Double-stranded RNA (dsRNA) can tri

Double-stranded RNA (dsRNA) can trigger silencing of
homologous gene expression by a mechanism termed RNAi
(for RNA-mediated interference) (1). RNAi is an evolutionarily
conserved phenomenon and a multistep process that involves
generation of active small interfering RNA (siRNA) in vivo
through the action of an RNase III endonuclease, Dicer. The
resulting 21- to 23-nt siRNA mediates degradation of the
complementary homologous RNA (reviewed in refs. 2–4).
RNAi has been used as a reverse genetic tool to study gene
function in multiple model organisms, including plants, Caenorhabditis
elegans, and Drosophila where large dsRNAs efficiently
induce gene-specific silencing (1, 5–7).
One obstacle to achieving RNAi in mammals is that dsRNAs
longer than 30 nt will activate an antiviral response, leading to
the nonspecific degradation of RNA transcripts and a general
shutdown of host cell protein translation (8, 9). As a result, the
long dsRNA, with a few exceptions (10, 11), does not produce
RNAi activity, and RNAi therefore is not a general method for
silencing specific genes in mammalian cells. This obstacle has
been recently overcome by Tuschl and colleagues (12) who found
that gene-specific suppression in mammalian cells can be
achieved by vitro-synthesized siRNA that are 21 nt in length, long
enough to induce gene-specific suppression, but short enough to
evade the host interferon response.
In this article, we describe a DNA vector-based approach to
achieve RNAi in mammalian cells. With this approach, small
RNAs are predicted to be synthesized from a DNA template
under the control of an RNA polymerase III (Pol III) promoter
in transfected cells. Pol III has the advantage of directing the
synthesis of small, noncoding transcripts whose 3
ends are
defined by termination within a stretch of 4–5 thymidines (Ts)
(13). These properties make it possible to use DNA templates to
synthesize, in vivo, small RNAs with structural features close to
what has been found to be required for active siRNAs synthesized
in vitro (14).
Using this DNA vector-based RNAi approach, we show that
transfected as well as endogenous genes can be efficiently
inhibited. We have examined the effects of the in vivosynthesized
siRNAs on a transfected reporter gene, a housekeeping
gene, and genes involved in cell cycle control and DNA
methylation. In each and every case, we find that these small
RNAs efficiently and specifically inhibit the synthesis of proteins

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สองครั้งที่ควั่น RNA (dsRNA) สามารถเรียกใช้ภายในของเรียกว่าเซทจะมียีน โดยกลไก RNAi(สำหรับ RNA สื่อสัญญาณรบกวน) (1) RNAi เป็นการ evolutionarilyนำปรากฏการณ์และกระบวนการ multistep ที่เกี่ยวข้องกับรุ่นใช้งานขนาดเล็กรบกวน RNA (siRNA) ในร่างกายผ่านการดำเนินการของ endonuclease มี RNase III, Dicer การสลายของสื่อผล 21 กับ 23 nt siRNAเสริมเซทจะมี RNA (ทบทวน refs. 2 – 4)มีการใช้เป็นเครื่องมือทางพันธุกรรมย้อนกลับ RNAi ในการศึกษายีนฟังก์ชันในหลายรูปแบบสิ่งมีชีวิต รวมทั้งพืช Caenorhabditiselegans และแมลงที่มีขนาดใหญ่ dsRNAs ได้อย่างมีประสิทธิภาพทำให้เกิดยีนเฉพาะประสาน (1, 5-7)อุปสรรคหนึ่งจะบรรลุ RNAi ในการเลี้ยงลูกด้วยนมเป็นที่ dsRNAsนานกว่า 30 nt จะเปิดใช้งานตอบสนองต่อต้านไวรัส นำไปลดแบบใบ RNA และทั่วไปปิดของแปลโปรตีนเซลล์โฮสต์ (8, 9) เป็นผล การไม่ผลิต dsRNA ยาว พร้อม (10, 11),กิจกรรม RNAi และ RNAi จึงไม่วิธีการทั่วไปสำหรับสมรเฉพาะยีนในเซลล์ที่เลี้ยงลูกด้วยนม อุปสรรคนี้ได้เพิ่งเอาชนะ โดย Tuschl และเพื่อนร่วมงาน (12) ที่พบว่า จะสามารถปราบปรามเฉพาะยีนในเซลล์ที่เลี้ยงลูกด้วยนมโดยหลอดทดลองสังเคราะห์ siRNA ที่ 21 nt ยาว ยาวพอที่จะปราบปรามเฉพาะยีน แต่สั้นพอที่จะก่อให้เกิดหลบเลี่ยงการตอบสนองของ interferon โฮสต์ในบทความนี้ เราอธิบายวิธีการเวคเตอร์ดีเอ็นเอเพื่อบรรลุ RNAi ในเซลล์ที่เลี้ยงลูกด้วยนม ด้วยวิธีนี้ เล็กRNAs คาดว่า จะมีสังเคราะห์จากดีเอ็นเอแม่แบบภายใต้การควบคุมของการอาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส III (Pol III) โปรโมเตอร์ในเซลล์ transfected Pol III มีประโยชน์ในการกำกับการมี noncoding ใบ 3 สิ้นสุดการสังเคราะห์ของขนาดเล็กกำหนด โดยการเลิกจ้างในระยะยืดของ 4-5 thymidines (Ts)(13) . คุณสมบัติเหล่านี้ทำให้สามารถใช้แม่แบบดีเอ็นเอสังเคราะห์ RNAs ในร่างกาย ขนาดเล็กมีโครงสร้างใกล้เคียงกับสิ่งที่ได้พบว่าจำเป็นสำหรับการใช้งาน siRNAs สังเคราะห์ในหลอดทดลอง (14)เราใช้ RNAi วิธีนี้ดีเอ็นเอแบบเวกเตอร์ แสดงที่ยีน transfected เช่นเดียว กับภายนอกได้อย่างมีประสิทธิภาพยับยั้ง เรามีการตรวจสอบผลกระทบของ vivosynthesized ในsiRNAs บน transfected ข่าวยีน การทำความสะอาดยีน และยีนที่เกี่ยวข้องในการควบคุมวงจรเซลล์และดีเอ็นเออัณฑะ ในทุกกรณี เราพบว่าเหล่านี้เล็กRNAs โดยเฉพาะ และมีประสิทธิภาพยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เกลียวคู่
การแสดงออกของยีนคล้ายคลึงกันโดยกลไกที่เรียกว่า
( RNAi
ปรากฏการณ์อนุรักษ์และกระบวนการที่เกี่ยวข้องกับการ
รุ่นที่ใช้งาน
ผ่านการกระทำของ
ส่งผล
RNA - 4).
RNAi
ฟังก์ชั่นในสิ่งมีชีวิตหลายรุ่นรวมทั้งพืช
elegans,
ทำให้เกิดยีน- สมรเฉพาะ - 7).
หนึ่งอุปสรรคต่อการบรรลุ
นานกว่า
การย่อยสลายเชิญชมของยีนที่อาร์เอ็นเอและทั่วไป
ปิดโฮสต์แปลโปรตีนเซลล์ เป็นผลให้
ยาว
กิจกรรม
ห้ามไม่ให้พูดเฉพาะยีนในเซลล์สัตว์ อุปสรรคนี้ได้
รับการเอาชนะเร็ว ๆ นี้โดย
ว่าการปราบปรามยีนเฉพาะในเซลล์สัตว์สามารถ
ทำได้โดย
พอที่จะทำให้เกิดการปราบปรามยีนเฉพาะ แต่สั้นพอ เพื่อ
หลบเลี่ยงการตอบสนองโฮสต์
ในบทความนี้เราจะอธิบายวิธีการดีเอ็นเอเวกเตอร์ที่ใช้ในการ
บรรลุ ด้วยวิธีนี้มีขนาดเล็ก
RNAs
ภายใต้การควบคุมของโพลิเมอร์อาร์เอ็นเอที่สาม
ในเซลล์ Pol III
สังเคราะห์ขนาดเล็กยีน ปลายจะถูก
กำหนดโดยการเลิกจ้างภายในยืด - 5 thymidines (TS)
(13) คุณสมบัติเหล่านี้ทำให้มันเป็นไปได้ที่จะใช้แม่แบบดีเอ็นเอ
สังเคราะห์ในร่างกาย
สิ่งที่ได้รับพบว่ามีความจำเป็นสำหรับการ
ในหลอดทดลอง
นี้โดยใช้วิธีการ
transfected
ยับยั้ง เราได้ตรวจสอบผลกระทบของใน
siRNAs
ยีนและยีนที่เกี่ยวข้องในการควบคุมวัฏจักรของเซลล์และ
methylation ในแต่ละคนและทุกกรณีเราพบว่าสิ่งเหล่านี้มีขนาดเล็ก
RNAs