เป็นภาพลักษณ์ของโฆษณา Imager ( technologica จำกัด , Colchester , สหราชอาณาจักร ) พวกเขาเป็นสีเข้มเหมาะสำหรับ 30 นาทีก่อนวัดแรกเริ่มเรืองแสง ( ละ ) นี้ตามด้วยการวัดสูงสุดเข้มปรับเรืองแสง ( FM ) ที่เกิดจากแสงแฟลชสูง ( 6 , 349 μ mol โฟตอนด้วยที่สุดสำหรับ 0.8 วินาที ) มืดปรับประสิทธิภาพควอนตัมของ photosystem II คำนวณเป็น FV / FM ( FV = FM . ) ( Baker , 2008 ) พื้นที่ใบของภาพลักษณ์ของ Rosettes ถูกสกัดจากคลอโรฟิลล์ฟลูออเรสเซนซ์ภาพและมีการสอบเทียบกับใบดิสก์หรือพื้นที่