A reporter construct (0.2 μg) was m

A reporter construct (0.2 μg) was mixed with 20 ng/ml of a control vector pRL-TK in 50 μl of OPTI-MEM (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA). The solution was mixed with 1 μl of Lipofectamine (Invitrogen Corp.), diluted in 150 μl of OPTI- MEM, and incubated at room temperature for 30 min; two vectors in 200 μl solution were co-transfected into RGM1 cells after the cells were washed twice with OPTI-MEM. The cells were incubated at 37 °C for 24 h in a 5% CO2 atmosphere. The medium was replaced with DMEM/F12 Ham supplemented with 10% FBS, and plaunotol was added to the reaction. After 6 h of culture, cells were harvested and assayed with a PicaGene Dual-Luciferase Assay kit (PG-DUAL SP, Toyo Ink Co. Ltd., Tokyo, Japan) according to the manufacturer's instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สร้างรายงาน (0.2 ไมโครกรัม) ผสมกับ 20 ng / ml ของเวกเตอร์ควบคุม PRL-tk ใน 50 ไมโครลิตรของ OPTI-ข่าว (Invitrogen คอร์ป. ซานดิเอโก) การแก้ปัญหาที่ได้รับการผสมกับ 1 ไมโครลิตรของ lipofectamine (Invitrogen คอร์ป.) เจือจางใน 150 ไมโครลิตรของ OPTI-ข่าวและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที;สองเวกเตอร์ในการแก้ปัญหา 200 ไมโครลิตรได้ร่วม transfected เข้าสู่เซลล์ rgm1 หลังจากเซลล์ถูกล้างสองครั้งด้วย OPTI-ข่าว เซลล์ที่ได้รับการบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในบรรยากาศ CO2 5% กลางถูกแทนที่ด้วยแฮม dmem/f12 เสริมด้วย FBS 10% และ plaunotol ถูกบันทึกอยู่ในการเกิดปฏิกิริยา หลังจาก 6 ชั่วโมงของวัฒนธรรมเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวและการวิเคราะห์ด้วย picagene คู่ luciferase ชุดทดสอบ (SP PG-คู่โตโยหมึก จำกัด .. โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สร้างโปรแกรมรายงาน (0.2 μg) ถูกผสมกับ 20 ng/ml ของการควบคุมแบบเวกเตอร์ pRL-TK ใน μl 50 ของ OPTI-หน่วยความจำ (Invitrogen Corp. คาร์ลส CA) โซลูชันถูกผสมกับ μl 1 ของ Lipofectamine (Invitrogen Corp.), ยกเว้นใน μl 150 ของ OPTI - หน่วยความจำ และ incubated ที่อุณหภูมิห้องใน 30 นาที สองเวกเตอร์ในโซลูชัน μl 200 ได้ร่วม transfected เป็นเซลล์ RGM1 หลังจากเซลล์ถูกล้างสองครั้งกับ OPTI-หน่วยความจำ เซลล์ถูก incubated ที่ 37 ° C ใน 24 h ในบรรยากาศ CO2 5% สื่อถูกแทนที่ ด้วยแฮม DMEM/F12 เสริม ด้วย 10% FBS และ plaunotol ถูกเพิ่มปฏิกิริยาการ หลังจาก h 6 วัฒนธรรม เซลล์เก็บเกี่ยว และ assayed กับวิเคราะห์คู่ Luciferase PicaGene ชุด (PG DUAL SP โตโยหมึก จำกัด โตเกียว ญี่ปุ่น) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นักข่าวสร้าง( 0.2 ไมโครกรัม)ที่ถูกนำไปผสมกับ 20 มล.ไนจีเรีย/การอัปเดต PRL เวกเตอร์การควบคุม - 50 TK :ใน μl ของแบบ Opti - แหม่ม( invitrogen Corp .,ห้างสรรพสินค้า Carlsbad Outlet , CA ) โซลูชันที่ถูกนำไปผสมกับ 1 μl ของ lipofectamine ( invitrogen Corp .)เจือจางใน 150 μl ของ Opti - แหม่มและ incubated ที่ อุณหภูมิ ห้องสำหรับ 30 นาทีสองปัจจัยสำหรับความสะดวกใน 200 โซลูชัน μl ร่วมมือกับ transfected ใน 1 เซลล์ rgm หลังจากเซลล์ที่ได้ล้างสองครั้งด้วย Opti - แหม่ม เซลล์ที่มี incubated ใน C 37 °สำหรับ 24 ชั่วโมงในบรรยากาศความร่วมมือ 25% มีขนาดกลางที่ได้ถูกแทนที่ด้วยเสริมแฮม dmem / F 12 พร้อมด้วย FBS สำหรับผู้ป่วยเบาหวาน 10% และ plaunotol ถูกเพิ่มในการตอบสนอง หลังจาก 6 ชั่วโมงของวัฒนธรรมเซลล์ก็เก็บเกี่ยวและเพียรพยายามพร้อมด้วย SP picagene dual-luciferase สอบชุด( PG - คู่ toyo หมึก Co ., Ltd .กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)ตามคำแนะนำของผู้ผลิต