2.2. Carboxylesterase activityCarbo

2.2. Carboxylesterase activityCarboxylesterase activity was measured in the microsomal orpost-mitocondrial fractions by a continuous assay using 96-wellmicroplates (Hosokawa and Satoh, 2002). Homogenates (25 l)were incubated with 200 l 4-NPA as substrate (1 mM final concen-tration) and the buffer 50 mM phosphate buffer (pH 7.4) for 5 minat 25◦C. Formation of 4-nitrophenolate was read at 405 nm in aTECAN Infinite 200 microplate reader. Serial 4-NPA concentrations(0.03–1 mM) were assayed to estimate Vmaxand Kmvalues usingthe Michaelis–Menten equation, and the linearity transformationof Lineweaver–Burk plot. Carboxylesterase activity was measuredin triplicate and results are expressed as nmol/min/mg protein.Total protein content was determined by the Bradford’s method(1976), adapted to microplate and using the Bradford Bio-Rad Pro-tein Assay reagent and bovine serum albumin as the standard(0.05–0.5 mg/ml). The absorbance was read at 595 nm. All proteindeterminations were performed in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. Carboxylesterase activityCarboxylesterase กิจกรรมโดยวัดแบบแยกส่วน microsomal orpost-mitocondrial จากการทดสอบต่อเนื่องใช้ 96-wellmicroplates (โฮะโซะกะวะและ Satoh, 2002) Homogenates (25 ลิตร) ได้รับการกก 200 ลิตร 4-NPA เป็นพื้นผิว (1 มม.สุดท้าย concen-tration) และบัฟเฟอร์ 50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) สำหรับ 5 minat 25◦C ก่อตัวของ 4 nitrophenolate ถูกอ่านที่ 405 nm ใน aTECAN อนันต์ 200 microplate reader ความเข้มข้นของอนุกรม 4-NPA (0.03 – 1 มิลลิเมตร) ถูก assayed การประมาณสมการ usingthe Michaelis – Menten Vmaxand Kmvalues และ transformationof Lineweaver – Burk พล็อตเส้นตรง กิจกรรม Carboxylesterase measuredin ตสแควร์ และผลลัพธ์จะแสดงเป็นนาโน โมล/นาที/mg โปรตีน กำหนดปริมาณโปรตีนทั้งหมด โดย method(1976) ของแบรดฟอร์ด microplate ดัดแปลง และใช้ชีวภาพแบรดฟอร์ด-Rad Pro-เทียน Assay เอเจนต์และวัว serum albumin เป็นตัว standard(0.05–0.5 mg/ml) ค่าที่ถูกอ่านที่ 595 nm ดำเนินการทั้งหมด proteindeterminations ลข้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 กิจกรรม Carboxylesterase activityCarboxylesterase วัดในไมโครเศษส่วน orpost-mitocondrial โดยการทดสอบอย่างต่อเนื่องโดยใช้ 96 wellmicroplates (Hosokawa และ Satoh, 2002) homogenates (25? L) ถูกบ่มกับ 200? L 4 NPA เป็นสารตั้งต้น (1 มิลลิสุดท้าย concen-เคี้ยว) และกันชนขนาด 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) 5 ความสนใจ25◦C การก่อตัวของ 4 nitrophenolate ได้อ่านที่ 405 นาโนเมตรในเครื่องอ่าน microplate aTECAN อนันต์ 200 อนุกรมความเข้มข้น 4 NPA (0.03-1 มิลลิเมตร) และนำไปวิเคราะห์เพื่อประเมินสม Vmaxand Kmvalues ​​usingthe Michaelis-Menten และเชิงเส้น transformationof Lineweaver-Burk พล็อต กิจกรรม Carboxylesterase เป็นเพิ่มขึ้นสามเท่า measuredin และผลจะแสดงเป็น nmol / นาทีมิลลิกรัม protein.Total เนื้อหา / โปรตีนถูกกำหนดโดยวิธีการที่แบรดฟอร์ (1976) ดัดแปลง microplate และการใช้น้ำยาแบรดฟอ Bio-Rad Pro-Tein Assay และซีรั่มอัลบูมิวัวเป็น มาตรฐาน (0.05-0.5 mg / ml) ค่าการดูดกลืนได้อ่านที่ 595 นาโนเมตร proteindeterminations ทั้งหมดถูกดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . กิจกรรม activitycarboxylesterase carboxylesterase วัดในไมโครโซม orpost mitocondrial เศษส่วนโดยต่อเนื่อง โดยการใช้ 96 ( และ wellmicroplates โฮะโซะกะวะ ซาโต้ , 2002 ) homogenates ( 25 ลิตร ) ถูกบ่มกับ 200 ลิตร 4-npa เป็นสับสเตรท ( 1 มิลลิเมตรสุดท้าย concen มลภาวะ ) และ 50 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( Buffer pH 7.4 ) 5 minat 25 ◦ C . การก่อตัวของ 4-nitrophenolate คืออ่านที่ 405 nm ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย atecan อนันต์ 200 เครื่องอ่าน อนุกรม 4-npa ความเข้มข้น ( 0.03 – 1 มม. ) มีปริมาณประมาณ vmaxand kmvalues มาก–ใช้ menten สมการ และถึง transformationof ไลน์วีเวอร์–เบิร์กแปลง กิจกรรม carboxylesterase คือ measuredin ทำสำเนาสามฉบับ และผลลัพธ์จะแสดงเป็นโปรตีน nmol / min / มก. โปรตีนทั้งหมดถูกกำหนดโดยวิธีของแบรดฟอร์ด ( 1976 ) , ปรับให้เข้ากับพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยและการใช้ไบโอโปรเตียนในแบรดฟอร์ด RAD และระดับอัลบูมินเป็นมาตรฐาน ( 0.05 ) 0.5 mg / ml ) นได้อ่านที่ 595 นาโนเมตร ทั้งหมด proteindeterminations มีการปฏิบัติทั้งสามใบ