2.6. Estimation of DNA damage in mu

2.6. Estimation of DNA damage in mussel hemocytes (in vitro and in vivo studies) with the use of alkaline single-cell gel electrophoresis (Comet assay) method

Hemocytes of leachate-exposed mussels (in vivo exposure to 0.01 and 0.1%, v/v of leachate), as well as leachate-treated hemocytes (in vitro exposure to 0.01, 0.1, 0.2, 0.5 and 1%, v/v) were resuspended in 180 μL of 1% low-melting-point agarose (LMA) in Kenny's salt solution (0.4 M NaCl, 9 mM KCl, 0.7 mM K2HPO4, 2 mM NaHCO3), layered on glass slides coated with 200 μL of 2% normal-melting-point-agarose (NMA) in TAE solution (40 mM Tris–acetate, 1 mM EDTA), and covered with a coverslip. The aforementioned process was repeated 4 times and thereafter the alkaline single-cell gel electrophoresis (Comet assay) method was performed [37] (see also SM 2.6), in order to investigate DNA damage. In all cases, cell viability measured with the use of Eosin Y exclusion test, was almost 80%, which is considered appropriate for conducting Comet analysis [38].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การประเมินความเสียหายของดีเอ็นเอในหอย hemocytes (ศึกษาในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลอง) ด้วยการใช้เซลล์อัลคาไลน์เดียวเจวิธี electrophoresis (วิเคราะห์ดาวหาง)Hemocytes สัมผัส leachate ภู่ (ในสัตว์ทดลองสัมผัสกับ 0.01 และ 0.1%, v/v ของ leachate), ตลอดจนรักษา leachate hemocytes (สัมผัสใน 0.01, 0.1, 0.2, 0.5 และ 1%, v/v) มี resuspended ใน μL 180 ของ 1% ต่ำละลายจุด agarose (LMA) ในโซลูชันของเคนนีเกลือ (0.4 M NaCl, 9 mM KCl, 0.7 mM K2HPO4, 2 มม. NaHCO3), ชั้นบนกระจกสไลด์ที่เคลือบ ด้วย μL 200 ของ 2% ปกติละลายจุด-agarose (NMA) ในโซลูชันเต้ (40 mM ตรี – acetate , 1 mM EDTA), และ coverslip เป็น กระบวนการดังกล่าวถูกทำซ้ำ 4 ครั้ง และหลังจากนั้นวิธี electrophoresis (ดาวหาง assay) อัลคาไลน์เซลล์เดียวเจก็ทำ [37] (ดู SM 2.6), การตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอ ในทุกกรณี ชีวิตเซลล์โดยใช้การทดสอบแยก Eosin Y เกือบ 80% ซึ่งเป็นที่เหมาะสมสำหรับการทำการวิเคราะห์ดาวหาง [38]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การประเมินความเสียหายของดีเอ็นเอในเซลล์เม็ดเลือดหอยแมลงภู่ (ในหลอดทดลองและในการศึกษาวิฟ) ที่มีการใช้เจลอิเลเซลล์เดียวอัลคาไลน์ (การทดสอบดาวหาง) วิธีเม็ดเลือดของหอยน้ำชะขยะสัมผัส(การสัมผัสในร่างกาย 0.01 และ 0.1% ปริมาตร / ปริมาตรของ น้ำชะขยะ) เช่นเดียวกับเซลล์เม็ดเลือดน้ำชะขยะที่ได้รับ (ในการเปิดรับการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ 0.01, 0.1, 0.2, 0.5 และ 1% v / v) ถูก resuspended ใน 180 ไมโครลิตร 1% ต่ำจุดหลอมเหลว agarose (LMA) เกลือของเคนนี วิธีการแก้ปัญหา (0.4 M NaCl, 9 มิลลิ KCl 0.7 มิลลิ K2HPO4 2 มิลลิ NaHCO3) ชั้นบนสไลด์แก้วเคลือบด้วย 200 ไมโครลิตร 2% ปกติละลายจุด agarose (NMA) ในการแก้ปัญหา TAE (40 มิลลิ Tris-อะซิเตท, 1 มิลลิ EDTA) และปกคลุมด้วย coverslip กระบวนการดังกล่าวซ้ำ 4 ครั้งและหลังจากนั้นข่าวคราวเซลล์เดียวอัลคาไลน์ (ดาวหางทดสอบ) ได้ดำเนินการวิธีการ [37] (เห็นเอสเอ็ม 2.6) เพื่อที่จะตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอ ในทุกกรณีที่มีศักยภาพของเซลล์วัดที่มีการใช้ Eosin Y ทดสอบการยกเว้นเป็นเกือบ 80% ซึ่งถือว่าเหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์ดาวหาง [38]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การประเมินความเสียหายของดีเอ็นเอในหอยแมลงภู่ ( เม็ดเลือดในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลองศึกษา ) ด้วยการใช้อัลคาไลน์เซลล์เดียว gel electrophoresis ( comet assay ) วิธี

ของเม็ดเลือดน้ำหอย ( โดยเปิดรับแสง 0.01 และ 0.1 เปอร์เซ็นต์ ปริมาตร / ปริมาตรของน้ำชะมูลฝอย รวมทั้งน้ำในหลอดทดลองการรักษาเม็ดเลือด ( 0.01 , 0.1 , 0.2 , 0.5 และ 1 เปอร์เซ็นต์v / v ) resuspended 180 μลิตร 1 % ต่ำจุดหลอมเหลว ( ( LMA ) ในสารละลายเกลือของเคนนี่ ( 0.4 โมลาร์ , 9 มม. ปริมาณ 0.7 มม. k2hpo4 2 มิลลิเมตรโซเดียมไบคาร์บอเนต ) , ชั้นบนสไลด์แก้วเคลือบด้วยμ 200 ลิตร 2 % ปกติจุดหลอมเหลว ( ( นเ มเอ ใน แท วิธีแก้ปัญหา ( 40 มม. ) อะซิเตทโดย 1 mM EDTA ) และปกคลุมด้วยปิดสไลด์ .กระบวนการดังกล่าวถูกซ้ำ 4 ครั้งและหลังจากนั้นด่าง electrophoresis เจลเซลล์เดียว ( ดาวหางวิเคราะห์วิธีการแสดง [ 37 ] ( ดู SM 2.6 ) เพื่อตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอ ในทุกกรณี , เซลล์วัดที่มีการใช้ทดสอบ eosin y ข้อยกเว้นเกือบ 80% ซึ่งถือว่าเหมาะสมสำหรับการดำเนินการวิเคราะห์ [ ดาวหาง 38

]