ECL SDS-PAGE detection of covalentl

ECL SDS-PAGE detection of covalently bound heme in CtrHbs. (a) Ferric samples
were reducedwith 2mMDT for ~30min then re-oxidizedwith air before being subjected
to electrophoresis. The image was obtained with a 30-s exposure. The heme of WT CtrHb
and the T111H and L75H variants (lane 1-3) migrates at the dye front.WTGlbN-A (lane 4)
is included as a positive control for covalent linkage. (b) Ferric WT and variant CtrHbs
were first saturatedwith cyanide and then reduced for ~30min. The figure shows images
of film that was exposed for either 30 s or 7 min. The heme fromWT CtrHb (lane 1) migrates
with the dye front. The T111H CtrHb lane (lane 2) shows incomplete heme attachment.
The longer exposure time was necessary to observe the faint crosslinked T111H
CtrHb band. The L75H CtrHb lane (lane 3) shows complete crosslinking as in the GlbN-A
control (lane 4).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจสอบ ECL SDS-หน้าของ heme ผูก covalently ใน CtrHbs (a) อย่างเฟอร์มี 2mMDT reducedwith ในอากาศ ~ 30 นาทีแล้ว oxidizedwith อีกครั้งก่อนอยู่ภายใต้การ electrophoresis ภาพได้รับ มีแสง 30 s Heme ของ WT CtrHbและย่อย T111H และ L75H (เลน 1-3) ย้ายหน้าย้อมWTGlbN A (เลน 4)มาเป็นตัวควบคุมค่าบวกสำหรับเชื่อมโยง covalent (ข) เฟอร์ WT และตัวแปร CtrHbsมีไซยาไนด์ saturatedwith แรก และลดลงแล้ว สำหรับ ~ 30min รูปแสดงภาพฟิล์มที่ถูกแสดงสำหรับ 30 s หรือ 7 นาที ย้าย heme fromWT CtrHb (เลน 1)ด้านหน้าสีย้อม T111H CtrHb เลน (2 เลน) แสดงแนบ heme ที่ไม่สมบูรณ์เวลาเปิดรับแสงนานไม่จำเป็นต้องสังเกต crosslinked มัว T111Hวงดนตรี CtrHb L75H CtrHb เลน (เลน 3) แสดง crosslinking สมบูรณ์ใน GlbN-Aควบคุม (4 เลน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ECL การตรวจสอบระบบ SDS-PAGE ของ heme ผูกพัน covalently ใน CtrHbs (ก) ตัวอย่าง Ferric
เป็น reducedwith 2mMDT สำหรับ ~ 30 นาทีจากนั้นอากาศอีกครั้งก่อนที่จะถูก oxidizedwith ภายใต้
กระแสไฟฟ้า ภาพที่ได้รับการสัมผัสกับ 30-S heme ของ WT CtrHb
และ T111H และสายพันธุ์ L75H (เลน 1-3) ย้ายที่ย้อม front.WTGlbN-(4 เลน)
จะรวมเป็นบวกสำหรับการควบคุมการเชื่อมโยงโควาเลนต์ (ข) Ferric WT และ CtrHbs ตัวแปร
มีไซยาไนด์ saturatedwith แรกและลดลงไปแล้วสำหรับ ~ 30 นาที รูปที่แสดงให้เห็นภาพ
ของภาพยนตร์ที่ได้รับการสัมผัสทั้ง 30 วินาทีหรือ 7 นาที heme fromWT CtrHb (ช่อง 1) ย้าย
ด้านหน้าสีย้อม T111H CtrHb เลน (ช่อง 2) แสดงให้เห็นถึงสิ่งที่แนบมา heme สมบูรณ์.
เวลารับแสงนานเป็นสิ่งจำเป็นที่จะสังเกตเห็น T111H เชื่อมขวางลม
CtrHb วง L75H CtrHb เลน (ช่อง 3) แสดงให้เห็นถึงการเชื่อมขวางที่สมบูรณ์เช่นเดียวกับใน GlbN-
ควบคุม (4 เลน)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ECL ถูกตรวจจับ covalently ผูกพันฮีมใน ctrhbs . ( 1 ) เฟอร์ ( reducedwith 2mmdt ตัวอย่าง
~ 30 นาที แล้ว oxidizedwith อากาศก่อนที่จะถูกยัดเยียด
เรส . ภาพได้ด้วย 30-s แสง ส่วนนี่ของ WT ctrhb
และ t111h l75h และตัวแปร ( ซอย 1-3 ) ย้ายที่ย้อม front.wtglbn-a ( ซอย 4 )
รวมเป็นตัวควบคุมบวกสำหรับการเชื่อมโยง .( ข ) น้ำหนักเหล็กและตัวแปร ctrhbs
มีไซยาไนด์ saturatedwith ก่อนแล้วลด ~ 30 นาที รูปแสดงภาพ
ของภาพยนตร์ที่ถูกเพื่อให้ 7 นาที 30 วินาทีหรือมากกว่า fromwt ctrhb ( ช่องที่ 1 ) อพยพ
ด้วยสีหน้า การ t111h ctrhb เลน ( ซอย 2 ) แสดงไม่ครบถ้วน ท่านแนบ .
อีกต่อไปเวลาจำเป็นสังเกตลมเครื่อง t111h
ctrhb วงดนตรีการ l75h ctrhb เลน ( ซอย 3 ) แสดงให้เห็นถึงการเชื่อมที่สมบูรณ์ในการควบคุม glbn-a
( ซอย 4 )