Real-Time Polymerase Chain Reaction

Real-Time Polymerase Chain Reaction (PCR) Analysis

To determine the effect of A. princeps extract on gene expression, a real-time PCR assay was performed. The subminimal inhibitory concentration (1–4 mg/mL) of A. princeps extract was used to treat and culture MRSA for 24 h. Total RNA was isolated from S. mutans by using Trizol reagent (Gibco-BRL) according to the manufacturer's instructions. Then, cDNA was synthesized using a reverse transcriptase reaction (Superscript; Gibco-BRL). The DNA amplifications were carried out using an ABI-Prism 7,000 Sequence Detection System with Absolute QPCR SYBR Green Mixes (Applied Bio systems Inc., Foster City, CA, USA). The primer pairs that were used in this study were described by previous report [17–20] and are listed in Table 1. 16S rRNA was used as an internal control.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พอลิเมอเรสแบบเรียลไทม์วิเคราะห์ปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR)เพื่อกำหนดผลของสารสกัด A. princeps ยีน มีดำเนินการทดสอบ PCR แบบเรียลไทม์ Subminimal ลิปกลอสไขความเข้มข้น (1-4 mg/mL) ของสารสกัด A. princeps ถูกใช้ในการรักษา และวัฒนธรรม MRSA สำหรับอาร์เอ็นเอรวม 24 h. ถูกแยกต่างหากจาก S. แมงแลง โดยใช้ Trizol รีเอเจนต์ (Gibco BRL) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต แล้ว cDNA ถูกสังเคราะห์การใช้ปฏิกิริยาย้อนกลับ transcriptase (ตัวยก Gibco-BRL) Amplifications ดีเอ็นเอได้ดำเนินด้วยระบบตรวจสอบการลำดับ 7000 ABI ปริซึมสัมบูรณ์ QPCR SYBR Green ผสม (ใช้ชีวภาพระบบ Inc. ฟอสเตอร์ซิตี้ CA, USA) คู่รองพื้นที่ใช้ในการศึกษานี้ได้กล่าวถึงก่อนหน้านี้รายงาน [17-20] และแสดงไว้ในตารางที่ 1 16S rRNA ถูกใช้เป็นตัวควบคุมภายใน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปฏิกิริยาแบบ Real-Time ลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR) การวิเคราะห์การตรวจสอบผลของสารสกัดจากเอท่านชายในการแสดงออกของยีนที่เป็นreal-time PCR ทดสอบที่ได้ดำเนินการ ความเข้มข้นยับยั้ง subminimal (1-4 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ของสารสกัดจากท่านชายเอถูกใช้ในการรักษาเชื้อ MRSA และวัฒนธรรมเป็นเวลา 24 ชั่วโมง รวมอาร์เอ็นเอที่แยกได้จาก mutans เอสโดยใช้น้ำยา Trizol (Gibco-BRL) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต จากนั้นยีนสังเคราะห์โดยใช้ปฏิกิริยาย้อนกลับ transcriptase (ยก; Gibco-BRL) เครื่องขยายเสียงดีเอ็นเอได้ดำเนินการโดยใช้ปริซึม ABI-7000 ลำดับระบบตรวจจับกับแอบโซลูท qPCR SYBR สีเขียวผสม (ประยุกต์ระบบไบโออิงค์ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) คู่ไพรเมอร์ที่ถูกนำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับการอธิบายจากรายงานก่อนหน้านี้ [17-20] และมีการระบุไว้ในตารางที่ 1 16S rRNA ถูกนำมาใช้เป็นระบบการควบคุมภายใน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เวลาจริงโดยปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) การวิเคราะห์

เพื่อศึกษาผลของสารสกัด . princeps ต่อการแสดงออกของยีน , วิธี PCR แบบเรียลไทม์ กำหนด ความเข้มข้นของสาร subminimal ( 1 – 4   mg / ml ) ของ princeps สกัดถูกใช้ในการรักษาวัฒนธรรมและ MRSA 24   . รวม RNA ถูกแยกจาก S . mutans โดยใช้ trizol Reagent ( gibco BRL ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตแล้วดีเอ็นเอสังเคราะห์โดยใช้ปฏิกิริยา reverse transcriptase ( ตัวยก ; gibco BRL ) ดีเอ็นเอ amplifications ทดลองใช้ abi ปริซึม 7000 ลำดับระบบตรวจจับด้วย qpcr SYBR กรีนแบบผสม ( ชีวะ Systems , Inc , Foster City , CA , USA ) ไพรเมอร์คู่ ที่ใช้ในการศึกษา คือ การอธิบายโดยรายงานก่อนหน้านี้ 17 – 20 ] และมีการระบุไว้ในตารางที่ 1เบส 16S rRNA เป็นใช้เป็นระบบควบคุมภายใน