2.5. Isolation of fungi Five seedli

2.5. Isolation of fungi
Five seedlings per treatments were selected at random at each sampling period. Seedlings were removed from the growing medium and all soil removed from the roots. For each seedling, six needles and six roots were cut from the seedling using sterile scissors. Soil from around the seedling roots was also collected and a 1 g sub-sample processed by dilution plating to determine propagule loadings in the growing medium. Each root was cut into three pieces using sterile scissors. One root section per root sample from the different treatments was then treated as follows: a. Unwashed root: Each selected root section was cut in half using sterile scissors and placed onto quarter-strength PDA. b. Washed root: Each root section was washed in sterile distilled water for 1 min before being cut in half using sterile scissors and placed onto BSM. c. Sterile root: Each root section was washed in sterile distilled water for 1 min before being surface sterilised by soaking in ethanol (96%) for 1 min, followed by 10% sodium hypochlorite (0.04% active NaOCl) for 5 mins, before rinsing twice in sterile distilled water for 1 min. After sterilisation each root was cut in half using sterile scissors and placed onto BSM. Needle samples: The six needles from each seedling were surface sterilised as described above, cut into three pieces using sterile scissors and placed onto BSM. All BSM plates were sealed with Parafilm (Pechiney Plastic Packaging Company, Chicago, IL) and incubated at 20 C for 10– 14 days. Developing colonies that appeared to be Beauveria sp. were then subcultured onto new BSM plates which were incubated at 20 C. The identity of Beauveria spp. colonies was confirmed by visual examination of conidiating cultures.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 การแยกเชื้อรา Five seedlings per treatments were selected at random at each sampling period. Seedlings were removed from the growing medium and all soil removed from the roots. For each seedling, six needles and six roots were cut from the seedling using sterile scissors. Soil from around the seedling roots was also collected and a 1 g sub-sample processed by dilution plating to determine propagule loadings in the growing medium. Each root was cut into three pieces using sterile scissors. One root section per root sample from the different treatments was then treated as follows: a. Unwashed root: Each selected root section was cut in half using sterile scissors and placed onto quarter-strength PDA. b. Washed root: Each root section was washed in sterile distilled water for 1 min before being cut in half using sterile scissors and placed onto BSM. c. Sterile root: Each root section was washed in sterile distilled water for 1 min before being surface sterilised by soaking in ethanol (96%) for 1 min, followed by 10% sodium hypochlorite (0.04% active NaOCl) for 5 mins, before rinsing twice in sterile distilled water for 1 min. After sterilisation each root was cut in half using sterile scissors and placed onto BSM. Needle samples: The six needles from each seedling were surface sterilised as described above, cut into three pieces using sterile scissors and placed onto BSM. All BSM plates were sealed with Parafilm (Pechiney Plastic Packaging Company, Chicago, IL) and incubated at 20 C for 10– 14 days. Developing colonies that appeared to be Beauveria sp. were then subcultured onto new BSM plates which were incubated at 20 C. The identity of Beauveria spp. colonies was confirmed by visual examination of conidiating cultures.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การแยกเชื้อรา
ห้าต้นกล้าต่อการรักษาที่ได้รับการคัดเลือกโดยการสุ่มในแต่ละรอบระยะเวลาการเก็บตัวอย่าง ต้นกล้าที่ถูกถอดออกจากสื่อที่เติบโตและดินทั้งหมดถูกลบออกจากราก สำหรับต้นกล้าแต่ละหกเข็มและหกรากถูกตัดออกจากต้นกล้าโดยใช้กรรไกรตัดผ่านการฆ่าเชื้อ ดินจากรอบ ๆ รากของต้นกล้ายังถูกเก็บรวบรวมและ 1 กรัมย่อยตัวอย่างการประมวลผลโดยการชุบเจือจางเพื่อตรวจสอบแรง propagule ในสื่อที่เติบโต รากแต่ละถูกตัดออกเป็นสามชิ้นโดยใช้กรรไกรตัดผ่านการฆ่าเชื้อ ส่วนหนึ่งรากต่อตัวอย่างรากจากการรักษาที่แตกต่างกันได้รับการรักษาแล้วดังต่อไปนี้: รากไม่เคยอาบน้ำแต่ละส่วนรากที่เลือกถูกตัดในช่วงครึ่งปีโดยใช้กรรไกรฆ่าเชื้อและวางไว้บน PDA ไตรมาสแรง ข รากล้าง: ส่วนรากแต่ละถูกล้างในน้ำกลั่นปลอดเชื้อเป็นเวลา 1 นาทีก่อนที่จะถูกตัดในช่วงครึ่งปีโดยใช้กรรไกรฆ่าเชื้อและวางไว้บน BSM ค รากหมัน: ส่วนรากแต่ละถูกล้างในน้ำกลั่นปลอดเชื้อเป็นเวลา 1 นาทีก่อนที่จะถูกฆ่าเชื้อพื้นผิวโดยการแช่ในเอทานอล (96%) เป็นเวลา 1 นาทีตามด้วยโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 10% (0.04% ที่ใช้งาน NaOCl) เป็นเวลา 5 นาทีก่อนที่จะล้างครั้งที่สอง ในน้ำกลั่นปลอดเชื้อเป็นเวลา 1 นาที หลังจากที่ฆ่าเชื้อรากแต่ละคนถูกตัดในช่วงครึ่งปีโดยใช้กรรไกรฆ่าเชื้อและวางไว้บน BSM ตัวอย่างเข็ม: หกเข็มจากต้นกล้าแต่ละพื้นผิวฆ่าเชื้อตามที่อธิบายไว้ข้างต้นตัดเป็นสามชิ้นโดยใช้กรรไกรฆ่าเชื้อและวางไว้บน BSM แผ่น BSM ทั้งหมดถูกปิดผนึกด้วย Parafilm (Pechiney บริษัท บรรจุภัณฑ์พลาสติก, Chicago, IL) และบ่มที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 14 วัน การพัฒนาอาณานิคมที่ดูเหมือนจะเป็น Beauveria SP ได้รับเชื้อแล้วใส่ลงในจาน BSM ใหม่ซึ่งได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียสตัวตนของเอสพีพี Beauveria อาณานิคมได้รับการยืนยันจากการตรวจสอบภาพของวัฒนธรรม conidiating

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การแยกเชื้อรา
5 ต้นต่อพื้นที่ คือเลือกที่สุ่มในตัวอย่างแต่ละงวด ต้นกล้าถูกถอดออกจากการเติบโตปานกลาง และดินออกจากราก สำหรับแต่ละเมล็ด หกเข็ม และหก รากถูกตัดจากต้นใช้กรรไกรที่ฆ่าเชื้อแล้วจากดินรอบรากยังรวบรวมและประมวลผลโดยการเจือจางตัวอย่างย่อย 1 กรัม ชุบเพื่อกำหนดภาระในส่วนขยายพันธุ์ที่เติบโตปานกลาง แต่ละรากถูกตัดเป็น 3 ชิ้น ใช้กรรไกรที่ฆ่าเชื้อแล้ว หนึ่งส่วนต่อรากรากตัวอย่างจากการรักษาที่แตกต่างกันก็ปฏิบัติดังนี้ : A . รากผ่าน :เลือกแต่ละส่วนรากถูกตัดครึ่ง ใช้กรรไกรที่ฆ่าเชื้อและวางลงบน PDA แรงไตรมาส B . ล้างรากแต่ละรากส่วนล้างฆ่าเชื้อน้ำกลั่น 1 นาทีก่อนที่จะถูกตัดครึ่ง ใช้กรรไกรฆ่าเชื้อและวางลงบนเรา . C . เป็นหมัน รากแต่ละรากส่วนล้างฆ่าเชื้อน้ำกลั่น 1 นาทีก่อนที่จะถูกผิว sterilised โดยการแช่ในแอลกอฮอล์ ( 96% ) เป็นเวลา 1 นาที ตามด้วย 10% โซเดียมไฮโปคลอไรต์ ( 0.04 % ปราดเปรียวไม่ระบุ ) สำหรับ 5 นาทีก่อนที่จะล้างสองครั้งเป็นหมันน้ำกลั่น 1 นาที หลังจาก sterilisation แต่ละรากถูกตัดครึ่งด้วยกรรไกร ปลอดเชื้อและวางลงบนเรา . ตัวอย่างเข็ม :หกเข็ม จากแต่ละเมล็ดมีพื้นผิว sterilised ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ใช้กรรไกรตัดเป็น 3 ชิ้น เป็นหมัน และวางลงบนเรา . BSM แผ่นทั้งหมดถูกผนึกไว้ด้วย ( pechiney พาราฟิล์มพลาสติก บริษัท บรรจุภัณฑ์ , ชิคาโก , อิลลินอยส์ ) และบ่มที่อุณหภูมิ 20 C 10 - 14 วัน สร้างอาณานิคมที่ปรากฏเป็นบิวเวอร์เรีย .แล้วลงใหม่ subcultured BSM จานที่อุณหภูมิ 20 องศาเซลเซียส เอกลักษณ์ของบิวเวอเรียและอาณานิคมที่ได้รับการยืนยันโดยการตรวจสอบภาพจาก conidiating วัฒนธรรม