Gene mutations in vivo
In vivo assays involve treating intact animal and analyzing appropriate tissues for genetic effects. The choice of suitable doses, treatment procedures, controls, and sample sizes is critical in the conduct of in vivo tests. Mutations may be detected either in somatic cells or in germ cell. The latter are of special interest with respect to risk for future generations. The mouse spot test is a tradition genetic assay for gene mutation in somatic cell. Visible spot of altered phenotype in mice heterozygous for coat-colored genes indicate mutations in the progenitor cells of the altered regions. Although straightforward in design, the spot test is less used today than other somatic cell assays or than its germ cell counterpart, the mouse specific-locus test.
Cells that are amenable to positive selection for mutants when collected from intact animals from the basis for efficient in vivo mutation-detection assays analogous to those in mammalian cell cultures. Lymphocytes with mutations in the HPRT gene are readily detected by selection for resistance to 6-thioguanine. The hprt assay in mice, rats, and monkeys is of special interest because it permits comparisons to the measurement of HPRT mutation in humans in mutational monitoring.
The Pig-a assay is a newer assay that has versions suitable for human monitoring and laboratory studies. The assay detects mutations that block GPI synthesis. Pig-a is a sex-linked gene whose gene product functions as an anchor for cell-surface proteins. Mutations in Pig-a can be detected in red blood cells from rats, mice, monkeys, and humans by means of fluorescent antibodies against GPI-anchored cell-surface proteins, such as CD59. Using antibodies to more than one GPI-linked marker has been suggested as a means of making the assay specific to Pig-a cells using proaerolysin (ProAER) selection or by flow cytometry. The fact that the same assay can be performed in several species makes this a promising assay for comparisons of human monitoring and controlled exposures in laboratory animals.
Besides determining whether agents are mutagenic, mutation assays provide information on mechanisms of mutagenesis that contributes to an understanding of mutational hazards. Base pair substitutions and large deletions, which may be indistinguishable on the basis of phenotype, can be differentiated through the use of probes for the target gene and Southern blotting , in that use base substitutions are too subtle to be detectable on the blots, whereas gross structural alterations are visible. Molecular analysis has been used to determine proportions of mutations ascribable to deletions and other structural alterations in several assays, including the specific-locus test for germ cell mutations in mice and the human HPRT assay. Gene mutations have been characterized at the molecular level by DNA sequence analysis both in transgenic rodents and in endogenous mammalian genes. Many HPRT mutations from human cells in vitro and in vivo have been analyzed at the molecular level and classified with respect to base pair substitutions, frame shifts, small deletions, large deletions, and other alterations.
โดยยีนกลายพันธุ์ชนิดหรือเกี่ยวข้องกับการรักษาสัตว์ และเนื้อเยื่อที่เหมาะสมยังคงวิเคราะห์ผลทางพันธุกรรม ทางเลือกของปริมาณที่เหมาะสมการรักษากระบวนการ การควบคุม และขนาดตัวอย่างที่สำคัญในการในการทดสอบร่างกาย การกลายพันธุ์อาจถูกตรวจพบในโซมาติกเซลล์ หรือ เซลล์สืบพันธุ์ . หลังมีความสนใจพิเศษเกี่ยวกับความเสี่ยงในอนาคตเมาส์ที่จุดทดสอบเป็นประเพณีทางพันธุกรรมในยีนกลายพันธุ์ในโซมาติกเซลล์ จุดที่มองเห็นได้ของการเปลี่ยนแปลงฟีโนไทป์ในหนูก่อนสำหรับยีนสีเสื้อบ่งบอกความผิดปกติของเซลล์ต้นกำเนิดของการเปลี่ยนแปลงภูมิภาค แม้ว่าจะตรงไปตรงมาในการออกแบบจุดที่ทดสอบใช้น้อยลง วันนี้กว่าหรือเซลล์ร่างกายอื่น ๆหรือมากกว่าของเซลล์สืบพันธุ์กัน เมาส์ที่เฉพาะเจาะจงสถานที่ทดสอบ
เซลล์ที่ให้ความร่วมมือกับการเลือกบวกสำหรับสายพันธุ์เมื่อเก็บจากสัตว์ครบถ้วนจากพื้นฐานที่มีประสิทธิภาพในการตรวจจับโดยการกลายพันธุ์หรือคล้ายคลึงกับในวัฒนธรรมเซลล์ ) . ลิมโฟซัยต์กับการกลายพันธุ์ในยีนที่ตรวจพบโดย hprt พร้อมการต้านทาน 6-thioguanine . การ hprt การทดสอบในหนู , หนู ,และลิงจะสนใจเป็นพิเศษเพราะมันอนุญาตให้เปรียบเทียบกับการวัด hprt การกลายพันธุ์ในมนุษย์ในการตรวจสอบเกี่ยวกับการเปลี่ยนแปลง .
( pig-a เป็นวิธีใหม่ที่เหมาะสำหรับการตรวจสอบรุ่นมนุษย์และปฏิบัติการศึกษา ( ตรวจพบการกลายพันธุ์ที่ปิดกั้นการสังเคราะห์ GPI . pig-a เป็นเซ็กส์ลิงค์ยีนยีนผลิตภัณฑ์ที่มีหน้าที่เป็นผู้ประกาศข่าวสำหรับโปรตีนที่ผิวเซลล์การกลายพันธุ์ใน pig-a สามารถตรวจพบได้ในเซลล์เม็ดเลือดแดงของหนู หนู ลิง และมนุษย์ โดยวิธีการของแอนติบอดีต่อโปรตีนเรืองแสง GPI ยึดเซลล์ผิว เช่น cd59 . การใช้แอนติบอดีที่มากกว่าหนึ่งเครื่องหมาย GPI เชื่อมโยงมีการเสนอเป็นวิธีการทำให้โดยเฉพาะเซลล์ pig-a ใช้ proaerolysin ( proaer ) ( หรือโดยการไหลความจริงที่ว่าวิธีเดียวกันสามารถดำเนินการในหลายสายพันธุ์ ทำให้การวิเคราะห์แนวโน้มสำหรับการเปรียบเทียบของมนุษย์ และควบคุมความเสี่ยงในสัตว์ทดลอง
นอกจากระบุว่าตัวแทนการศึกษาการกลายพันธุ์ยีน , ให้ข้อมูลเกี่ยวกับกลไกการจัดสรรเพื่อความเข้าใจเกี่ยวกับการเปลี่ยนแปลงอันตราย แทนการลบฐานคู่และขนาดใหญ่ซึ่งอาจจะไม่บนพื้นฐานของฟีโนไทป์ , สามารถที่แตกต่าง ผ่านการใช้ติดตามเป้าหมายและวิธีของภาคใต้ ที่ใช้ฐานแทนจะบอบบางเกินไปที่จะพบบนไม้ ในขณะที่การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างทั้งหมดจะมองเห็นได้การวิเคราะห์ระดับโมเลกุลได้ถูกใช้ในการกำหนดสัดส่วนของการกลายพันธุ์ที่ ascribable เพื่อลบและการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างอื่น ๆ ได้หลายวิธี ได้แก่ เฉพาะสถานที่ทดสอบการกลายพันธุ์ในหนูและเซลล์สืบพันธุ์ ( hprt มนุษย์ ความผิดปกติของยีนส์ได้โดดเด่นในระดับโมเลกุลโดยการวิเคราะห์ลำดับเบสดีเอ็นเอยีนทั้งในหนูและในการควบคุมยีนหลาย hprt การกลายพันธุ์จากเซลล์มนุษย์ในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง มาทำการวิเคราะห์ในระดับโมเลกุล และจัดตามฐานคู่ เปลี่ยน กรอบกะ , ลบ , ลบขนาดเล็ก ขนาดใหญ่ และการเปลี่ยนแปลงอื่น ๆ .
การแปล กรุณารอสักครู่..
