There is no particular limitation o

There is no particular limitation on the ยีนจากภายนอกที่สนใจ. The desired ยีนจากภายนอก can be selected according
to the intended purpose. For example, to enhance cell growth of
Euglena and แวกซ์เอสเตอร์ fermentation, a gene encoding pyruvate:NADP+
oxidoreductase can be selected. The amount of acetyl-CoA in
mitochondria can be increased by increasing the expression amount of pyruvate:NADP+ oxidoreductase,
To homogenize แวกซ์เอสเตอร์produced by Euglena, a gene
encoding 3-ketoacyl-CoA thiolase can be selected. It is possible to increase the accumulation amount of the longest acyl-CoA that can be reacted by increasing the expression amount of 3-ketoacyl-
CoA thiolase.
[0025]
To control the amount of carbon flowing into the TCA
cycle of Euglena, a gene encoding citrate synthase can be
selected. The amount of storage polysaccharide used as a starting
material of แวกซ์เอสเตอร์in the cells can be increased by
increasing the expression amount of citrate synthase.
[0026]
Furthermore, to facilitate carbon metabolism in the TCA
cycle of Euglena, the growth of cells can be promoted by
increasing the expression amount of 2-oxoglutarate decarboxylase, which is involved in the only irreversible reaction in the TCA
cycle.
[0027]

In addition, a synthesis gene of a useful substance,
such as human interferon, can be used as the ยีนจากภายนอก of
interest; therefore, the Euglena of the present invention can be
used as a system that produces such useful substances. [0028]
Further, a selection marker may be used as the ยีนจากภายนอกที่สนใจ. The selection marker can be used for the same 35 purpose as the drug resistance gene mentioned above. More






specifically, the use of the selection marker has the advantage of making it possible to selectively grow a ทรานสฟอร์แมนต์ alone even if the wild strain of Euglena is also present or if a non ทรานสฟอร์แมนต์ in which the introduced gene is lost becomes
produced.
[0029]
The phrase "carrying a drug resistance gene และยีนจากภายนอกที่สนใจ in an expressible manner" as used herein
is not particularly limited and, for example, refers to carrying 10 the drug resistance gene and ยีนจากภายนอก of interest mentioned
above in an expressible manner until the Euglena is subcultured
for at least 10 passages in the absence of the drug to which the
introduced drug resistance gene shows resistance. In this case,
the number of passages in the subculturing is more preferably 15, 15 and even more preferably 20. Whether the Euglena carries the
genes in an expressible manner can be confirmed by performing RT-
PCR on mRNA extracted from the Euglena, using primers that can
amplify the genes.
[0030]
In the present invention, the drug resistance gene and
the ยีนจากภายนอกที่สนใจ are preferably under control of at
least a Euglena endogenous promoter. Examples of Euglena
endogenous promoters include, but are not particularly limited to
promoters of, pyruvate:NA]JP+ oxidoreductase, glyceraldehyde-3-
phosphate dehydrogenase, carbonic anhydrase, bifunctional
glyoxylate cycle enzyme, a-tubulin, etc. In particular,
pyruvate:NADP+ oxidoreductase promoter is preferable.
[0031]
In the present invention, the drug resistance gene and
the ยีนจากภายนอกที่สนใจ are preferably integrated in the

genome. There is no particular limitation, but the drug
resistance gene and the ยีนจากภายนอกที่สนใจ are preferably
integrated in the genome by homologous recombination. Whether the
genes are integrated in the genome can be confirmed by Southern 35 blotting. However, the number of copies of the introduced genes








may not be high enough, and no clear signal may be obtained by
Southern blotting. In such a case, RT-PCR using the primers that
can amplify the introduced genes can be performed on mRNA
extracted from the Euglena continuously subcultured for 20
5 passages in the absence of the drug to which the introduced drug
resistance gene shows resistance, and if the target sequences are
amplified, it can be determined that the genes are integrated in
the genome. More specifically, it can be determined that
detection of the introduced genes by RT-PCR from the cells
10 continuously subcultured in the absence of selective pressure
indicates that there is a high probability that the introduced genes are integrated in the genome

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไม่จำกัดเฉพาะการยีนจากภายนอกที่สนใจได้ สามารถเลือกยีนจากภายนอกต้องตามเพื่อวัตถุประสงค์ที่กำหนดไว้ ตัวอย่าง การเพิ่มเซลล์เจริญเติบโตของ ยูกลีนาและแวกซ์เอสเตอร์หมัก ยีนที่เข้ารหัส pyruvate: NADP +สามารถเลือก oxidoreductase จำนวน acetyl-CoA ในmitochondria สามารถเพิ่มได้ โดยเพิ่มจำนวนนิพจน์ pyruvate: NADP + oxidoreductase การ homogenize แวกซ์เอสเตอร์produced โดยยูกลีนา ยีนรหัส thiolase 3-ketoacyl-CoA สามารถเลือก จำเป็นต้องเพิ่มจำนวนสะสมสูง acyl-CoA ที่สามารถมีปฏิกิริยาที่เกิดขึ้น โดยการเพิ่มจำนวนนิพจน์ 3-ketoacyl -CoA thiolase [0025]การควบคุมปริมาณของคาร์บอนที่ไหลลงสู่ TCAวงจรของยูกลีนา ยีนที่เข้ารหัส synthase ซิเตรตสามารถเลือก จำนวน polysaccharide เก็บใช้เป็นเริ่มต้น วัสดุของเซลล์สามารถเพิ่มได้โดย แวกซ์เอสเตอร์in เพิ่มจำนวนนิพจน์ synthase ซิเตรต [0026]นอกจากนี้ เพื่อช่วยในการเผาผลาญคาร์บอนใน TCAวงจรของการเติบโตของเซลล์ ยูกลีนารอบเพิ่มจำนวนนิพจน์ decarboxylase 2-oxoglutarate ที่เกี่ยวข้องในปฏิกิริยาใน TCA ให้เท่านั้นวงจร[0027]นอกจากนี้ ยีนสังเคราะห์ของสารที่มีประโยชน์เช่นอินเตอร์ฟีรอนมนุษย์ สามารถใช้เป็นยีนจากภายนอกของ สนใจ ดังนั้น ยูกลีนาของประดิษฐ์ปัจจุบันสามารถใช้เป็นระบบที่ก่อให้เกิดสารที่เป็นประโยชน์ดังกล่าว [0028]เพิ่มเติม เครื่องหมายตัวเลือกอาจใช้เป็นยีนจากภายนอกที่สนใจ สามารถใช้เครื่องหมายตัวเลือกสำหรับ 35 วัตถุประสงค์เดียวกับยีนต้านทานยาที่กล่าวถึงข้างต้น เพิ่มเติม โดยเฉพาะ การใช้เครื่องหมายตัวเลือกมีข้อดีของการทำให้สามารถเลือกที่จะเติบโตทรานสฟอร์แมนต์เป็นคนเดียว แม้กรณีที่เป็นสายพันธุ์ป่าของยูกลีนา หรือถ้าทรานสฟอร์แมนต์ไม่ใช่ที่ที่ยีนนำหาย ผลิต[0029]วลี "แบกและยีนจากภายนอกที่สนใจกับยีนต้านทานยาเสพติดในลักษณะ expressible" ที่ใช้นี้ ไม่จำกัดโดยเฉพาะอย่างยิ่ง และ เช่น ถึงแบก 10 ยีนต้านทานยาเสพติดและยีนจากภายนอกที่น่าสนใจที่กล่าวถึง ข้างต้นในลักษณะ expressible จนยูกลีนาจะเป็น subcultured สำหรับทางเดินน้อย 10 ของยาที่จะ ยีนต้านทานยาเสพติดนำแสดงความต้านทาน ในกรณีนี้ จำนวนทางเดินใน subculturing ที่มากขึ้นควรเป็น 15, 15 และยิ่งควร 20 ว่ายูกลีนาดำเนินการ ยีนในลักษณะ expressible สามารถยืนยัน ด้วยการ RT- PCR ใน mRNA ที่สกัดจากยูกลีนา ใช้ไพรเมอร์ที่สามารถ ขยายยีน[0030] ในปัจจุบันประดิษฐ์ ยีนต้านทานยาเสพติด และยีนจากภายนอกที่สนใจอยู่ภายใต้การควบคุมของที่ควรอย่างน้อยการยูกลีนา endogenous โปรโมเตอร์ ตัวอย่างของยูกลีนาก่อ endogenous รวมถึง แต่ไม่จำกัดโดยเฉพาะอย่างยิ่งการ ก่อของ pyruvate: นา] JP + oxidoreductase, glyceraldehyde-3 - ฟอสเฟต dehydrogenase, carbonic anhydrase, bifunctional glyoxylate รอบฯลฯ เป็น tubulin เอนไซม์ โดยเฉพาะ โปรโมเตอร์ oxidoreductase pyruvate: NADP + ได้กว่า[0031]ในปัจจุบันประดิษฐ์ ยีนต้านทานยาเสพติด และ ยีนจากภายนอกที่สนใจควรถูกรวมในการกลุ่ม ไม่เฉพาะจำกัด แต่ยาเสพติดยีนต้านทานและยีนจากภายนอกที่สนใจจะเด่นกว่ารวมในกลุ่มนี้ โดย homologous recombination ว่า รวมยีนในกลุ่มสามารถยืนยัน โดย blotting วิธี 35 ภาคใต้ อย่างไรก็ตาม จำนวนสำเนาของยีนที่นำ อาจไม่ได้รับสัญญาณที่ชัดเจนเพียงพอ และไม่ได้Blotting วิธีภาคใต้ ในกรณีเช่นนี้ RT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่ที่ สามารถขยายการนำยีนที่สามารถดำเนินการบน mRNA สกัดจากยูกลีนา subcultured อย่างต่อเนื่องสำหรับ 20 5 ทางเดินของยาที่นำยาเสพติด ยีนต้านทานแสดงความต้านทาน และถ้าลำดับเป้าหมาย ขยาย มันสามารถถูกกำหนดว่า ยีนรวมใน กลุ่ม อื่น ๆ โดยเฉพาะ สามารถถูกกำหนดที่ ตรวจยีนนำโดย RT-PCR จากเซลล์ 10 subcultured อย่างต่อเนื่องของแรงดันที่ใช้บ่งชี้ว่า มีความน่าเป็นสูงที่รวมนำยีนในกลุ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไม่มีข้อ จำกัด โดยเฉพาะอย่างยิ่งในยีนจากภายนอกที่สนใจคือ ต้องการยีนจากภายนอกสามารถเลือกได้ตาม
วัตถุประสงค์ที่ตั้งใจไว้ ตัวอย่างเช่นในการส่งเสริมการเจริญเติบโตของเซลล์
ยูกลีนาและแวกซ์เอสเตอร์หมักไพรูยีน: NADP +
oxidoreductase สามารถเลือกได้ ปริมาณของ acetyl-CoA ใน
mitochondria สามารถเพิ่มขึ้นโดยการเพิ่มปริมาณการแสดงออกของไพรู: NADP + oxidoreductase,
การทำให้เป็นเนื้อเดียวกันแวกซ์เอสเตอร์ที่ผลิตโดยยูกลีนา, ยีน
เข้ารหัส 3 ketoacyl-CoA thiolase สามารถเลือกได้ มันเป็นไปได้ที่จะเพิ่มปริมาณการสะสมของที่ยาวที่สุด acyl-CoA ที่สามารถมีปฏิกิริยาตอบสนองโดยการเพิ่มปริมาณการแสดงออกของ 3 ketoacyl-
thiolase CoA.
[0025]
เพื่อควบคุมปริมาณของคาร์บอนไหลลงสู่ TCA
วงจรของยูกลีนายีน เทสซิเตรตการเข้ารหัสสามารถ
เลือก ปริมาณของ polysaccharide การจัดเก็บข้อมูลที่ใช้ในการเริ่มต้นเป็น
วัสดุของแวกซ์เอสเตอร์ในเซลล์สามารถเพิ่มขึ้นโดย
การเพิ่มปริมาณการแสดงออกของเทสซิเตรต.
[0026]
นอกจากนี้เพื่อความสะดวกในการเผาผลาญคาร์บอนใน TCA
วงจรของยูกลีนาเจริญเติบโต ของเซลล์ที่สามารถได้รับการส่งเสริมโดย
การเพิ่มปริมาณการแสดงออกของ 2 oxoglutarate decarboxylase ซึ่งมีส่วนเกี่ยวข้องในการเกิดปฏิกิริยาเพียงกลับไม่ได้ใน TCA
วงจร.
[0027] นอกจากนี้ยีนสังเคราะห์สารที่มีประโยชน์เช่น interferon มนุษย์สามารถ ใช้เป็นยีนจากภายนอกของ ดอกเบี้ย ดังนั้นยูกลีนาของการประดิษฐ์ในปัจจุบันที่สามารถนำมาใช้เป็นระบบที่ผลิตสารที่มีประโยชน์ดังกล่าว [0028] นอกจากนี้เครื่องหมายเลือกอาจจะใช้เป็นยีนจากภายนอกที่สนใจ เครื่องหมายเลือกสามารถนำมาใช้เพื่อวัตถุประสงค์เดียวกัน 35 ยีนต้านทานยาเสพติดดังกล่าวข้างต้น อื่น ๆโดยเฉพาะอย่างยิ่งการใช้เครื่องหมายการเลือกมีความได้เปรียบในการทำมันเป็นไปได้ที่จะคัดเลือกเติบโตทรานสฟอร์แมนต์คนเดียวแม้ว่าสายพันธุ์ป่ายูกลีนายังอยู่หรือถ้าไม่ใช่ทรานสฟอร์แมน ต์ที่ยีนแนะนำจะหายไปกลายเป็นผลิต. [0029] วลีที่ว่า "การดำเนินการดื้อยาของยีนและยีนจากภายนอกที่สนใจในลักษณะที่แสดงออก" ที่ใช้ในที่นี้ไม่ได้โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ จำกัด และยกตัวอย่างเช่นหมายถึงการดำเนินการ 10 ยีนต้านทานยาเสพติดและยีนจากภายนอกที่น่าสนใจที่กล่าวถึงข้างต้นในลักษณะที่แสดงออกจนกว่ายูกลีนาถูกเลี้ยงอย่างน้อย 10 ทางเดินในกรณีที่ไม่มียาเสพติดที่ยีนต้านทานยาเสพติดที่นำมาแสดงให้เห็นถึงความต้านทาน ในกรณีนี้จำนวนของทางเดินในถ่ายเชื้อมีมากขึ้นโดยเฉพาะอย่างยิ่ง 15, 15 และโดยเฉพาะอย่างยิ่งไม่ว่าจะเป็น 20 ยูกลีนาพกยีนในลักษณะที่แสดงออกได้รับการยืนยันโดยการดำเนินการ RT- PCR ใน mRNA สกัดจากยูกลีนาโดยใช้ไพรเมอร์ ที่สามารถขยายยีน. [0030] ในการประดิษฐ์ในปัจจุบันยีนต้านทานยาเสพติดและยีนจากภายนอกที่สนใจเป็นอย่างยิ่งภายใต้การควบคุมอย่างน้อยก่อการภายนอกยูกลีนา ตัวอย่างของยูกลีนาก่อการภายนอกรวมถึง แต่ไม่ จำกัด เฉพาะอย่างยิ่งในการสนับสนุนของไพรู: NA] JP + oxidoreductase, glyceraldehyde-3 dehydrogenase ฟอสเฟต anhydrase คาร์บอ bifunctional เอนไซม์วงจร glyoxylate,-tubulin ฯลฯ โดยเฉพาะอย่างยิ่งไพรู: NADP + โปรโมเตอร์ oxidoreductase เป็นที่นิยม. [0031] ในการประดิษฐ์ในปัจจุบันยีนต้านทานยาเสพติดและ ยีนจากภายนอกที่สนใจมีการบูรณาการอย่างยิ่งในจีโนม ไม่มีข้อ จำกัด โดยเฉพาะอย่างยิ่งมี แต่ยาเสพติดของยีนต้านทานและยีนจากภายนอกที่สนใจโดยเฉพาะอย่างยิ่งจะถูกรวมอยู่ในจีโนมโดยการรวมตัวกันอีกคล้ายคลึงกัน ไม่ว่าจะเป็นยีนที่มีการบูรณาการในจีโนมได้รับการยืนยันจากภาคใต้ 35 ซับ อย่างไรก็ตามจำนวนของสำเนาของยีนที่แนะนำอาจจะไม่สูงพอและไม่มีสัญญาณที่ชัดเจนอาจจะได้รับจากภาคใต้ซับ ในกรณีเช่นนี้, RT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่สามารถขยายยีนแนะนำสามารถดำเนินการใน mRNA สกัดจากยูกลีนาเลี้ยงอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 20 5 ทางเดินในกรณีที่ไม่มียาเสพติดที่นำยาเสพติดของยีนต้านทานแสดงให้เห็นถึงความต้านทานและถ้า ลำดับเป้าหมายจะขยายก็สามารถที่จะระบุว่ายีนที่มีการบูรณาการในจีโนม โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่จะสามารถระบุว่าการตรวจสอบของยีนที่นำโดย RT-PCR จากเซลล์10 เลี้ยงอย่างต่อเนื่องในกรณีที่ไม่มีความดันเลือกแสดงให้เห็นว่ามีความเป็นไปได้สูงที่แนะนำยีนมีการบูรณาการในจีโนม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไม่มีข้อ จำกัด โดยเฉพาะในยีนจากภายนอกที่สนใจ . สามารถเลือกได้ตามต้องการ ยีนจากภายนอก
เพื่อวัตถุประสงค์ . ตัวอย่างเช่นการเพิ่มการเจริญเติบโตของเซลล์ของยูกลีนาแวกซ์เอสเตอร์
และการหมักยีนไพรูการเข้ารหัส : nadp
อ ซิโดรีดักเทส สามารถเลือก ปริมาณยาใน
ทิลmitochondria สามารถเพิ่มขึ้นโดยการเพิ่มการแสดงออกของปริมาณ pyruvate : nadp อ ซิโดรีดักเทส
เพื่อเดียวกันแวกซ์เอสเตอร์ผลิตโดย , ห้วยทราย , ยีน
3-ketoacyl-coa thiolase เข้ารหัสสามารถเลือกได้ มันเป็นไปได้ที่จะเพิ่มการสะสมปริมาณของที่ยาวที่สุด , สินค้าที่สามารถมีปฏิกิริยาตอบสนองโดยการเพิ่มการแสดงออกของจํานวน 3-ketoacyl COA thiolase -
.
[ ]
0025เพื่อควบคุมปริมาณไหลเข้า TCA
วัฏจักรของยูกลีนาเป็นยีน citrate synthase เข้ารหัสสามารถ
เลือก จำนวนของข้อมูลที่ใช้เป็นสารเริ่มต้น
วัสดุแวกซ์เอสเตอร์ในเซลล์จะเพิ่มขึ้นโดยการเพิ่มปริมาณซิเตรต
การแสดงออกและ . 0026
[ ]
นอกจากนี้เพื่อความสะดวกของ TCA คาร์บอนวัฏจักรของยูกลีนา
,การเจริญเติบโตของเซลล์ที่สามารถส่งเสริมการเพิ่มปริมาณของการแสดงออกด้วย
2-oxoglutarate ดีคาร์บอกซิเลสซึ่งเกี่ยวข้องในปฏิกิริยาแต่กลับไม่ได้ ในรอบ 0027 TCA
.
[ ]

นอกจากนี้ การสังเคราะห์ยีนของสารที่มีประโยชน์ เช่น รอน
มนุษย์ สามารถใช้เป็นยีนจากภายนอกของ
ดอกเบี้ย ดังนั้น ห้วยทรายของการประดิษฐ์ในปัจจุบันสามารถ
ใช้เป็นระบบที่ผลิตสารที่มีประโยชน์เช่น [ 0028 ]
เพิ่มเติม เลือกเครื่องหมายอาจจะใช้เป็นยีนจากภายนอกที่สนใจ . การเลือกเครื่องหมายสามารถใช้เพื่อวัตถุประสงค์เดียวกัน 35 เป็นการดื้อยาของยีนดังกล่าวข้างต้น เพิ่มเติม






โดยเฉพาะการใช้การเลือกเครื่องหมายมีประโยชน์ทำให้เป็นไปได้ที่จะเลือกปลูกทรานสฟอร์แมนต์คนเดียวแม้ว่าสายพันธุ์ป่าของยูกลีนาเป็นปัจจุบัน หรือถ้าไม่ทรานสฟอร์แมนต์ที่แนะนำยีนหายไปกลายเป็น

[ ]
0029 ผลิตวลี " แบกยีนดื้อยาและยีนจากภายนอกที่สนใจในลักษณะ " ที่ใช้ในที่นี้ expressible
ไม่ได้โดยเฉพาะอย่างยิ่งจำกัด ตัวอย่างเช่น หมายถึงแบก 10 ยาต้านทานยีนและยีนจากภายนอกสนใจกล่าวถึง
ข้างต้นในลักษณะ expressible จนถึงห้วยทราย เป็น subcultured
อย่างน้อย 10 หัวข้อในการขาดยา ซึ่งยาต้านยีน
แนะนำแสดงความต้านทาน ในกรณีนี้
จำนวนหัวข้อในการเป็นมากขึ้นกว่า 15 , 15 และมากขึ้นกว่า 20 ไม่ว่ายูกลีนาพก
expressible ยีนในลักษณะที่สามารถยืนยันโดยการ RT - PCR
บน mRNA ที่ได้จากห้วยทราย โดยใช้ไพรเมอร์ที่สามารถ
ขยายยีน 0030
[ ]
ในปัจจุบันการประดิษฐ์ยาต้านยีนและ
ยีนจากภายนอกที่สนใจเป็นกุญแจภายใต้การควบคุมของ
อย่างน้อยห้วยทรายในโปรโมเตอร์ ตัวอย่างของยูกลีนา
ในโปรโมเตอร์รวมถึง แต่ไม่ จำกัด ของ
โปรโมเตอร์ , ไพรูเวท : na ] JP อ ซิโดรีดักเทส glyceraldehyde-3
, - ฟอสเฟตดีไฮโดรจีเนส ฉะนี้แล ,bifunctional
ทฤษฎีบทเวียนบังเกิดวงจรเอนไซม์ a-tubulin ฯลฯ โดยเฉพาะ
ไพรู : nadp อ ซิโดรีดักเทสโปรโมเตอร์เป็นที่นิยม 0031
[ ]
ในปัจจุบันการประดิษฐ์ยาต้านยีนและ
ยีนจากภายนอกที่สนใจเป็นแบบบูรณาการใน

) . ไม่มีข้อ จำกัด ใด แต่ยา
ยีนที่ต้านทานและยีนจากภายนอกที่สนใจเป็นกุญแจ
บูรณาการจีโนมโดยการเปรียบเทียบ . ไม่ว่า
ยีนรวมในจีโนมมนุษย์ได้รับการยืนยันโดยภาคใต้ 35 ราย . อย่างไรก็ตาม จำนวนสำเนาของยีน
แนะนำ







อาจไม่สูงพอ และไม่มีสัญญาณที่ชัดเจนอาจจะได้มาด้วย
Southern blotting . เช่นในกรณีRT-PCR โดยใช้ไพรเมอร์ที่
สามารถขยายแนะนำยีนที่สามารถแสดงบน mRNA
สกัดจากห้วยทราย อย่างต่อเนื่อง subcultured 20
5 หัวข้อในการขาดงานของยาที่นำยีนที่ต้านทานยา
แสดงความต้านทาน และถ้าเป้าหมายเป็นลำดับ
ขยาย มันสามารถกำหนดว่า ยีนมีการบูรณาการใน
จีโนม . มากขึ้นโดยเฉพาะมันสามารถได้รับการพิจารณาว่า การตรวจหายีน
าโดยวิธี RT-PCR ) จากเซลล์
10 อย่างต่อเนื่อง subcultured ขาด
Selective pressure ระบุว่ามีความเป็นไปได้สูงที่แนะนำยีนจะบูรณาการในจีโนม