Bacteriocinogenic LAB were isolated

Bacteriocinogenic LAB were isolated from homemade goat feta
cheese samples produced in Belogratchik, Bulgaria. Twenty-five
grams of each cheese were homogenized with 225 mL of saline
solution [0.85% (m/v) NaCl] in a Stomacher (Laboratory Blender
Stomacher 400, Seward, England). Serial decimal dilutions were
prepared in sterile saline solution and aliquots plated on MRS
(Difco, BD, Franklin Lakes, NJ, USA) supplemented with 1% (m/v)
agar and incubated for 48 h at 30
C. LAB were enumerated and
plates presenting 15e20 colonies were covered with 10 mL of BHI
(Oxoid, Basingstoke, UK) supplemented with 1% (m/v) agar and
106 CFU/mL of L. monocytogenes 607. Plates were incubated for 24 h
at 37
C and single colonies displaying an inhibition zone were
selected, grown on MRS agar plates for purification, and examined
for colony morphology, microscopic characteristics, production of
catalase and acids.
Catalase negative Gram-positive rods that produced acid were
tested for their ability to grow in skim milk at 10
C and 45
C, in
MRS broth at pH 4.4 and 9.6, and in the presence of 6.5% (m/v) of
NaCl (Harrigan, 1998). These bacteria were screened for bacteriocin
production by agar-spot-test method (Todorov, 2008) against
members of the genera Enterococcus, Lactobacillus, Lactococcus,
Listeria, and Pediococcus.
The bacteriocin-producing isolates were identified by API50CHL
system (BioMerieux, Marcy-l’Etoile, France). The DNA of the microorganisms
was extracted with the ZR Fungal/Bacterial DNA Kit
(Zymo Research, Irvine, CA, USA) and further evaluated by using the
random amplification of polymorphic DNA (RAPD) PCR technique
with primers OPL-14 (50-GTG ACA GGC T-30) and OPL-20 (50-TGG
TGG ACC A-30) (Todorov et al., 2010a). The amplified products were
separated by electrophoresis in 1.4% (m/v) agarose gels and band
patterns were analyzed using Gel Compare, Version 4.1 (Applied
Maths, Kortrijk, Belgium).
Based on results of RAPD-PCR and size of the inhibition zone,
isolate ST71KS was selected for future studies. The microorganism
was identified using PCR species-specific primers (Torriani et al.,
2001) and further confirmed by amplification of 16S rDNA with
primers F8 and R1512 (Felske et al., 1997). The amplified fragments
were purified (QIAquick PCR Purification Kit e Qiagen, Hilden,
Germany), sequenced, and compared to sequences available at
GenBank using BLAST (Basic Local Alignment Search Tool).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

LAB Bacteriocinogenic แยกได้จากแพะนมแพะโฮมเมด
ตัวอย่างชีสที่ผลิตใน Belogratchik บัลแกเรีย ยี่สิบห้า
กรัมของแต่ละชีสถูกปั่นด้วย 225 มลน้ำเกลือ
แก้ปัญหา [0.85% (M / V) NaCl] ใน Stomacher (ห้องปฏิบัติการปั่น
Stomacher 400, เอิร์ด, อังกฤษ) เจือจางทศนิยมอนุกรมถูก
จัดทำในน้ำเกลือปราศจากเชื้อและ aliquots ชุบบน MRS
(Difco, BD, แฟรงคลินทะเลสาบ, NJ, USA) เสริมด้วย 1% (m / V)
วุ้นและบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงวันที่ 30 องศาเซลเซียส LAB ถูกแจกแจงและ
แผ่นนำเสนอ 15e20 อาณานิคมถูกปกคลุมไปด้วย 10 มล BHI
(Oxoid เบซิงสหราชอาณาจักร) เสริมด้วย 1% (m / V) และวุ้น
106 CFU / มิลลิลิตร L. monocytogenes 607. แผ่นถูกบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
ที่ 37 องศาเซลเซียสและอาณานิคมเดียวแสดงโซนยับยั้งถูก
เลือกปลูกบนแผ่น MRS agar สำหรับการทำให้บริสุทธิ์และการตรวจสอบ
สำหรับการเปลี่ยนรูปร่างของอาณานิคมลักษณะกล้องจุลทรรศน์ผลิต
catalase และกรด.
catalase เชิงลบแท่งแกรมบวกที่ผลิตกรดถูก
ทดสอบความสามารถของพวกเขา ที่จะเติบโตในนมพร่องมันเนยที่ 10 องศาเซลเซียสและ 45 องศาเซลเซียสใน
MRS น้ำซุปที่ pH 4.4 และ 9.6 และในการปรากฏตัวของ 6.5% (m / v) ของ
โซเดียมคลอไรด์ (Harrigan, 1998) แบคทีเรียเหล่านี้ได้รับการคัดกรอง bacteriocin
ผลิตโดยวิธี agar จุดทดสอบ (Todorov 2008) กับ
สมาชิกของจำพวก Enterococcus, แลคโตบาซิลลัส, Lactococcus,
Listeria และ Pediococcus.
ไอโซเลท bacteriocin ผลิตโดยระบุ API50CHL
ระบบ (Biomerieux, Marcy- l'Etoile, ฝรั่งเศส) ดีเอ็นเอของเชื้อจุลินทรีย์
ถูกสกัดด้วย ZR เชื้อรา / แบคทีเรียชุดดีเอ็นเอ
(Zymo วิจัย Irvine, CA, USA) และต่อไปการประเมินโดยใช้
เครื่องขยายเสียงแบบสุ่มของดีเอ็นเอ polymorphic (RAPD) วิธี PCR
กับไพรเมอร์ OPL-14 (50 GTG ACA GGC T-30) และ OPL-20 (50 TGG
TGG แม็ก A-30) (Todorov et al., 2010A) ผลิตภัณฑ์ขยายถูก
แยกจากกันโดย electrophoresis 1.4% (M / V) เจล agarose และวงดนตรี
รูปแบบถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้เจลเปรียบเทียบรุ่น 4.1 (ประยุกต์
คณิตศาสตร์คอร์ทริก, เบลเยียม).
ขึ้นอยู่กับผลของ RAPD-PCR และขนาดของเขตการยับยั้ง ,
แยก ST71KS ได้รับเลือกสำหรับการศึกษาในอนาคต จุลินทรีย์
ที่ถูกระบุโดยใช้วิธี PCR สายพันธุ์เฉพาะไพรเมอร์ (Torriani et al.,
2001) และต่อไปรับการยืนยันจากการขยายของ 16S rDNA กับ
ไพรเมอร์และ F8 R1512 (Felske et al., 1997) ชิ้นส่วนที่ขยาย
บริสุทธิ์ (PCR QIAquick บริสุทธิ์ Kit E Qiagen, ฮิลเดน,
เยอรมนี), ลำดับและเมื่อเทียบกับลำดับที่มีอยู่ใน
GenBank ใช้ระเบิด (Basic ท้องถิ่นจัดเครื่องมือค้นหา)