In Vitro DeletionsThe organization

In Vitro Deletions
The organization of the H3-H4 gene sets and their deletion derivatives is
summarized in Fig. 1. The copy-I deletion was constructed by Bal 31
nuclease digestion at the unique Sma I site in the intergene region between
the H3 and H4 genes. A set of Bal 31 digestion fragments was selected by
screening for fragment size on agarose gels and the DNA sequences of the
breakpoints were determined from M13 phage subclones of the fragments.
The leftward deletion breakpoint ends 186 bp downstream of the end of the
H3 transcript and 21 bp before the end of the open reading frame of the
SMTI gene. The rightward deletion breakpoint ends 185 bp past the end of
the H4-transcribed sequences and 73 bp past the histone ARS core consensus
sequence (3, 4). These left and right deletion fragments were joined
by an ECO RI synthetic DNA linker in the recombinant.
The copy-II deletion was constructed from restriction fragments flanking
the H3 and H4 genes. The lefthand section was a Hind III-Acc I fragment
from the yeast historic H3 clone Sc201 while the righthand section was the
Hind III-Eco RI fragment Sc218 that is adjacent to the H4-distal righthand
end of the yeast histone H4 clone Sc202 (Fig. 1). These two restriction fragments
were joined by a synthetic Bam HI linker.
In Vivo Deletions
The histone H3-H4 deletion constructs were introduced into the chrumo

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในหลอดทดลองลบเป็นองค์กรของชุดยีน H3 H4 และอนุพันธ์ของการลบสรุปในรูปที่ 1 การคัดลอก-ฉันลบสร้าง โดยดุล 31nuclease ย่อยที่ Sma เฉพาะของฉันไซต์ในภูมิภาค intergene ระหว่างยีน H3 และ H4 เลือกชุดของชิ้นส่วนย่อย 31 ดุลโดยสำหรับส่วนขนาดเจ agarose และลำดับดีเอ็นเอของการคัดกรองการกำหนดจุดสั่งหยุดจาก subclones phage M13 ของเศษLeftward ลบเบรกพอยต์ปลาย 186 bp ล่องของการสิ้นสุดของการH3 เสียงบรรยายและ 21 bp ก่อนสิ้นอ่านเปิดโครงการยีน SMTI บีพีปลาย 185 เบรกพอยต์การลบ rightward สิ้นสุดที่ผ่านมาลำดับการทับศัพท์ H4 และ 73 bp ผ่านมติหลักฮิสโตน ARSลำดับ (3, 4) ส่วนซ้าย และขวาลบเหล่านี้เข้าร่วมกับโดยมี ECO RI สังเคราะห์ดีเอ็นเอตัวเชื่อมโยงในการควบรวมกันการลบสำเนาที่สองถูกสร้างขึ้นจากบางส่วนของข้อจำกัดที่โล่งยีน H3 และ H4 ส่วนซ้ายมือเป็นการรักษา III Acc ผมแยกส่วนจากยีสต์ประวัติศาสตร์ H3 โคลน Sc201 ขณะ righthand เป็นของส่วนตัวส่วนที่ III-Eco RI หลัง Sc218 ที่อยู่ติดกับ righthand H4 ปลายสิ้นสุดของโคลนฮิสโตน H4 ยีสต์ Sc202 (1 รูป) ส่วนสองข้อจำกัดเหล่านี้ได้เข้าร่วม โดยการเชื่อมโยงข้อมูล Bam HI สังเคราะห์ในการลบ Vivoสร้างลบฮิสโตน H3 H4 ถูกนำมาใช้ในการ chrumo

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในหลอดทดลองการลบ
องค์กรของ H3-H4 ชุดยีนและอนุพันธ์ลบของพวกเขาจะถูก
สรุปไว้ในรูป 1. สำเนาฉันลบถูกสร้างขึ้นโดย Bal 31
Nuclease การย่อยอาหารที่เว็บไซต์ที่ไม่ซ้ำกัน Sma ฉันในภูมิภาค intergene ระหว่าง
H3 และยีน H4 ชุดของ Bal 31 การย่อยเศษได้รับเลือกจาก
การตรวจคัดกรองสำหรับขนาดของชิ้นส่วนในเจล agarose และดีเอ็นเอของ
จุดพักได้รับการพิจารณาจาก M13 subclones ทำลายจุลินทรีย์ของเศษ.
เบรกพอยต์ลบไปทางซ้ายจะสิ้นสุดลง 186 bp ปลายน้ำของการสิ้นสุดของ
หลักฐาน H3 และ 21 bp ก่อนสิ้นกรอบเปิดอ่านของ
ยีน SMTI เบรกพอยต์ลบขวาปิดให้บริการ 185 bp ที่ผ่านมาในตอนท้ายของ
ลำดับ H4-คัดลอกและ 73 bp ที่ผ่านมาสโตน ARS หลักฉันทามติ
ลำดับ (3, 4) เหล่านี้ซ้ายและขวาเศษลบได้เข้าร่วม
โดย ECO RI ดีเอ็นเอสังเคราะห์ลิงเกอร์ใน recombinant ได้.
การลบสำเนาที่สองถูกสร้างขึ้นมาจากชิ้นส่วนข้อ จำกัด ขนาบ
H3 และยีน H4 ส่วนด้านซ้ายมือเป็นส่วนหลัง III-Acc ฉัน
จากยีสต์ H3 โคลนประวัติศาสตร์ Sc201 ในขณะที่ส่วนขวามือเป็น
Sc218 ชิ้นส่วนหลัง III-Eco RI ที่อยู่ติดกับ H4-ปลายขวา
ท้ายของยีสต์สโตน H4 โคลน Sc202 (รูปที่ 1). ทั้งสองข้อ จำกัด ชิ้นส่วน
ได้เข้าร่วมโดยสังเคราะห์ปัง HI ลิงเกอร์.
In Vivo ลบ
สโตน H3-H4 โครงสร้างการลบถูกนำเข้าสู่ chrumo

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในหลอดทดลองการลบองค์กรของ h3-h4 ยีนชุดและอนุพันธ์การลบของพวกเขาคือสรุปไว้ในรูปที่ 1 การลบ copy-i ถูกสร้างขึ้นโดย 31 บัลนิวเคลียสการย่อยอาหารที่เป็นเอกลักษณ์และเว็บไซต์ใน intergene ภูมิภาคระหว่างส่วน H3 H4 และยีน ชุดของชิ้นส่วนที่มีการย่อย 31 บัลการคัดขนาด , เจลเบสและลำดับของดีเอ็นเอจุดคำนวณจาก M13 เฟจระดับสายพันธุ์บริสุทธิ์ของเศษส่วนที่ตัดปลายด้านซ้าย 186 BP สิ้น21 . H3 และ BP ก่อนสิ้นเปิดอ่านกรอบของsmti ยีน ส่วนที่ลบไปทางขวา ปลาย 185 BP ผ่านจบส่วน H4 ถ่ายทอดลำดับและ 73 BP ผ่านหมอกแดด ARS หลักฉันทามติลำดับ ( 3 , 4 ) ซ้ายและขวามีเศษเหล่านี้เข้าร่วม .โดย Eco RI สังเคราะห์ดีเอ็นเอโปรแกรมเชื่อมโยงในคอม .สำเนาที่สองถูกสร้างขึ้นจากชิ้นส่วนข้อ จำกัด จ .ส่วน H3 H4 และยีน ส่วนขวามือเป็น 3 หลัง บัญชีผมแตกจากยีสต์ประวัติศาสตร์ H3 โคลน sc201 ในขณะที่ส่วน righthand คือเอนไซม์ Hind III sc218 Eco RI ส่วนที่ติดกับปลาย righthand H4สิ้นสุดของยีสต์หมอกแดด H4 โคลน sc202 ( รูปที่ 1 ) ข้อ จำกัด เหล่านี้สองชิ้นเป็นเข้าร่วมโดยแบมสังเคราะห์ไฮสนามกอล์ฟฤทธิ์ในการลบที่ช่วย h3-h4 การลบโครงสร้างถูกแนะนำใน chrumo