V. fischeri JB10 was grown in marin

V. fischeri JB10 was grown in marine broth to exponential phase and then transferred (1%) to a defined minimal medium (Studer et al., 2008). Cultures were grown at 28°C and 200 rpm in 250 mL shake flasks with a working volume of 50 mL for 8 h. Treatments were added at 8 h and exposure/growth continued for 4 h. At 12 h of total growth, 2 mL of cells were harvested by centrifugation at 2000 × g (5 min). Cells were treated with 2 mg/mL lysozyme in TE buffer for 10 minutes and then homogenized with a needle and syringe. RNA was extracted with PureLink RNA Mini Kit (Ambion) and on-column DNA digestion was performed with PureLink PCR Micro Kit (Invitrogen). qPCR was performed on a BioRad CFX96 Real Time System with a C1000 Thermal Cycler. Data was analyzed by the Livak method (ΔΔCt) and fold changes were determined by using 2−ΔΔCt

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

V. fischeri JB10 ปลูกในซุปทะเลระยะเนน และโอนย้าย (1%) แล้ว กำหนดน้อยปานกลาง (Studer et al., 2008) วัฒนธรรมถูกปลูกที่ 28° C และ 200 รอบต่อนาทีในน้ำปั่น 250 mL ด้วยทำ 50 mL รักษา 8 h. เพิ่ม 8 h และแสงการเติบโตอย่างต่อเนื่องสำหรับ 4 h ที่ h 12 รวมโต 2 mL ของเซลล์ถูกเก็บเกี่ยว โดย centrifugation ที่ 2000 × g (5 นาที) เซลล์ได้รับ lysozyme 2 mg/mL ในบัฟเฟอร์ TE 10 นาที ก homogenized เป็นกลุ่มแล้ว มีเข็มและเข็ม อาร์เอ็นเอที่สกัด ด้วยชุดมินิอาร์เอ็นเอ PureLink (Ambion) และทำการย่อยอาหารดีเอ็นเอในคอลัมน์ ด้วยชุดไมโคร PCR PureLink (Invitrogen) qPCR ที่ดำเนินการในระบบ Real Time CFX96 BioRad ด้วยเป็น C1000 ร้อน Cycler ข้อมูลที่วิเคราะห์ โดยวิธี Livak (ΔΔCt) และพับเปลี่ยนแปลงถูกกำหนดโดย 2−ΔΔCt

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โวลต์ fischeri JB10 ถูกปลูกในน้ำซุปทะเลเพื่อชี้แจงขั้นตอนและโอนแล้ว (1%) ที่จะเป็นสื่อกลางที่กำหนดไว้ที่น้อยที่สุด (Studer et al., 2008) วัฒนธรรมปลูกวันที่ 28 ° C และ 200 รอบต่อนาที 250 มิลลิลิตรขวดสั่นที่มีปริมาณการทำงานของ 50 มลเป็นเวลา 8 ชั่วโมง การรักษาที่ถูกเพิ่ม 8 ชั่วโมงและการสัมผัส / การเจริญเติบโตอย่างต่อเนื่อง 4 ชั่วโมง ใน 12 ชั่วโมงของการเจริญเติบโตรวม 2 มิลลิลิตรของเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 2000 ×กรัม (5 นาที) เซลล์ได้รับการรักษาด้วย 2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรไลโซไซม์ในบัฟเฟอร์ TE เป็นเวลา 10 นาทีและปั่นแล้วด้วยเข็มและเข็มฉีดยา อาร์เอ็นเอถูกสกัดด้วยมินิอาร์เอ็นเอ PureLink Kit (Ambion) และการย่อยอาหารดีเอ็นเอในคอลัมน์ได้ดำเนินการกับ PureLink PCR ไมโคร Kit (Invitrogen) qPCR ได้ดำเนินการใน BioRad CFX96 ระบบแบบ Real Time ด้วยความร้อน C1000 Cycler วิเคราะห์ข้อมูลโดยวิธี Livak (ΔΔCt) และการเปลี่ยนแปลงพับได้รับการพิจารณาโดยใช้ 2 ΔΔCt

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โวลต์ fischeri jb10 ปลูกในน้ำซุปทะเลกับระยะ exponential และโอน ( 1 ) การกำหนดสื่อน้อยที่สุด ( studer et al . , 2008 ) วัฒนธรรมที่ปลูกที่ 28 ° C และความเร็วรอบ 200 รอบต่อนาทีใน 250 ml . ขวดเขย่ากับการทำงานปริมาตร 50 มิลลิลิตร เป็นเวลา 8 ชั่วโมง การรักษาที่ถูกเพิ่มใน 8 ชั่วโมง และการสัมผัส / การเจริญเติบโตอย่างต่อเนื่องสำหรับ 4 ชั่วโมง ใน 12 ชั่วโมง ของการรวม2 ml ของเซลล์ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่× 2000 กรัม ( 5 นาที ) เซลล์มีการรักษาด้วย 2 มก. / มล. และไลโซไซม์ใน TE buffer นาน 10 นาที แล้วบดกับเข็มและหลอดฉีดยา สกัด RNA ด้วยชุดมินิ purelink RNA ( ambion ) และการย่อย DNA PCR ไมโครคอลัมน์ใช้ purelink Kit ( Invitrogen )qpcr แสดงบน biorad cfx96 เวลาจริงกับระบบ c1000 Thermal cycler . วิเคราะห์ข้อมูลโดยวิธี livak ( ΔΔ CT ) และพับการวิเคราะห์โดยใช้ 2 −ΔΔ CT