Results and discussionThe hematolog

Results and discussion
The hematological profile and G6PD activity of both patients are de- scribed in Table 1.
The sequencing analysis of the exons and intronic flanking regions of the G6PD gene identified two novel DNA variants that have not been previously reported (Fig. 1). Neither of the nucleotide changes, searched in the databases Exome Aggregation Consortium (ExAC), 1000 Ge- nomes (1000G), Single Nucleotide Polymorphism Database (dbSNP), and Human Gene Mutation Database (HGMD), were found.
The NM_001042351.2:c.995C N T DNA change was detected in pro- band no. 1. This variant was found in exon 9 and determines the Serine332Phenylalanine (Ser332Phe) amino acid change. The NM_001042351.2:c.1226C N A change was detected in proband no. 2. The variant is located in exon 10 and is associated with the Proline409Glutamine (Pro409Gln) amino acid change.
PolyPhen-2 and SIFT predicted that both amino acid changes (Ser332Phe and Pro409Gln) are probably damaging and deleterious.
Both the mother and the sister of proband no. 1 were heterozygous for the DNA variants found and did not show signs or symptoms of the disease phenotype, a fact that is usually expected for X-linked conditions.
To analyze the impact of amino acid change, the results structures were modeled using the previous crystals of G6PD as a template. The model shows that both mutated amino acids are located far from the ac- tive site, meaning that the interpretation of the change in protein func- tion is not straightforward. The analysis of Ser332Phe using the X-ray structure shows that the main effect is a breakage of the hydrogen bond between the side chains of serine 332 and aspartic acid 251 2). We hypothesize that the amino acid replacement could generate a conformational change in the loop at the access of the active site, which may affect the enzyme activity disturbing the substrate uptake.
Additionally, the Pro409Gln change affects the domain which is rel- evant for dimerization and is located on an intersubunit contact surface. The affected proline is at the end of a β-sheet and, because it is a rigid amino acid, it usually provokes the rupture of secondary structure ele- ments. Consequently, the change of proline for another amino acid could alter the structure and β-sheet, affecting dimer formation. The ho- modimeric or tetrameric structure is essential for protein stability and enzymatic activity [4] and therefore, the Pro409Gln change could affect normal dimerization, decreasing the activity of the enzyme (Fig. 2).
A previously described different mutation (HGMD: CM044625) at the same position 409 (Pro409Arg) leads to changes in G6PD kinetics and determines an unstable variant in comparison to the wild type [14]. This finding allows us to hypothesize that proline plays an impor- tant role in enzyme stability and function.
Although functional assays would be important to demonstrate the pathogenicity of these new variants, unfortunately, it was not possible to perform them at our laboratory.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลและการอภิปรายโปรไฟล์ hematological และ G6PD กิจกรรมของผู้ป่วยทั้งสองได้ de-scribed ในตารางที่ 1รายงานวิเคราะห์ลำดับของ exons และภูมิภาค intronic ขนาบของ G6PD ระบุยีนสองนวนิยายดีเอ็นเอสายพันธุ์ที่ไม่ได้ก่อนหน้านี้ (รูปที่ 1) ไม่ของนิวคลีโอไทด์เปลี่ยนแปลง การค้นหาในฐานข้อมูล Exome รวม Consortium (ExAC) 1000 Ge nomes (1000 กรัม), ฐาน ข้อมูลที่แตกต่างเดียวนิวคลีโอไทด์ (dbSNP), และมนุษย์ยีนผ่าฐานข้อมูล (HGMD), พบตรวจพบการเปลี่ยนแปลงดีเอ็นเอของ T N NM_001042351.2:c. 995 C ใน pro แถบหมายเลข 1 ตัวแปรนี้พบใน exon 9 และกำหนด Serine332Phenylalanine การเปลี่ยนกรดอะมิโน (Ser332Phe) NM_001042351.2:c. 1226 C N ตรวจพบการเปลี่ยนแปลงใน proband หมายเลข 2 ตัวแปรอยู่ใน exon 10 และเชื่อมโยงกับ Proline409Glutamine การเปลี่ยนกรดอะมิโน (Pro409Gln)PolyPhen-2 และ SIFT ทำนายทั้งกรดอะมิโน (Ser332Phe และ Pro409Gln) ได้อาจเสียหาย และร้ายแม่และน้องสาวของ proband ๑ มี heterozygous สำหรับย่อยดีเอ็นเอที่พบ และไม่ได้แสดงอาการของโรคกนิ ข้อเท็จจริงที่มักจะคาดว่าสำหรับเงื่อนไขที่เชื่อมโยง Xการวิเคราะห์ผลกระทบของการเปลี่ยนกรดอะมิโน โครงสร้างผลลัพธ์ถูกจำลองโดยใช้ผลึกก่อนหน้าของ G6PD เป็นแม่ แบบจำลองแสดงให้เห็นว่า กรดอะมิโนทั้งสองกลายพันธุ์อยู่ไกลจากเว็บไซต์ ac tive ซึ่งหมายความ ว่า การตีความการเปลี่ยนแปลงโปรตีน func-ทางการค้าไม่ตรงไปตรงมา การวิเคราะห์ของ Ser332Phe โดยใช้ X-ray โครงสร้างแสดงให้เห็นว่า ผลกระทบหลัก การแตกของพันธะไฮโดรเจนระหว่างโซ่ข้างของรอบเส้นใยประสาท 332 และกรด 251 2) เรา hypothesize ว่าแทนกรดอะมิโนสามารถสร้างการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างการวนซ้ำในการเข้าถึงของไซต์ใช้งาน ซึ่งอาจมีผลต่อเอนไซม์ที่รบกวนการดูดซึมของพื้นผิวนอกจากนี้ การเปลี่ยนแปลง Pro409Gln มีผลต่อโดเมนซึ่งเป็น rel evant สำหรับ dimerization และอยู่บนพื้นผิวติดต่อ intersubunit เป็นได้รับผลกระทบคือที่สุดของβ-แผ่น แล้ว เพราะมันเป็นกรดอะมิโนแข็ง มันมักจะกระตุ้นให้เกิดการแตกออกของโครงสร้างรองเอดัง จึง การเปลี่ยนแปลงของ proline สำหรับกรดอะมิโนอื่นอาจปรับเปลี่ยนโครงสร้างและβ-แผ่น ส่งผลกระทบต่อการก่อตัวของ dimer โฮ modimeric หรือโครงสร้าง tetrameric เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับความมั่นคงของโปรตีน และเอนไซม์ [4] และดังนั้น การเปลี่ยนแปลง Pro409Gln อาจมีผลต่อ dimerization ปกติ การลดกิจกรรมของเอนไซม์ (2 รูป)A กลายพันธุ์ต่าง ๆ ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (HGMD: CM044625) ที่ตำแหน่งเดียวกัน 409 (Pro409Arg) นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงใน G6PD จลนพลศาสตร์ และกำหนดตัวแปรไม่เสถียรเมื่อเทียบกับป่าประเภท [14] ค้นหานี้ให้เราได้ hypothesize บทบาทที่เล่นนำ tant proline ในความเสถียรของเอนไซม์และทำงานแม้ว่า assays ทำงานจะเป็นสิ่งสำคัญที่แสดงให้เห็นถึงตัวแปรเหล่านี้ใหม่ pathogenicity อยู่แต่น่าเสียดาย ก็ไม่สามารถทำได้ในห้องปฏิบัติการของเรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการค้นหาและการอภิปราย
ทางโลหิตวิทยาและรายละเอียด G6PD กิจกรรมของผู้ป่วยทั้งสองจะถูกกล่าวไว้ในตารางที่ 1
การวิเคราะห์ลำดับเบสของ exons และ INTRONIC ขนาบภูมิภาคของยีน G6PD ที่ระบุสองสายพันธุ์ดีเอ็นเอใหม่ที่ยังไม่ได้รับรายงานก่อนหน้านี้ (รูปที่ 1). . ทั้งการเปลี่ยนแปลงเบื่อหน่าย, การสืบค้นในฐานข้อมูล exome รวม Consortium (exac) 1000 จี Nomes (1000G), โสดเบส Polymorphism ฐานข้อมูล (dbSNP) และมนุษย์กลายพันธุ์ของยีนฐานข้อมูล (HGMD) ถูกพบ.
NM_001042351.2: การเปลี่ยนแปลง c.995C NT ดีเอ็นเอถูกตรวจพบในวงไม่มีโปร 1. ตัวแปรนี้ถูกพบในเอกซ์ซอน 9 และกำหนดเปลี่ยนแปลง Serine332Phenylalanine (Ser332Phe) กรดอะมิโน NM_001042351.2: c.1226C NA เปลี่ยนแปลงถูกตรวจพบในไม่มี proband 2. ตัวแปรที่อยู่ในเอกซ์ซอน 10 และมีความเกี่ยวข้องกับ Proline409Glutamine (Pro409Gln) การเปลี่ยนแปลงกรดอะมิโน.
PolyPhen-2 และร่อนคาดการณ์ว่าทั้งกรดอะมิโนเปลี่ยนแปลง (Ser332Phe และ Pro409Gln) อาจจะสร้างความเสียหายและเป็นอันตราย.
ทั้งแม่และน้องสาว ไม่ proband 1 เป็น heterozygous สำหรับสายพันธุ์ของดีเอ็นเอที่พบและไม่ได้แสดงอาการหรืออาการของฟีโนไทป์โรคความจริงที่ว่ามักจะเป็นที่คาดหวังสำหรับเงื่อนไข X-linked.
การวิเคราะห์ผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงกรดอะมิโน, โครงสร้างผลการศึกษารูปแบบการใช้ผลึกก่อนหน้านี้ ของ G6PD เป็นแม่แบบ รูปแบบที่แสดงให้เห็นว่าทั้งกรดอะมิโนที่กลายพันธุ์จะอยู่ห่างไกลจากเว็บไซต์ Tive ทําหมายความว่าการตีความหมายของการเปลี่ยนแปลงในโปรตีนฟังก์ชั่นการที่ไม่ตรงไปตรงมา การวิเคราะห์โดยใช้โครงสร้าง Ser332Phe เอ็กซ์เรย์แสดงให้เห็นว่าผลกระทบหลักคือการแตกหักของพันธะไฮโดรเจนระหว่างโซ่ด้านข้างของซีรีน 332 และกรด aspartic 251 2) เราตั้งสมมติฐานว่าการเปลี่ยนกรดอะมิโนสามารถสร้างการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างในวงที่การเข้าถึงเว็บไซต์ที่ใช้งานอยู่ซึ่งอาจส่งผลกระทบต่อการทำงานของเอนไซม์รบกวนการดูดซึมสารตั้งต้น.
นอกจากนี้การเปลี่ยนแปลงที่มีผลกระทบต่อ Pro409Gln โดเมนซึ่งเป็น EVANT rel- สำหรับ dimerization และ ตั้งอยู่บนพื้นผิวการติดต่อ intersubunit โพรลีนได้รับผลกระทบในตอนท้ายของβแผ่นและเพราะมันเป็นกรดอะมิโนที่เข้มงวดก็มักจะกระตุ้นให้เกิดการแตกของโครงสร้างทุติยภูมิ ments ele- ดังนั้นการเปลี่ยนแปลงของโพรลีนสำหรับกรดอะมิโนอื่นสามารถปรับเปลี่ยนโครงสร้างและβแผ่นที่มีผลต่อการก่อตัว dimer . the modimeric Ho- หรือโครงสร้าง tetrameric เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับความมั่นคงโปรตีนและเอนไซม์ [4] และดังนั้นการเปลี่ยนแปลง Pro409Gln อาจส่งผลกระทบ dimerization ปกติลดการทำงานของเอนไซม์ (Fig. 2)
ก่อนหน้านี้อธิบายการกลายพันธุ์ที่แตกต่างกัน (HGMD: CM044625 ) ที่ตำแหน่งเดียว 409 (Pro409Arg) นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงในจลนพลศาสตร์ G6PD และกำหนดตัวแปรที่ไม่แน่นอนในการเปรียบเทียบกับป่าประเภท [14] การค้นพบนี้ช่วยให้เราสามารถตั้งสมมติฐานโพรลีนที่มีบทบาทสำาคัญในความมั่นคงและการทำงานของเอนไซม์.
แม้ว่าการตรวจการทำงานจะเป็นสิ่งสำคัญที่จะแสดงให้เห็นถึงการเกิดโรคสายพันธุ์ใหม่เหล่านี้โชคไม่ดีที่มันเป็นไปไม่ได้ที่จะดำเนินการได้ที่ห้องปฏิบัติการของเรา