After a 6-day osteogenic induction,

After a 6-day osteogenic induction, the murineMC3T3-E1 cellswere
incubated using serum-free medium,which contained Rb2 and/or H2O2
for 2 days. The cells were stained using the BCIP/NBT alkaline phosphatase
color development kit according to themanufacturer's instructions.
To evaluate the ALP activity, the cell monolayer was lysed using the cell
lysis buffer. Subsequently, the lysate was centrifuged at 10,000 g for
5 min. The clear supernatant was used to measure the ALP activity,
which was determined employing the ALP activity assay kit. The total
protein consistencies were determined using the Bradford protein
assay method. The ALP activity was normalized to total protein, which
was measured using the Bradford protein assay method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลังจากที่ 6-วัน osteogenic เหนี่ยวนำ cellswere murineMC3T3-E1incubated ใช้ฟรีเซรั่มกลาง ที่อยู่ Rb2 หรือ H2O2วัน 2 เซลล์มีสีโดยใช้การ BCIP/เอ็น บีทีอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสชุดพัฒนาสีตามคำแนะนำของ themanufacturerการประเมินกิจกรรมแอลป์ monolayer เซลล์ถูก lysed โดยใช้เซลล์บัฟเฟอร์ lysis ในเวลาต่อมา ที่ lysate ถูก centrifuged ที่ g 10000 สำหรับ5 นาที ใช้วัดกิจกรรมแอลป์ supernatant ชัดเจนซึ่งได้กำหนดใช้ชุดวิเคราะห์กิจกรรมแอลป์ ผลรวมconsistencies โปรตีนถูกกำหนดโดยใช้โปรตีนแบรดฟอร์ดวิเคราะห์วิธีการ กิจกรรมแอลป์ได้ตามปกติให้โปรตีนรวม ซึ่งถูกวัดโดยใช้วิธีการวิเคราะห์โปรตีนของแบรดฟอร์ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากที่ 6 วันเหนี่ยวนำ osteogenic ที่ murineMC3T3-E1 cellswere
บ่มโดยใช้สื่อในซีรั่มฟรีที่มี Rb2 และ / หรือ H2O2
2 วัน เซลล์มีการย้อมโดยใช้ BCIP / NBT
อัลคาไลน์ฟอสฟาชุดพัฒนาสีตามคำแนะนำของthemanufacturer.
เพื่อประเมินกิจกรรม ALP ที่ monolayer เซลล์ถูก lysed
โดยใช้เซลล์บัฟเฟอร์สลาย ต่อมา lysate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมสำหรับ
5 นาที สารละลายที่ชัดเจนถูกนำมาใช้ในการวัดกิจกรรมภูเขาที่ซึ่งถูกกำหนดจ้างกิจกรรม ALP ชุดทดสอบ รวมสอดคล้องโปรตีนได้รับการพิจารณาโดยใช้โปรตีนแบรดฟอวิธีการทดสอบ กิจกรรม ALP ได้ปกติโปรตีนรวมซึ่งวัดโดยใช้วิธีการทดสอบโปรตีน Bradford

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังจากที่ 6 วัน osteogenic อุปนัย , murinemc3t3-e1
บ่มใช้ serum-free ระดับกลาง ซึ่งมี rb2 และ / หรือ H2O2
2 วัน เซลล์ที่ถูกย้อมด้วย bcip / NBT ชุดพัฒนาสีด่าง phosphatase
ตามคําแนะนําของผู้ผลิต .
ประเมินแอลป์กิจกรรมเซลล์อย่างมี lysed โดยใช้เซลล์
การสลายบัฟเฟอร์ ต่อมาการ lysate คือระดับที่ 10 , 000 g
5 นาทีนำใสใช้วัดแอลป์กิจกรรม
ซึ่งตั้งใจใช้กิจกรรม ALP ( ชุด มีความสอดคล้องโปรตีนรวม
ตัดสินใจใช้แบรดฟอร์ดโปรตีน
3 วิธี กิจกรรมกับ alp ปกติโปรตีนทั้งหมด ซึ่ง
วัดใช้แบรดฟอร์ดโปรตีนโดยวิธี