2. Materials and methods2.1. Bacter

2. Materials and methods
2.1. Bacteriophage preparation
The bacteriophage product used in our studies is ListShield™, a
cocktail of six lytic bacteriophages: LIST-36 (ATCC # PTA-5376),
LMSP-25 (ATCC # PTA-8353). LMTA-34 (ATCC # PTA-8354),
LMTA-57 (ATCC # PTA-8355), LMTA-94 (ATCC # PTA-8356),
LMTA-148 (ATCC # PTA-8357). The preparation complies with
FDA food additive regulations, for direct application to meat and
poultry products that meet the ready-to-eat definition (21 CFR x
172.785). ListShield™ lots 0111E040222, 0112B240183,
0113H150142, 0108A040159, 0109B060109, and 10022003A (all ca.
1 1010 plaque forming units (PFU)/mL) were used during this
study. The titers of these lots were determined using the agar layer
method (Adams, 1959). The lots were diluted appropriately, as
indicated in relevant sections below, before applying onto foods.
2.2. Media and reagents
L. monocytogenes were grown in LuriaeBertani (LB), Miller agar
and broth (Neogen). Oxford agar and Oxford Listeria Selective
Supplement (Fluka Biochemica) were used to plate and count
L. monocytogenes colonies. Peptone water (Becton, Dickinson and
Co.) was used to suspend food samples except for the experiments
at the salmon production facility where samples were suspended in
Buffered Listeria Enrichment Broth (BLEB) (Acumedia Manufacturers,
Inc.). For experiments with apples, an antioxidant/antibrowning
solution (AS) (80 g/L), a proprietary blend that included
vitamin c and calcium, was used (supplied from a fresh cut apple
producer).
2.3. Bacterial strains and inoculum preparation
A single strain culture of Lm320 (ATCC 19115, serotype 4b) was
used in studies on lettuce, and Lm376, an environmental strain
obtained from a Scottish smoked salmon facility, was used in the
studies at the same smoked salmon production facility. To test the
efficacy of ListShield™ when challenged with a cocktail of bacteria,
a 1:1:1 mixture of three L. monocytogenes strains, Lm68 (serotype 1/
2b), Lm82 (serotype 1/2a) and Lm320 (ATCC 19115, serotype 4b)
was used in the apple, cheese, smoked salmon, and frozen entrees
studies. The strains were grown in LB media at 37 ± 2
C for up to
24 h to a target concentration of ca. 108 colony forming units (CFU)/
mL. Challenge cultures were diluted in LB for each experiment as
necessary to achieve a specific contaminating dose specified in the
respective sections below and unless otherwise stated, the volume
of bacteria added was between 0.5 mL and 1 mL.
2.4. ListShield™ application
All foods were treated by application of either phosphate buffered
saline (PBS) or sterile water, for control samples, or ListShield™
for test samples. ListShield™ was diluted with sterile
water or PBS, according to the control treatment used in the
respective experiment. In all instances, application was via spraying,
using a spray gun (Badger Air-Brush Co., Franklin Park, IL; Basic
Spray Gun, model #250-2).
2.5. Effect of ListShield™ on experimentally contaminated lettuce
Long-leaf green lettuce was obtained from a local grocery store
in Baltimore, MD. Nine 100 g portions of lettuce were measured.
The L. monocytogenes innocula was applied onto the lettuce surfaces
at ca. 2 103 CFU/g of lettuce. The samples were covered
loosely and the bacteria were allowed to colonize the samples'
surfaces at room temperature for 60 min. All samples were treated
at the rate of 1 mL/100 g lettuce; the control group (three 100 g
samples) was treated with sterile water and the test groups (three
100 g samples each) were treated with ListShield™ at 1 107 PFU/g
or 1 108 PFU/g of lettuce. Following a 5 min incubation at room
temperature, three 25 g portions were cut from each group and
placed into sterile bags to which 225 mL of sterile peptone water
was added. The bags were hand mushed briefly and stomached
(Stomacher 400, Seward) for a approximately 30 s. The number of
viable L. monocytogenes in the samples was determined by plating
aliquots (0.1 mL and 0.5 mL) of the stomached lettuce/peptone
water mixture onto separate Oxford plates, containing Oxford Listeria
Selective Supplement, and incubated at 35 ± 2
C for 24 ± 2 h.
The resulting colonies were counted and the CFU/g was calculated
taking sample size and dilution into account.
Residual free phages were not removed from the homogenized
samples prior to bacterial enumeration; however, we believe that
the reductions observed were not due to residual phage. In that
context, the duration of our studies, from the time the food is
sampled, stomached and plated, was

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. แบคทีเตรียมแบคทีผลิตภัณฑ์ที่ใช้ในการศึกษาของเราเป็น ListShield ™ เป็นค็อกเทลของ bacteriophages lytic หก: 36 รายการ (ATCC #5376 PTA),LMSP-25 (ATCC # PTA-8353) (ATCC # PTA-8354), 34-LMTALMTA-57 (ATCC # PTA-8355) LMTA-94 (ATCC # PTA-8356),LMTA-148 (ATCC # PTA-8357) การจัดทำสอดคล้องกับอาหารสามารถข้อบังคับของ FDA สำหรับโปรแกรมประยุกต์โดยตรงกับเนื้อ และผลิตภัณฑ์สัตว์ปีกที่ตรงกับข้อกำหนดพร้อมกิน (21 CFR x172.785) . ListShield ™มากมาย 0111E040222, 0112B2401830113H 150142, 0108A040159, 0109B060109 และ 10022003A (ca ทั้งหมดหินปูน 1 1010 เป็นหน่วย (PFU) /mL) ถูกใช้ในระหว่างนี้ศึกษา Titers ของจำนวนมากเหล่านี้ถูกกำหนดโดยใช้ชั้น agarวิธี (Adams, 1959) จำนวนมากถูกทำให้เหมาะสม เป็นระบุไว้ในส่วนที่เกี่ยวข้องด้านล่าง ก่อนที่จะใช้ลงในอาหาร2.2 การสื่อและ reagentsL. monocytogenes ได้เติบโตขึ้นใน LuriaeBertani (ปอนด์), มิลเลอร์ agarและซุป (Neogen) Agar ออกซ์ฟอร์ดและออลิเลือกออกซ์ฟอร์ดอาหารเสริม (Fluka Biochemica) ใช้จานและนับL. monocytogenes อาณานิคม น้ำ peptone (Becton สัน และจำกัด) ใช้ในการระงับตัวอย่างอาหารยกเว้นการทดลองในที่สถานที่ผลิตปลาแซลมอนซึ่งตัวอย่างถูกหยุดชั่วคราวในออลิถูกบัฟเฟอร์ขอซุป (BLEB) (ผู้ผลิต AcumediaInc.) สำหรับการทดลองกับแอปเปิ้ล สารต้านอนุมูล อิสระ/antibrowningโซลูชั่น (เป็น) (80 g/L), ฟทร์แวร์ผสมผสานที่รวมวิตามินซีและแคลเซียม ใช้ (มาจากแอปเปิ้ลที่ตัดสดโปรดิวเซอร์)2.3. แบคทีเรียสายพันธุ์และการเตรียม inoculumวัฒนธรรมเดียวต้องใช้ของ Lm320 (ATCC 19115, serotype 4b) ได้ใช้ในการศึกษาในผักกาดหอม Lm376 ต้องใช้สิ่งแวดล้อมรับจากสกอตแลนด์สินเชื่อปลาแซลมอนรมควัน ใช้ในการการศึกษาที่เหมือนรมควันผลิตปลาแซลมอน การทดสอบประสิทธิภาพของ ListShield ™เมื่อท้าทายกับค็อกเทลของแบคทีเรีย1:1:1 ผสมสาม L. monocytogenes สายพันธุ์ Lm68 (serotype 1 /2b), Lm82 (serotype 1/2a) และ Lm320 (ATCC 19115, serotype 4b)ใช้ ในแอปเปิ้ล ชีส ปลาแซลมอนรมควัน entrees แช่แข็งการศึกษา สายพันธุ์มีปลูกในสื่อปอนด์ที่ 37 ± 2 C สำหรับขึ้น24 ชมเพื่อความเข้มข้นเป้าหมายของ ca 108 โคโลเป็นหน่วย (CFU) /มลท้าทายวัฒนธรรมถูกทำให้เจือจางปอนด์สำหรับแต่ละการทดลองเป็นจำเป็นต้องให้ยา contaminating เฉพาะที่ระบุในแบบส่วนด้านล่างตามลำดับและนอก จากที่ระบุ ไว้ เสียงของแบคทีเรียที่เพิ่มขึ้นระหว่าง 0.5 mL 1 mL2.4. ListShield ™แอพลิเคชันอาหารทั้งหมดได้รับการรักษา โดยโปรแกรมประยุกต์ของฟอสเฟตทั้ง bufferedน้ำเกลือ (PBS) หรือกระบอกน้ำ สำหรับตัวอย่างควบคุม ListShield ™สำหรับตัวอย่างทดสอบ ListShield ™ถูกผสมกับกอซน้ำหรือ PBS ตามการรักษาควบคุมที่ใช้ในการการทดลองที่เกี่ยวข้อง ในอินสแตนซ์ทั้งหมด โปรแกรมประยุกต์ไม่ผ่านพ่นใช้พ่น (บริษัทอากาศแปรง Badger แฟรงคลินพาร์ค IL พื้นฐานสเปรย์ปืน รุ่น #250-2)2.5. ผลของ ListShield ™ experimentally ปนเปื้อนผักกาดหอมผักกาดเขียวใบยาวได้รับจากร้านค้าท้องถิ่นในบัลติมอร์ MD. ส่วนระดับ 9 100 กรัมของผักกาดหอมที่วัดใช้ L. monocytogenes innocula บนผิวผักกาดหอมที่ ca. 2 103 CFU/g ของผักกาดหอม ตัวอย่างครอบคลุมอ้อม และแบคทีเรียได้รับอนุญาตให้ colonize ของตัวอย่างพื้นผิวที่อุณหภูมิห้องใน 60 นาที ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการรักษาในอัตรา 1 มล/100 กรัมผักกาดหอม กลุ่มควบคุม (สาม 100 กรัมตัวอย่าง) ได้รับกระบอกน้ำและกลุ่มทดสอบ (สาม100 g ตัวอย่างแต่ละ) ได้รับการรักษา ด้วย ListShield ™ที่ 1 107 PFU gหรือ PFU 1 108 g ของผักกาดหอม คณะทันตแพทยศาสตร์ 5 นาทีห้องต่อไปนี้อุณหภูมิ 3 25 g บางส่วนถูกตัดจากแต่ละกลุ่ม และอยู่ในมลที่ 225 น้ำ peptone กอซกอซถุงมีเพิ่ม กระเป๋าถูกมือ mushed สั้น ๆ และ stomached(แผงประดับหน้าอก 400 เวิร์ด) สำหรับการประมาณ 30 s จำนวนได้ L. monocytogenes ในตัวอย่างกำหนด โดยชุบaliquots (0.1 มล.และ 0.5 mL) ของผักกาด หอม/peptone stomachedผสมน้ำลงบนแผ่นออกซ์ฟอร์ดแยก ประกอบด้วยออลิออกซ์ฟอร์ดงานเสริม และ incubated ที่ 35 ± 2 C สำหรับ 24 ± 2 hอาณานิคมได้ถูกตรวจนับ และคำนวณ CFU/gใช้ขนาดตัวอย่างและเจือจางลงในบัญชีPhages เหลือฟรีก็ไม่เอาออกจากที่ homogenized เป็นกลุ่มตัวอย่างก่อนที่จะแจงนับแบคทีเรีย อย่างไรก็ตาม เราเชื่อว่าการลดที่สังเกตไม่ได้เนื่องจากเหลือ phage ในที่บริบท ระยะเวลาการศึกษาของเรา จากเวลาอาหารตัวอย่าง stomached และชุบ < นาที 7 ในความคมชัด เป็น phageวงจร lytic เวลา 20e40 นาทีให้เสร็จสมบูรณ์ ดังนั้น มีจะไม่มีเวลาเพียงพอสำหรับการจำลองแบบ phage ในระหว่างการศึกษาของเรา (เช่นฟรีลอดจ์อินน์ Perera et al. / จุลชีววิทยาอาหาร 52 42e48 (2015) 43ความเข้มข้นของ phage จะไม่เพิ่มขึ้น) นอกจากนี้ ตัวอย่างอาหารมีข้อยกเว้นถึงสิบครั้งก่อนชุบ ลดเพิ่มเติมเข้มข้น phage ก่อนชุบ ข้อตกลงกับทฤษฎีนี้การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงที่อยู่ของส่วนที่เหลือจากphages ไม่มีเปลี่ยนแปลงจำนวน CFU กู้จากอาหาร matrixes ตรวจสอบ (Abuladze et al., 2008Sharma et al., 2009)2.6. ผลของ ListShield ™ชี experimentally ปนเปื้อนชียาก พาสเจอร์ไรส์ได้รับจากการผลิตนมในโคโลราโด ส่วน 600 g ของชีปนเปื้อนในทั้งหมดจัดการกับ ca 1 104 CFU/g ของชี และครอบคลุมซึ่ง ที่แบคทีเรียที่สามารถ colonize ตัวอย่างสำหรับห้อง 60 นาทีอุณหภูมิ ตัวอย่างชีถูกแบ่งออกเป็นสองส่วน 300 กรัมและได้รับการรักษาในอัตราของ 1 mL/100 g ของชี ตัวควบคุมกลุ่มที่รักษา ด้วย PBS และกลุ่มทดสอบถือว่ามี™ ListShield ในอัตรา PFU 1 108 g ของชีส ตัวอย่างดีครอบคลุม และ incubated ใน 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง สาม 25 gsamples were then cut from each group, placed into separate sterilebags, and stomached for approximately 30 s with 225 mL of sterilepeptone water. The remaining cheese was moved to 4
C for storageand sampled again, in triplicate, at 24 h and 96 h post treatment.The number of viable L. monocytogenes in the samples was determinedas above.2.7. Effect of ListShield™ on experimentally contaminated smokedsalmonCold smoked salmon was obtained from a local grocery store inBaltimore, MD. The challenge dose of bacteria was applied evenlyonto the top surface of three ca. 240 g portions of smoked salmon.The samples were covered loosely and the bacteria (1 103 CFU/g)were allowed to colonize the samples' surfaces for 60 min. Allsamples were treated at 0.2 mL/100 g salmon; the control groupwas treated with PBS and the treatment groups were treated withListShield™ at 9 105 PFU/g or 2 106 PFU/g. The samples werecovered and stored at 4
C for ca. 24 h. From each group, triplicate25 g samples of smoked salmon were cut and placed into sterilebags and stomached for approximately 60 s with 225 mL sterilepeptone water. The Oxford plates were incubated at 37 ± 1
C for48 ± 2 h and the number of viable L. monocytogenes in the sampleswas determined as above.2.8. Effect of ListShield™ on experimentally contaminated appleslicesWhole Gala apples were obtained from a fresh-cut apple producerin Washington. After being rinsed with tap water, appleswere air dried, weighed, cored, and cut into 8 slices using a manualfood corer/slicer. The average weight per slice was ca. 17 g. Threeslices of apple were not contaminated with bacteria and representthe untreated, uncontaminated control. The remaining slices wereevenly contaminated on all surfaces, except the skin side, with1 104 CFU/g apple. The bacteria were allowed to colonize theapple surfaces for 10 min. All samples were treated at a rate of0.1 mL/100 g apple and each group contained 9 slices; the controlgroup was treated with sterile water and the test groups weretreated with either AS, ListShield™ or ListShield™ diluted with AS.The phage was applied at a rate of 1.1 106 PFU/g. The sampleswere covered and stored at 4
C and three slices from each groupwere tested at 24 h, 48 h and 72 h post treatment. The three sliceswere placed into sterile bags and stomached for 60 s in 10 mLpeptone water. The number of viable L. monocytogenes for eachsample was determined by plating triplicate aliquots (0.1 mL) of thestomached apple/peptone water mixture onto separate Oxford agarplates, supplemented with Oxford Listeria Selective Supplement.The plates were incubated at 35 ± 2
C for 48 ± 4 h and the CFU/gwas counted as above.2.9. Effect of ListShield™ on frozen food entreesFrozen entree samples, in this case fully-cooked, prepackagedmeals served in-flight on airplanes, were received from themanufacturer in Maine. Frozen entrees containing mixture of beef,potatoes, broccoli, and tomato sauce were allowed to thaw for24 he48 h at 2e6
C. The entrees were contaminated at a rate of5 103 CFU/g, mixed thoroughly, and allowed to colonize for30 min at 4e6
C. Three entrees were treated with 2 mL of PBS andthree were treated with 2 mL of ListShield™ at a rate of1 107 PFU/g of meal. The entrees were placed at 4
e6
C for anadditional 30 min and then placed in the freezer for 24 ± 2 h. Thesamples were defrosted for 24 ± 2 h at 4e6
C and thoroughlymixed. Three 25 g samples were transferred into a sterile samplingbags from each of the six entrees and 10 mL of sterile peptone waterwas added to each bag and stomached for approximately 30 s. Thenumber of viable L. monocytogenes in each sample was determinedby plating 0.1 mL aliquots onto individual MOX agar plates andcolonies were counted following an incubation period of 24 ± 2 h at30 ± 2
C.2.10. Effect of ListShield™ on environmental L. monocytogenescontamination in a smoked salmon production facilityThe smoked salmon production facility, located in Scotland, wasthoroughly cleaned and disinfected one day before the study wasinitiated. On the day of the experiment, f

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 เตรียม bacteriophage
ผลิตภัณฑ์ bacteriophage ใช้ในการศึกษาของเราคือ ListShield
™เป็นค๊อกเทลหกlytic แบคทีเรีย: รายการ-36 (ATCC PTA-# 5376)
LMSP-25 (ATCC PTA-# 8353) LMTA-34 (ATCC PTA-# 8354)
LMTA-57 (ATCC PTA-# 8355) LMTA-94 (ATCC PTA-# 8356)
LMTA-148 (ATCC PTA-# 8357) ในการจัดทำสอดคล้องกับกฎระเบียบขององค์การอาหารและยาอาหารเสริมสำหรับการประยุกต์ใช้โดยตรงกับเนื้อสัตว์และผลิตภัณฑ์จากสัตว์ปีกที่ตรงตามความหมายที่พร้อมต่อการกิน(21 x CFR 172.785) ListShield ™จำนวนมาก 0111E040222, 0112B240183, 0113H150142, 0108A040159, 0109B060109 และ 10022003A (แคลิฟอร์เนียทั้งหมด1 1010 โล่ประกาศเกียรติคุณหน่วยขึ้นรูป (PFU) / มิลลิลิตร) ถูกนำมาใช้ในช่วงนี้การศึกษา titers จำนวนมากเหล่านี้ได้รับการพิจารณาโดยใช้ชั้นวุ้นวิธี(อดัมส์, 1959) จำนวนมากได้รับการปรับลดอย่างเหมาะสมตามที่ระบุไว้ในส่วนที่เกี่ยวข้องด้านล่างก่อนที่จะใช้ลงบนอาหาร. 2.2 สื่อและสารเคมีลิตร monocytogenes ปลูกใน LuriaeBertani (LB) มิลเลอร์วุ้นและน้ำซุป(Neogen) วุ้นฟอร์ดฟอร์ดและ Listeria เลือกอาหารเสริม(Fluka Biochemica) ถูกนำมาใช้จานและนับลิตร monocytogenes อาณานิคม น้ำเปปโตน (Becton ดิกคินสันและบริษัท ) ถูกใช้ในการระงับการอาหารยกเว้นสำหรับการทดลองที่โรงงานผลิตปลาแซลมอนที่ตัวอย่างที่ถูกระงับในBuffered Listeria การเพิ่มปริมาณน้ำซุป (bleb) (ผู้ผลิต Acumedia, Inc) สำหรับการทดลองกับแอปเปิ้ล, สารต้านอนุมูลอิสระ / antibrowning การแก้ปัญหา (AS) (80 กรัม / ลิตร) ซึ่งเป็นส่วนผสมที่รวมวิตามินซีและแคลเซียมถูกนำมาใช้(ที่ให้มาจากการตัดสดแอปเปิ้ลผู้ผลิต). 2.3 สายพันธุ์แบคทีเรียและการเตรียมหัวเชื้อวัฒนธรรมสายพันธุ์เดียวของ Lm320 (ATCC 19115, serotype 4b) ถูกนำมาใช้ในการศึกษาเกี่ยวกับผักกาดหอมและLm376, ความเครียดด้านสิ่งแวดล้อมที่ได้รับจากสก็อตรมควันโรงงานปลาแซลมอนที่ใช้ในการศึกษาที่ผลิตปลาแซลมอนรมควันเดียวกันสิ่งอำนวยความสะดวก เพื่อทดสอบประสิทธิภาพของ ListShield ™เมื่อถูกท้าทายด้วยค๊อกเทลของแบคทีเรีย, 1: 1: 1 ผสมสามสายพันธุ์ L. monocytogenes, Lm68 (serotype 1 / 2b) Lm82 (serotype 1 / 2a) และ Lm320 (ATCC 19115, serotype 4b) ถูกนำมาใช้ในแอปเปิ้ล, ชีส, แซลมอนรมควันและแช่แข็งอาหารจานศึกษา สายพันธุ์ที่ปลูกในสื่อ LB ที่ 37 ± 2 องศาเซลเซียสได้นานถึง24 ชั่วโมงกับความเข้มข้นของเป้าหมายแคลิฟอร์เนีย 108 หน่วยสร้างอาณานิคม (CFU) / มิลลิลิตร ท้าทายวัฒนธรรมถูกเจือจางใน LB สำหรับแต่ละการทดลองเป็นสิ่งที่จำเป็นเพื่อให้บรรลุการปนเปื้อนยาเฉพาะที่ระบุไว้ในส่วนที่เกี่ยวข้องด้านล่างและเว้นแต่จะระบุปริมาณของเชื้อแบคทีเรียที่เพิ่มอยู่ระหว่าง0.5 มิลลิลิตรและ 1 มล. 2.4 ListShield ™แอพลิเคชันทั้งหมดอาหารที่ได้รับการรักษาโดยการประยุกต์ใช้อย่างใดอย่างหนึ่งฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ(พีบีเอส) หรือน้ำหมันสำหรับตัวอย่างควบคุมหรือ ListShield ™สำหรับตัวอย่างทดสอบ ListShield ™ได้รับการฆ่าเชื้อเจือจางด้วยน้ำหรือพีบีเอสตามที่การควบคุมการรักษาที่ใช้ในการทดลองนั้น ในทุกกรณีการประยุกต์ใช้เป็นผ่านการฉีดพ่นโดยใช้ปืนฉีด (แบดเจอร์เครื่องแปรง Co. , แฟรงคลินพาร์ค, อิลลินอยส์; พื้นฐานปืนสเปรย์รุ่น# 250-2). 2.5 ผลของ ListShield ™บนผักกาดหอมปนเปื้อนทดลองยาวใบผักกาดหอมสีเขียวที่ได้รับจากร้านขายของชำในพื้นที่ในบัลติมอร์ เก้า 100 กรัมส่วนของผักกาดหอมวัด. ลิตร monocytogenes innocula ถูกนำมาใช้บนพื้นผิวผักกาดหอมที่แคลิฟอร์เนีย 2 103 โคโลนี / กรัมของผักกาดหอม กลุ่มตัวอย่างที่ถูกปกคลุมไปอย่างอิสระและแบคทีเรียที่ได้รับอนุญาตให้ตั้งรกรากตัวอย่าง'พื้นผิวที่อุณหภูมิห้องนาน60 นาที ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการรักษาในอัตรา 1 มิลลิลิตร / 100 กรัมผักกาดหอม; กลุ่มควบคุม (สาม 100 กรัมตัวอย่าง) ได้รับการรักษาด้วยน้ำหมันและกลุ่มการทดสอบ (สาม100 กรัมตัวอย่างแต่ละคน) ได้รับการรักษาด้วย ListShield ™ที่ 1 107 PFU / กรัมหรือ1 108 PFU / g ของผักกาดหอม หลังจากบ่ม 5 นาทีที่ห้องอุณหภูมิสาม25 กรัมส่วนที่ถูกตัดออกจากแต่ละกลุ่มและวางลงในถุงที่ผ่านการฆ่าเชื้อ225 มิลลิลิตรน้ำหมันเปปโตนถูกเพิ่มเข้ามา ถุงถูกมือ mushed สั้น ๆ และ stomached (Stomacher 400, เอิร์ด) สำหรับประมาณ 30 วินาที จำนวนของL. monocytogenes ทำงานได้ในตัวอย่างที่ถูกกำหนดโดยการชุบaliquots (0.1 มิลลิลิตรและ 0.5 มิลลิลิตร) ของ stomached ผักกาดหอม / เปปโตนน้ำผสมลงบนแผ่นฟอร์ดที่แยกต่างหากที่มีฟอร์ดListeria เลือกอาหารเสริมและบ่มที่ 35 ± 2 องศาเซลเซียสสำหรับ . 24 ± 2 ชั่วโมงอาณานิคมผลนับและโคโลนี/ กรัมที่คำนวณการขนาดของกลุ่มตัวอย่างและเจือจางเข้าบัญชี. phages ฟรีที่เหลือไม่ได้ถูกลบออกจากหดหายตัวอย่างก่อนที่จะนับแบคทีเรีย แต่เราเชื่อว่าการลดลงที่สังเกตไม่ได้เกิดจากการทำลายจุลินทรีย์ที่เหลือ ในบริบทระยะเวลาของการศึกษาของเราจากเวลาที่อาหารที่ตัวอย่างstomached และชุบเป็น <7 นาที ในทางตรงกันข้าม phage วงจร lytic 20e40 ใช้เวลานาทีที่จะเสร็จสมบูรณ์; ดังนั้นจึงมีจะไม่จะมีเวลาเพียงพอสำหรับการจำลองแบบทำลายจุลินทรีย์ในระหว่างการศึกษาของเรา (เช่นฟรี MN เพียร์รา et al. / อาหารวิทยา 52 (2015) 43 42e48 เข้มข้นทำลายจุลินทรีย์ไม่ควรจะเพิ่มขึ้น) นอกจากนี้อาหารที่ถูกปรับลดถึงสิบครั้งก่อนที่จะชุบต่อการลดความเข้มข้นของphage ก่อนที่จะชุบ ข้อตกลงกับทฤษฎีนี้การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่าการปรากฏตัวของที่เหลือphages ไม่เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญจำนวน CFU กู้คืนจากส่วนใดของmatrixes อาหารการตรวจสอบ (Abuladze et al, 2008;.. ชาร์ et al, 2009). 2.6 ผลของ ListShield ™บนชีสปนเปื้อนทดลองยากชีสพาสเจอร์ไรส์ที่ได้รับจากผู้ผลิตนมในโคโลราโด ส่วน 600 กรัมชีสปนเปื้อนในทุกพื้นผิวที่แคลิฟอร์เนีย 1 104 โคโลนี / กรัมของชีสและครอบคลุมอย่างอิสระ แบคทีเรียที่ได้รับอนุญาตให้ตั้งรกรากตัวอย่างสำหรับ 60 นาทีที่ห้องอุณหภูมิ ตัวอย่างชีสที่ถูกแบ่งออกเป็นสองส่วน 300 กรัมและได้รับการรักษาในอัตรา1 มิลลิลิตร / 100 กรัมของชีส; การควบคุมกลุ่มที่รับการรักษาด้วยพีบีเอสและกลุ่มการทดสอบได้รับการรักษาด้วยListShield ™ในอัตรา 1 108 PFU / g ของชีส กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการคุ้มครองและบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง สาม 25 กรัมตัวอย่างที่ถูกตัดออกจากแต่ละกลุ่มอยู่ในการฆ่าเชื้อที่แยกต่างหากถุงและstomached ประมาณ 30 วินาที 225 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อน้ำเปปโตน ชีสที่เหลือก็ถูกย้ายไป 4 องศาเซลเซียสสำหรับการจัดเก็บและการทดลองอีกครั้งในเพิ่มขึ้นสามเท่าใน24 ชั่วโมงและ 96 ชั่วโมงหลังการรักษา. จำนวน L. monocytogenes ทำงานได้ในกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการกำหนดไว้ข้างต้น. 2.7 ผลของ ListShield ™บนที่ปนเปื้อนทดลองรมควันปลาแซลมอนปลาแซลมอนรมควันเย็นที่ได้รับจากร้านขายของชำท้องถิ่นในบัลติมอร์ ปริมาณความท้าทายของเชื้อแบคทีเรียที่ถูกนำมาใช้อย่างสม่ำเสมอบนพื้นผิวด้านบนของสามแคลิฟอร์เนีย 240 ส่วนกรัมปลาแซลมอนรมค. กลุ่มตัวอย่างที่ถูกปกคลุมไปอย่างอิสระและแบคทีเรีย (1 103 CFU / g) ได้รับอนุญาตให้ตั้งรกรากพื้นผิวตัวอย่างสำหรับ 60 นาที ทั้งหมดตัวอย่างได้รับการรักษาที่ 0.2 mL / 100 กรัมปลาแซลมอน; กลุ่มควบคุมได้รับการรักษากับพีบีเอสและกลุ่มการรักษาได้รับการรักษาด้วยListShield ™ที่ 9 105 PFU / g หรือ 2 106 PFU / g กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการคุ้มครองและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสสำหรับแคลิฟอร์เนีย 24 ชั่วโมง จากแต่ละกลุ่มเพิ่มขึ้นสามเท่า25 กรัมตัวอย่างแซลมอนรมควันถูกตัดและวางไว้ในการฆ่าเชื้อกระเป๋าและstomached ประมาณ 60 s 225 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อน้ำเปปโตน แผ่นฟอร์ดถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 ± 1 องศาเซลเซียสสำหรับ48 ± 2 ชั่วโมงและจำนวนลิตร monocytogenes ทำงานได้ในตัวอย่างที่ถูกกำหนดไว้ข้างต้น. 2.8 ผลของ ListShield ™บนที่ปนเปื้อนทดลองแอปเปิ้ลชิ้นแอปเปิ้ลทั้งงานเลี้ยงที่ได้รับจากผู้ผลิตแอปเปิ้ลสดตัดในวอชิงตัน หลังจากได้รับการล้างด้วยน้ำประปา, แอปเปิ้ลถูกอากาศแห้งชั่งน้ำหนัก, cored และหั่นเป็น 8 ชิ้นโดยใช้คู่มืออาหารcorer / เครื่องตัด น้ำหนักเฉลี่ยต่อชิ้นถูกแคลิฟอร์เนีย 17 กรัม สามชิ้นของแอปเปิ้ลไม่ได้ถูกปนเปื้อนด้วยเชื้อแบคทีเรียและเป็นตัวแทนได้รับการรักษา, การควบคุมการปนเปื้อน ชิ้นที่เหลือถูกปนเปื้อนอย่างสม่ำเสมอบนพื้นผิวทั้งหมดยกเว้นด้านผิวหนังที่มี1 104 โคโลนี / กรัมแอปเปิ้ล เชื้อแบคทีเรียที่ได้รับอนุญาตให้ตั้งรกรากพื้นผิวแอปเปิ้ลเป็นเวลา 10 นาที ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการรักษาในอัตรา0.1 มิลลิลิตร / 100 กรัมแอปเปิ้ลและแต่ละกลุ่มมี 9 ชิ้น; การควบคุมกลุ่มที่รับการรักษาด้วยน้ำหมันและกลุ่มการทดสอบที่ได้รับการรักษาด้วยทั้งAS, ListShield ™หรือ ListShield ™เจือจางด้วย AS. phage ถูกนำมาใช้ในอัตรา 1.1 106 PFU / g กลุ่มตัวอย่างที่ถูกปกคลุมไปและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสและสามชิ้นจากแต่ละกลุ่มได้มีการทดสอบเวลา24 ชั่วโมง, 48 ชั่วโมงและ 72 ชั่วโมงหลังการรักษา ทั้งสามชิ้นถูกวางลงในถุงปลอดเชื้อและ stomached 60 ใน 10 มิลลิลิตรน้ำเปปโตน จำนวน L. monocytogenes ทำงานได้สำหรับแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดโดยชุบaliquots เพิ่มขึ้นสามเท่า (0.1 มิลลิลิตร) ของแอปเปิ้ลstomached / เปปโตนน้ำผสมลงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่แยกจากฟอร์ดจาน, เสริมด้วยฟอร์ด Listeria เสริมเลือก. แผ่นถูกบ่มที่ 35 ± 2? C เป็นเวลา 48 ± 4 ชั่วโมงและโคโลนี / กรัมนับข้างต้น. 2.9 ผลของ ListShield ™บนจานอาหารแช่แข็งแช่แข็งตัวอย่างการเข้าในกรณีนี้อย่างเต็มที่สุกแช่อาหารให้บริการในเที่ยวบินบนเครื่องบินที่ได้รับจากผู้ผลิตในรัฐเมน จานแช่แข็งที่มีส่วนผสมของเนื้อวัว, มันฝรั่ง, ผักและซอสมะเขือเทศได้รับอนุญาตให้ละลายสำหรับ24 he48 ชั่วโมงที่ 2e6 องศาเซลเซียส จานปนเปื้อนในอัตรา5 103 โคโลนี / กรัมผสมอย่างทั่วถึงและได้รับอนุญาตให้ตั้งรกรากสำหรับ30 นาทีที่ 4e6 องศาเซลเซียส สามจานได้รับการรักษามี 2 มิลลิลิตรพีบีเอสและสามได้รับการรักษามี2 มิลลิลิตร ListShield ™ในอัตรา1 107 PFU / g ของอาหาร จานที่ถูกวางไว้ที่ 4? e6 องศาเซลเซียสสำหรับอีก30 นาทีแล้ววางไว้ในช่องแช่แข็ง 24 ± 2 ชั่วโมง ตัวอย่างที่ถูกละลาย 24 ± 2 ชั่วโมงที่ 4e6 องศาเซลเซียสและทั่วถึงผสม สาม 25 กรัมตัวอย่างที่ถูกย้ายไปเป็นตัวอย่างผ่านการฆ่าเชื้อถุงจากแต่ละหกจานและ10 มิลลิลิตรน้ำหมันเปปโตนถูกบันทึกอยู่ในแต่ละถุงและstomached ประมาณ 30 วินาที จำนวน L. monocytogenes ทำงานได้ในแต่ละตัวอย่างถูกกำหนดโดยการชุบ0.1 มิลลิลิตรลงบนแผ่น aliquots วุ้น MOX บุคคลและอาณานิคมนับต่อไปนี้ระยะฟักตัวของ24 ± 2 ชั่วโมงที่30 ± 2 องศาเซลเซียส. 2.10 ผลของ ListShield ™บนสิ่งแวดล้อม L. monocytogenes การปนเปื้อนในโรงงานผลิตปลาแซลมอนรมคสิ่งอำนวยความสะดวกการผลิตแซลมอนรมควันอยู่ในสกอตแลนด์ได้รับการทำความสะอาดอย่างละเอียดและฆ่าเชื้อหนึ่งวันก่อนการศึกษาเป็นริเริ่ม ในวันที่การทดลองฉ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ถึงอย่างไรก็ตามการเตรียม
ถึงอย่างไรก็ตาม ผลิตภัณฑ์ที่ใช้ในการศึกษาคือ listshield ™ ,
ค็อกเทลหกแบคทีริโอฟาดจ์ : list-36 ไลติค ( ATCC # pta-5376 )
lmsp-25 ( ATCC # pta-8353 ) lmta-34 ( ATCC # pta-8354 )
lmta-57 ( ATCC # pta-8355 ) lmta-94 ( ATCC # pta-8356 )
lmta-148 ( ATCC # pta-8357 ) การเตรียมการสอดคล้องกับข้อกำหนดวัตถุเจือปนอาหาร FDA
,