Spin column-based nucleic acid puri

Spin column-based nucleic acid purification is a solid phase extraction method to quickly purify nucleic acids. This method relies on the fact that nucleic acid will bind to the solid phase of silica under certain conditions.

The stages of the method are:[1][2]

Lyse – The cells of a sample are broken open with a lysis procedure.
Bind – A buffer solution is then added to the sample along with ethanol or isopropanol. This forms the binding solution. The binding solution is transferred to a spin column and the column is put in a centrifuge. The centrifuge forces the binding solution through a silica gel membrane that is inside the spin column. If the pH and salt concentration of the binding solution are optimal, the nucleic acid will bind to the membrane as the solution passes though.
Wash – The flow-through is removed and a wash buffer is added to the column. The column is put in a centrifuge again, forcing the buffer through the membrane. This washes any remaining impurities from the membrane, leaving only the nucleic acid bound to the silica gel.
Elute – The wash buffer is removed and an elution buffer (or simply water) is added to the column. The column is put in a centrifuge again, forcing the buffer through the membrane. The elution buffer removes the nucleic acid from the membrane and it is collected from the bottom of the column.
Even prior to the major techniques employed today it was known that in the presence of chaotropic agents, such as sodium iodide or sodium perchlorate, DNA binds to silica, glass particles or to unicellular algae called diatoms which shield their cell walls with silica. This property was used to purify nucleic acid using glass powder or silica beads under alkaline conditions. [3] This was later improved used guanidinium thiocyanate or guanidinium hydrochloride as the chaotropic agent.[4] The use of glass beads was later changed to silica gel.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หมุนตามคอลัมน์เอ็นฟอกคือ วิธีการแยกเฟสของแข็งต้องทำกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็ว วิธีนี้อาศัยความจริงที่ว่ากรดนิวคลีอิกจะผูกกับเฟสของแข็งของซิลิก้าภายใต้เงื่อนไขบางประการมีขั้นตอนของวิธีการ: [1] [2]Lyse – ตัวอย่างเซลล์ที่แบ่งเปิด ด้วย lysis กระบวนงานผูก – อย่างกับเอทานอลหรือ isopropanol แล้วเพิ่มปัญหาบัฟเฟอร์ นี้รูปแบบการแก้ปัญหารวม โซลูชั่นรวมจะถูกโอนย้ายไปยังคอลัมน์หมุน และคอลัมน์จะใส่ในเครื่องหมุนเหวี่ยง เครื่องหมุนเหวี่ยงบังคับโซลูชันผูกผ่านเมมเบรนซิลิก้าเจลที่อยู่ภายในคอลัมน์หมุน ถ้าค่า pH และความเข้มข้นเกลือรวมโซลูชันเหมาะสม กรดนิวคลีอิกจะผูกเข้ากับเมมเบรนเป็นการแก้ปัญหาผ่านไปแม้ว่าล้าง – ไหลผ่านออกไป และล้างบัฟเฟอร์เพิ่มคอลัมน์ คอลัมน์ที่อยู่ในเครื่องหมุนเหวี่ยงอีก บังคับให้บัฟเฟอร์ที่ผ่านเมมเบรน Washes นี้สิ่งสกปรกใด ๆ ที่เหลือจากเมมเบรน ปล่อยกรดนิวคลีอิกเท่ากับซิลิก้าเจลElute – ล้างบัฟเฟอร์จะถูกเอาออก และเพิ่มการ elution บัฟเฟอร์ (หรือเพียงแค่น้ำ) ในคอลัมน์ คอลัมน์ที่อยู่ในเครื่องหมุนเหวี่ยงอีก บังคับให้บัฟเฟอร์ที่ผ่านเมมเบรน บัฟเฟอร์ elution เอากรดนิวคลีอิกจากเมมเบรน และรวบรวมจากด้านล่างของคอลัมน์แม้ก่อนเทคนิคสำคัญจ้างวันนี้ถูกเรียกว่า ในต่อหน้าของตัวแทน chaotropic เช่นโซเดียมไอโอไดด์หรือโซเดียม perchlorate ดีเอ็นเอ binds หรือ unicellular สาหร่ายเรียกว่า diatoms ซึ่งป้องกันผนังเซลล์ของพวกเขากับซิลิกาซิลิ ก้า อนุภาคแก้ว คุณสมบัตินี้ถูกใช้เพื่อบริสุทธิ์ใช้แก้วซิลิกาหรือผงประคำสภาวะด่างกรดนิวคลีอิก [3] นี้ได้ในภายหลัง guanidinium ปรับใช้ thiocyanate หรือ guanidinium ไฮโดรคลอไรด์เป็นตัวแทน chaotropic[4] การใช้ลูกปัดแก้วในภายหลังได้ถูกเปลี่ยนแปลงเป็นซิลิก้าเจล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปั่นคอลัมน์ที่ใช้กรดนิวคลีอิกบริสุทธิ์เป็นวิธีการสกัดสารในเฟสของแข็งอย่างรวดเร็วบริสุทธิ์กรดนิวคลีอิก วิธีการนี้จะขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่ากรดนิวคลีอิกจะผูกกับของแข็งของซิลิกาภายใต้เงื่อนไขบาง. ขั้นตอนของวิธีการที่มี: [1] [2] . Lyse - เซลล์ของกลุ่มตัวอย่างจะแตกเปิดที่มีขั้นตอนการสลายผูก - สารละลายบัฟเฟอร์จะถูกเพิ่มแล้วกับตัวอย่างพร้อมกับเอทานอลหรือ isopropanol นี้เป็นวิธีการแก้ปัญหาที่มีผลผูกพัน วิธีการแก้ปัญหาที่มีผลผูกพันจะถูกโอนไปยังคอลัมน์หมุนและคอลัมน์จะใส่ในเครื่องหมุนเหวี่ยง centrifuge บังคับให้แก้ปัญหาที่มีผลผูกพันผ่านเมมเบรนซิลิกาเจลที่อยู่ภายในคอลัมน์หมุน ถ้าค่า pH และความเข้มข้นของเกลือของการแก้ปัญหาที่ดีที่สุดจะมีผลผูกพัน, กรดนิวคลีอิกจะผูกกับเมมเบรนเป็นวิธีแก้ปัญหาที่ผ่านมาแม้ว่า. ล้าง - ไหลผ่านจะถูกลบออกและล้างบัฟเฟอร์จะถูกเพิ่มในคอลัมน์ คอลัมน์จะใส่ในเครื่องปั่นแยกอีกครั้งบังคับให้บัฟเฟอร์ผ่านเมมเบรน นี้ล้างสิ่งสกปรกใด ๆ ที่เหลือจากเยื่อเหลือเพียงกรดนิวคลีอิกผูกพันกับซิลิกาเจล. ชะ - บัฟเฟอร์ล้างออกและบัฟเฟอร์ชะ (หรือน้ำ) จะถูกเพิ่มในคอลัมน์ คอลัมน์จะใส่ในเครื่องปั่นแยกอีกครั้งบังคับให้บัฟเฟอร์ผ่านเมมเบรน บัฟเฟอร์ชะเอากรดนิวคลีอิกจากเยื่อหุ้มและเป็นที่เก็บรวบรวมมาจากด้านล่างของคอลัมน์. แม้ก่อนที่จะมีเทคนิคที่สำคัญการจ้างงานในวันนี้มันเป็นที่รู้จักกันว่าในการปรากฏตัวของตัวแทน chaotropic เช่นโซเดียมไอโอไดด์หรือเปอร์คลอเรตโซเดียมผูกดีเอ็นเอ เพื่อซิลิกาอนุภาคแก้วหรือสาหร่ายเซลล์เดียวที่เรียกว่าไดอะตอมซึ่งโล่ผนังเซลล์ของพวกเขาด้วยซิลิกา สถานที่แห่งนี้ถูกนำมาใช้ในการชำระล้างกรดนิวคลีอิกโดยใช้ลูกปัดแก้วหรือผงซิลิกาภายใต้เงื่อนไขที่อัลคาไลน์ [3] ซึ่งต่อมาก็มีการปรับปรุงการใช้ thiocyanate Guanidinium หรือไฮโดรคลอไร Guanidinium เป็นตัวแทน chaotropic. [4] การใช้ลูกปัดแก้วต่อมาเปลี่ยนเป็นซิลิกาเจล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คอลัมน์หมุนตามเป็นกรดนิวคลีอิกให้บริสุทธิ์ของแข็งเฟสด้วยวิธีการได้อย่างรวดเร็วทำให้ กรดนิวคลีอิก วิธีนี้ต้องอาศัยข้อเท็จจริงที่ว่า กรดนิวคลีอิกจะผูกกับโซลิดเฟสของซิลิกาภายใต้เงื่อนไขบางอย่าง

ขั้นตอนของวิธี : [ 1 ] [ 2 ]

) ทำให้เซลล์ของตัวอย่างจะแตกเปิดด้วยการสลาย
ขั้นตอนการและสารละลายบัฟเฟอร์ไว้แล้วเพิ่มตัวอย่างพร้อมกับเอทานอลหรือไอโซโพรพานอล . นี้รูปแบบโซลูชั่นที่มีผลผูกพัน โซลูชั่นการโอนไปยังคอลัมน์หมุนและคอลัมน์ คือ ใส่ในเครื่อง . เครื่องหมุนบังคับผูกพันผ่านสารละลายซิลิกาเจลเมมเบรนที่อยู่ปั่นคอลัมน์ ถ้า pH และความเข้มข้นของสารละลายเกลือรวมที่ดีที่สุดกรดนิวคลีอิกจะผูกกับเมมเบรนเป็นโซลูชั่นที่ผ่านแม้ว่า .
ล้างและ flow-through ออกและล้างบัฟเฟอร์จะถูกเพิ่มลงในคอลัมน์ คอลัมน์ คือ ใส่ในเครื่องอีก บังคับให้บัฟเฟอร์ผ่านเยื่อแผ่น นี้ล้างสิ่งสกปรกที่เหลือจากเยื่อเหลือเพียงกรดนิวคลีอิก
ผูกพันกับซิลิกาเจลelute –ล้างบัฟเฟอร์จะถูกลบออกและการใช้บัฟเฟอร์ ( หรือเพียงแค่น้ำ ) จะถูกเพิ่มลงในคอลัมน์ คอลัมน์ คือ ใส่ในเครื่องอีก บังคับให้บัฟเฟอร์ผ่านเยื่อแผ่น การใช้บัฟเฟอร์เอากรดนิวคลีอิกจากเยื่อและจะถูกเก็บรวบรวมจากด้านล่างของคอลัมน์
แม้กระทั่งก่อนที่จะใช้เทคนิคที่สำคัญวันนี้เป็นที่รู้จักกันในการแสดงตนของ chaotropic ตัวแทน เช่น โซเดียมสารประกอบไอโอไดด์หรือโซเดียม Perchlorate ดีเอ็นเอ ก็ให้แก้วซิลิกา , อนุภาคหรือสิ่งมีชีวิตเซลล์เดียวที่เรียกว่าสาหร่ายไดอะตอมซึ่งบังผนังเซลล์ของพวกเขาด้วยซิลิกา คุณสมบัตินี้ถูกใช้ในการฟอก กรดนิวคลีอิก โดยใช้ผงหรือเม็ดแก้วซิลิกาภายใต้สภาวะที่เป็นด่าง[ 3 ] นี้ภายหลังการปรับปรุงใช้ guanidinium ไทโอไซยาเนต หรือ guanidinium ไฮโดรคลอไรด์เป็นตัวแทน chaotropic . [ 4 ] การใช้ลูกปัดแก้วภายหลังเปลี่ยนซิลิกาเจล