2.4.4. PCR screening for bacterioci

2.4.4. PCR screening for bacteriocins structural genes

The primers used for the amplification of enterocin A, B, P, L50A, L50B were those described by De Vuyst, Foulquié Moreno, and Revets (2003) and mundticin KS gene was investigated using the primers described by Zendo et al. (2005) (Table 2). PCR amplification was performed in a Mastercycler (Eppendorf, Hamburg, Germany) using 20 μl of a reaction mixture containing 50 ng of DNA, 0.5 μM of each primer, 1.5 mM MgCl2, 0.2 mM deoxynucleoside triphosphates, 1× PCR buffer and 1 U of Taq DNA polymerase (Inbio-Highway, Argentina). The cycles used were 95 °C for 5 min, 95 °C for 30 s, 56 °C (for the primers of enterocin B, P, L50A/B) or 58 °C (for the primers of the enterocin A) or 55 °C (for the primers of Mundticin KS) for 30 s, and 72 °C for 30 s for the next 30 cycles; 72 °C for 5 min were used for the last cycle. An aliquot of 4-μl of the amplification mixture was combined with 1 μl of loading buffer, and the preparation was electrophoresed on 1.5% agarose gel at 70 V for 1 h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4.4. PCR ตรวจหายีนโครงสร้าง bacteriocinsไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับการขยายสัญญาณของ enterocin A, B, P, L50A, L50B มีผู้อธิบายไว้ โดย De Vuyst โมเร โน Foulquié และ Revets (2003) และยีน mundticin KS รับการตรวจสอบโดยใช้ไพรเมอร์ที่อธิบายโดย Zendo et al. (2005) (ตาราง 2) ดำเนินการในการ Mastercycler (Eppendorf ฮัมบูร์ก เยอรมนี) โดยใช้ μl 20 ส่วนผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย 50 กระบือฉบับของดีเอ็นเอ 0.5 Μm แต่ละพื้น MgCl2, 0.2 mM deoxynucleoside triphosphates บัฟเฟอร์ PCR × 1 และ 1 U ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (Inbio หลวง อาร์เจนตินา) 1.5 mM รอบใช้ได้ 95 ° C 5 นาที 95 ° C 30 s, 56 ° C (สำหรับไพรเมอร์ของ enterocin B, P, L50A/B) หรือ 58 ° C (สำหรับไพรเมอร์ของ enterocin A) หรือ 55 ° C (สำหรับไพรเมอร์ของ Mundticin KS) สำหรับ 30 s และ 72 ° C เป็นเวลา 30 s สำหรับรอบถัดไป 30 72 ° C เป็นเวลา 5 นาทีใช้สำหรับรอบสุดท้าย ส่วนลงตัวของ 4-μl ผสมขยายได้ร่วมกับ μl 1 โหลดบัฟเฟอร์ และการเตรียมการแก้ไข electrophoresed บน 1.5% agarose เจลที่ 70 V สำหรับ 1 h

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.4 การตรวจคัดกรอง PCR สำหรับ bacteriocins ยีนโครงสร้าง

ไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับการขยายของ enterocin A, B, P, L50A ที่ L50B เหล่านั้นอธิบายโดย De Vuyst, Foulquiéโมเรโนและ Revets (2003) และ mundticin ยีน KS ถูกตรวจสอบโดยใช้ไพรเมอร์อธิบายโดย Zendo et al, (2005) (ตารางที่ 2) ขยาย PCR ที่ได้ดำเนินการใน Mastercycler (Eppendorf, ฮัมบูร์ก, เยอรมนี) ใช้ 20 ไมโครลิตรของผสมปฏิกิริยาที่มี 50 NG ดีเอ็นเอ 0.5 ไมครอนของแต่ละไพรเมอร์ 1.5 มิลลิ MgCl2 0.2 มิลลิ deoxynucleoside triphosphates, 1 ×บัฟเฟอร์ PCR และ 1 ยู Taq DNA Polymerase (Inbio ทางหลวงอาร์เจนตินา) รอบที่ใช้คือ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที, 95 ° C เป็นเวลา 30 วินาที, 56 ° C (สำหรับไพรเมอร์ของ enterocin บี, P, L50A / B) หรือ 58 ° C (สำหรับไพรเมอร์ของ enterocin) หรือ 55 ° C (สำหรับไพรเมอร์ของ Mundticin แคนซัส) เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีเป็นเวลา 30 รอบต่อไป; 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีถูกนำมาใช้สำหรับรอบสุดท้าย หาร 4 ไมโครลิตรผสมขยายได้ร่วมกับ 1 ไมโครลิตรของ buffer โหลดและการเตรียมการที่ถูก electrophoresed บน agarose gel ที่ 1.5% ที่ 70 V เป็นเวลา 1 ชั่วโมง