Most PCR assays for the detection o

Most PCR assays for the detection of Shigella in food are based
on the sole detection of ipaH and cannot differentiate between
natural isolates or cross-contamination with the genetically engi-
neered S. flexneri 2457M FDA positive control strain (Mokhtari
et al., 2013; Garrido et al., 2013; Lin et al., 2010; Wang et al.,
2007; Warren et al., 2006). Accidental in-laboratory sample
contamination with 2457M could generate a false-positive result
that could lead to regulatory action and/or the destruction of the
tested food. The conventional multiplex assay in this study can
differentiate natural Shigella isolates (harboring the virulence
plasmid or plasmidless) from 2457M that carries a kanamycin
resistance cassette into the virulence plasmid mxiC gene. 2457M
showed only two bands - one for ipaH at w600 bp and one for virB
at w400 bp e but failed to reveal any amplification product for
mxiC::kan at 1050 bp due to the short (20 s) amplification step of
the assay. Wild-type Shigella isolates contain three amplification
products that are revealed at 613 bp, 415 bp and 232 bp; but
because Shigella tends to lose its virulence plasmid upon storage
and subculturing, only one band may appear at 613 bp (Thong
et al., 2005). Targeting virB, therefore, ensured that plasmidless
Shigella isolates were easily differentiated from 2457M in the
multiplex assay. The addition of kanamycin to the culture of the
2457M control strain ensures that it maintains its virulence
plasmid, thus virB. If a natural mxiC virBþ ipaHþ Shigella isolate is
recovered from food, it can still be differentiated from 2457M
when the multiplex reactions are performed with the Qiagen
Multiplex PCR mix (Fig. 1B); but for general use, the fast-cycling
multiplex assay can identify Shigella more quickly than looking
for the mxiC::kan marker using the Qiagen Multiplex PCR master
mix. (44 min vs 2 h 15 min, respectively).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ส่วนใหญ่ assays PCR ตรวจ Shigella ในอาหารอยู่ในการตรวจพบ ipaH แต่เพียงผู้เดียว และไม่สามารถแยกความแตกต่างระหว่างแยกได้จากธรรมชาติหรือการปนเปื้อนข้ามด้วยการแปลงพันธุกรรม engi -neered S. flexneri 2457M FDA ควบคุมบวกต้องใช้ (Mokhtariร้อยเอ็ด al., 2013 Garrido et al., 2013 Lin et al., 2010 Wang et al.,2007 วอร์เรนและ al., 2006) ตัวอย่างอุบัติเหตุในห้องปฏิบัติการปนเปื้อน 2457 เมตรสามารถสร้างผลบวกเท็จที่อาจนำไปสู่การดำเนินการกำกับดูแลและ/หรือทำลายการอาหารที่ผ่านการทดสอบ สามารถวิเคราะห์ multiplex ธรรมดาในการศึกษานี้ธรรมชาติ Shigella ที่แยกได้ (harboring virulence ที่แตกต่างplasmid หรือ plasmidless) จากเอ็ม 2457 ที่กานามัยซินเป็นเทปทนเป็น virulence plasmid mxiC ยีน 2457Mพบเพียงสองวง - ipaH ที่ w600 bp หนึ่งและสำหรับ virBที่อี bp w400 แต่ล้มเหลวในการเปิดเผยใด ๆ สินค้า amplificationmxiC::kan ที่ 1050 bp เนื่องจากสั้น (20 s) ขั้นตอน amplificationวิเคราะห์ แยกชนิดของป่า Shigella ประกอบด้วยสาม amplificationผลิตภัณฑ์ที่จะเปิดเผยที่ 613 bp, 415 bp และ 232 bp แต่เนื่องจาก Shigella มีแนวโน้มที่จะ สูญเสียของ plasmid virulence เมื่อเก็บและ subculturing วงเดียวอาจปรากฏที่ 613 bp (ทองร้อยเอ็ด al., 2005) กำหนดเป้าหมาย virB ดังนั้น มั่นใจว่า plasmidlessง่าย ๆ ถูก differentiated shigella แยกจาก M 2457 ในการวิเคราะห์ multiplex การเพิ่มของกานามัยซินกับวัฒนธรรมของการ2457 M ควบคุมต้องใช้เพื่อให้แน่ใจว่า จะรักษา virulence ของplasmid, virB ดังนั้น ถ้าแยกเป็น mxiC ธรรมชาติ virBþ ipaHþ Shigellaกู้คืนจากอาหาร มันสามารถยังแยกแยะตั้งแต่ 2457 ม.เมื่อดำเนินปฏิกิริยา multiplex กับ Qiagen จะMultiplex PCR ผสม (Fig. 1B); แต่ สำหรับการ ใช้งานทั่วไป รวดเร็วขี่จักรยานวิเคราะห์ multiplex สามารถระบุ Shigella ได้รวดเร็วกว่าการมองสำหรับเครื่อง mxiC::kan โดยใช้หลัก Qiagen Multiplex PCRผสม (เทียบกับนาทีที่ 44 2 h 15 min ตามลำดับ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ส่วนใหญ่การตรวจ PCR ในการตรวจหาเชื้อ Shigella
ในอาหารจะขึ้นอยู่กับการตรวจสอบเพียงอย่างเดียวของipaH
และไม่สามารถแยกความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์ธรรมชาติหรือการปนเปื้อนกับengi- พันธุกรรม
neered เอสชั้น exneri 2457M องค์การอาหารและยาสายพันธุ์ควบคุมบวก (Mokhtari
et al, 2013. Garrido et al, 2013;. หลิน et al, 2010;. วัง, et al.
2007;. วอร์เรน, et al, 2006) อุบัติเหตุในห้องปฏิบัติการตัวอย่างการปนเปื้อนกับ 2457M สามารถสร้างผลบวกเท็จที่อาจนำไปสู่การดำเนินการตามกฎระเบียบและ/ หรือการทำลายของอาหารที่ผ่านการทดสอบ การทดสอบหลายทั่วไปในการศึกษานี้สามารถแยกความแตกต่างสายพันธุ์ Shigella ธรรมชาติ (เก็บงำความรุนแรงพลาสมิดหรือ plasmidless) จาก 2457M ที่ดำเนินการกานามัยซินเทปต้านทานความรุนแรงลงในพลาสมิดยีนmxiC 2457M แสดงให้เห็นเพียงสองวงดนตรี - หนึ่งสำหรับ ipaH ที่ bp W600 และหนึ่งสำหรับ virB ที่ e-W400 bp แต่ล้มเหลวที่จะเปิดเผยผลิตภัณฑ์ไอออนบวกสาย ampli ใด ๆ สำหรับmxiC :: กาฬที่ 1,050 bp เนื่องจากการสั้น ๆ (20 s) ขั้นตอนที่ไอออนบวกสาย ampli ของการทดสอบ Shigella ป่าชนิดแยกมีสาม ampli ไอออนบวกสายผลิตภัณฑ์ที่มีการเปิดเผยที่613 bp 415 bp และ 232 bp; แต่เพราะ Shigella มีแนวโน้มที่จะสูญเสียพลาสมิดความรุนแรงที่มีต่อการจัดเก็บและถ่ายเชื้อเพียงหนึ่งวงอาจปรากฏที่613 bp (ทองet al., 2005) กำหนดเป้าหมาย virB จึงทำให้มั่นใจได้ว่า plasmidless Shigella ถูกแยกความแตกต่างได้อย่างง่ายดายจาก 2457M ในการทดสอบหลาย นอกเหนือจากกานามัยซินกับวัฒนธรรมของสายพันธุ์ควบคุม 2457M เพื่อให้แน่ใจว่าจะรักษาความรุนแรงของพลาสมิดจึงvirB ถ้า mxiC ธรรมชาติ? virBþipaHþ Shigella แยกได้มีการกู้คืนจากอาหารก็ยังคงสามารถที่แตกต่างจาก2457M เมื่อหลายปฏิกิริยาที่มีการดำเนินการกับ Qiagen ผสม PCR Multiplex (รูปที่ 1B.); แต่สำหรับการใช้งานทั่วไปอย่างรวดเร็วการขี่จักรยานทดสอบหลาย Shigella สามารถระบุได้อย่างรวดเร็วกว่ามองสำหรับmxiC :: กาฬเครื่องหมายโดยใช้วิธี PCR Multiplex Qiagen ต้นแบบผสม (44 นาทีเทียบกับ 2 ชั่วโมง 15 นาทีตามลำดับ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วนใหญ่ใช้สำหรับการตรวจหาเชื้อชิเกลล่าในอาหารจะใช้ในการ ipah
แต่เพียงผู้เดียว และไม่สามารถแยกความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์
ธรรมชาติหรือการปนเปื้อนข้ามกับพันธุกรรม Engi -
neered S . fl exneri 2457m FDA บวกการควบคุมความเครียด ( mokhtari
et al . , 2013 ; Garrido et al . , 2013 ; หลิน et al . 2010 ; Wang et al . ,
2007 ; วอร์เรน et al . , 2006 ) อุบัติเหตุใน
ตัวอย่างในห้องปฏิบัติการการปนเปื้อนของ 2457m สามารถสร้าง false-positive ผล
ที่อาจนำไปสู่การกระทำของกฎระเบียบและ / หรือการทำลายของ
ทดสอบอาหาร ( แบบปกติ ในการศึกษานี้สามารถแยกเชื้อชิเกลลา ( ธรรมชาติ

พลาสมิดที่ความรุนแรง หรือ plasmidless ) จาก 2457m ซึ่งมีความต้านทานโรคทั้งสอง
เทปในพลาสมิด mxic ยีน 2457m
พบว่ามีเพียงสองวงหนึ่ง ipah ที่ BP W600 และหนึ่งสำหรับเวิร์บ
ที่ w400 BP E แต่ล้มเหลวในการเปิดเผยใด ๆ ampli จึงแลกเปลี่ยนผลิตภัณฑ์
mxic : : kan ที่ 1050 BP เนื่องจากการสั้น ( 20 ) จึง ampli ในขั้นตอนของ
( . . . ป่าชนิดเชื้อชิเกลลาประกอบด้วยสาม ampli จึงบวก
ผลิตภัณฑ์ที่ถูกเปิดเผยที่ 613 / 415 BP และ 232 BP ; แต่
เพราะชิเกลลามีแนวโน้มที่จะสูญเสียมันภัยสังคมสายพันธุ์บนกระเป๋า
และ การเพียงหนึ่งวงอาจปรากฏที่ 613 BP ( ทอง
et al . , 2005 ) เป้าหมายเวิร์บ จึงมั่นใจได้ว่า plasmidless
ชิเกลลาไอโซเลทสามารถแตกต่างจาก 2457m ใน
วิธี multiplex นอกเหนือจากปัจจัยเพื่อวัฒนธรรมของ
ควบคุม 2457m เมื่อย ยืนยันว่า จะยังคงความรุนแรง
พลาสมิดจึงเวิร์บ . ถ้าธรรมชาติ mxic  เวิร์บþ ipah แยกเป็น
þชิเกลลาหายจากอาหาร มันก็ยังคงมีความแตกต่างจาก 2457m
เมื่อปฏิกิริยา multiplex จะดำเนินการกับ QIAGEN
ผสมเทคนิค multoplex PCR ( รูปที่ 1A ) ; แต่สำหรับการใช้งานทั่วไป โดยสามารถระบุได้อย่างรวดเร็วแบบจักรยาน

ชิเกลล่าเร็วกว่ามองสำหรับ mxic : : QIAGEN multiplex PCR โดยใช้เครื่องหมายคันต้นแบบ
ผสม . ( 2 ชั่วโมง 44 นาทีและ 15 นาทีตามลำดับ )