RNA Extraction, Reverse Transcripti

RNA Extraction, Reverse Transcription, and Amplification
RNA was extracted from varying amounts of baboon liver tissue by using the guanidinium-acid-phenol method (21) and digested with RNase-free DNase I (Fermentas, Waltham, MA, USA) to remove any contaminating DNA. The RNA concentration was determined by spectrophotometry with the NanoDrop ND-1000 Spectrophotometer. cDNA was generated by using SuperScript III reverse transcriptase (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) and oligo(dT)18 primers (Invitrogen) in accordance with the manufacturer’s instructions. Non–reverse transcribed negative controls were prepared in an identical manner except that diethylopyrocarbonate–treated water (Invitrogen) was added to each reaction instead of reverse transcriptase. The success of the reverse transcription reaction was confirmed by PCR amplification of a portion of the glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene (22). Subgenomic nested PCR amplifications of the precore/core (nt 1732–2045 and nt 1765–1968) and surface (nt 255–759 and nt 459–710) regions were also performed.
Detection of Covalently Closed Circular DNA
DNA was extracted from baboon liver tissue by using the QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN). DNA extracts were treated with Plasmid-Safe ATP-Dependent DNase (Epicenter Biotechnologies, Madison, WI, USA) to selectively hydrolyze linear double-stranded chromosomal DNA while leaving HBV covalently closed circular DNA (cccDNA) intact. The cccDNA was detected by real-time PCR (23) with the Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems).
Transmission of HBV to Experimentally Naive Baboons
Transmission of HBV to experimentally naive baboons was performed at the National Institutes of Health (Bethesda, MD, USA). Animals were housed and maintained at Bioqual, Inc. (Rockville, MD, USA). Housing and care of animals complied with all relevant guidelines and requirements, and the animals were housed in facilities that are fully accredited by the Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International. All protocols were reviewed and approved by the Institutional Animal Care and Use Committees of the National Institute of Allergy and Infectious Diseases of the National Institutes of Health and Bioqual, Inc. Experimentally naïve, domestically raised baboons were obtained from a domestic breeder (Mannheimer Foundation, Homestead, FL, USA). Before inclusion of animals in the study, serum was free of all markers of HBV replication when tested serologically and by nested PCR as described above.
Four experimentally naive baboons were each inoculated with 500 μL of serum obtained from HBV DNA–positive wild-caught baboons from South Africa. Each baboon was injected with serum from a single wild-caught baboon. After injection, serum was obtained from each of the 4 newly injected baboons at weekly intervals. Serum was used to measure levels of alanine aminotransferase, isocitrate dehydrogenase, γ-glutamyltranspeptidase, HBsAg, HBV e antigen, antibodies against HBV e antigen, antibodies against HBsAg, and anti-HBc.
DNA extracted from serum samples was used for nested PCR amplification of a region of the surface gene (nt 459–710). Twenty-five weeks after injection, the study was terminated and the baboons were euthanized. At necropsy, liver tissue and serum was obtained from each baboon for further testing to confirm that virus extracted from experimentally naive baboons was the same as that found in the original baboons.
Results
Prevalence of HBV in Wild-caught Baboons in South Africa
The prevalence of HBV in the baboon (P. ursinus orientalis) population in South Africa was determined by extracting DNA from serum of 69 wild-caught baboons and amplifying 4 regions of the viral genome (the precore/core, core, polymerase, and surface regions) by nested PCR. HBV DNA could not be amplified with a single-round PCR, indicating that HBV DNA was present at low levels in baboon serum.
Using the criterion of >3 of the 4 regions being PCR positive, we found that 11 (22.4%) of 49 adult and 4 (20.0%) of 20 juvenile wild-caught baboons were positive for HBV. The overall prevalence of hepadnaviral DNA in baboons was 21.7% (15/69). Furthermore, the presence and specificity of the HBV DNA was confirmed when detected directly in the serum of 5 of the 69 baboons by using Southern blot analysis. Only 5 of the 15 PCR-positive serum samples were positive by Southern hybridization because of the relatively lower sensitivity of this method.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสกัด RNA กลับถอดความและการขยาย
RNA ถูกสกัดจากจำนวนแตกต่างกันของเนื้อเยื่อตับลิงบาบูนโดยใช้วิธีการ guanidinium กรดฟีนอล (21) และย่อยด้วย DNAse rnase ฟรี i (fermentas, วอลแทม ma, usa) เพื่อเอา dna การปนเปื้อนใด ๆ ความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอถูกกำหนดโดย spectrophotometry กับ nanodrop ครั้ง-1000 spectrophotometer ที่cDNA ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ตัวยก iii transcriptase ย้อนกลับ (Invitrogen, คาร์ลสแคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) และ Oligo (dt) 18 ไพรเมอร์ (Invitrogen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ควบคุมเชิงลบที่ไม่ย้อนกลับคัดลอกได้เตรียมในลักษณะที่เหมือนกันยกเว้นว่าน้ำ diethylopyrocarbonate รับการรักษา (Invitrogen) ถูกบันทึกอยู่ในปฏิกิริยาแทน transcriptase ย้อนกลับแต่ละความสำเร็จของการเกิดปฏิกิริยาการถอดรหัสย้อนกลับได้รับการยืนยันโดยการขยาย pcr ส่วนของยีน dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (22) subgenomic amplifications PCR ที่ซ้อนกันของ precore / แกน (1732-2045 NT และ NT 1765-1968) และพื้นผิว (NT 255-759 และ 459-710 NT) ภูมิภาคได้ดำเนินการยัง.
ตรวจ dna วงกลมปิด covalently
การสกัดดีเอ็นเอจากเนื้อเยื่อตับลิงบาบูนโดยใช้ qiaamp ชุด dna มินิ (QIAGEN) สารสกัดดีเอ็นเอได้รับการรักษาด้วยเอทีพีขึ้นอยู่กับพลาสมิด DNAse ปลอดภัย (วิทยาการศูนย์กลาง, แมดิสัน, usa) เพื่อคัดเลือกสลายเส้นเกลียวคู่ดีเอ็นเอของโครโมโซมในขณะที่ออกจากไวรัสตับอักเสบบี dna วงกลมปิด covalently (cccdna) เหมือนเดิมcccdna ถูกตรวจพบโดยวิธี PCR เรียลไทม์ (23) ที่มีการผสมผสาน sybr พลังงานสีเขียว pcr หลัก (ศาสตร์ประยุกต์).
ส่งของไวรัสตับอักเสบบีที่จะทดลองลิงบาบูนไร้เดียงสา
ส่งของไวรัสตับอักเสบบีที่จะทดลองลิงบาบูนไร้เดียงสาได้ดำเนินการที่สถาบันสุขภาพแห่งชาติ ( bethesda, MD, USA) สัตว์ที่ถูกตั้งและการบำรุงรักษาที่ BIOQUAL, inc (Rockville, MD, USA)ที่อยู่อาศัยและการดูแลของสัตว์ที่ปฏิบัติตามแนวทางที่เกี่ยวข้องทั้งหมดและความต้องการและสัตว์ที่ถูกตั้งอยู่ในสิ่งอำนวยความสะดวกที่ได้รับการรับรองอย่างเต็มที่โดยสมาคมสำหรับการประเมินและการรับรองห้องปฏิบัติการการดูแลสัตว์นานาชาติโปรโตคอลทั้งหมดได้รับการตรวจสอบและอนุมัติโดยการดูแลสัตว์และการใช้คณะกรรมการสถานศึกษาของสถ​​าบันแห่งชาติของโรคภูมิแพ้และโรคติดเชื้อของสถ​​าบันแห่งชาติของสุขภาพและ BIOQUAL, inc ไร้เดียงสาทดลองลิงบาบูนขึ้นในประเทศที่ได้รับจากพ่อแม่พันธุ์ในประเทศ (Mannheimer รากฐาน, ที่อยู่อาศัยชั้น, usa) ก่อนที่จะรวมของสัตว์ในการศึกษาซีรั่มที่เป็นอิสระจากเครื่องหมายทั้งหมดของการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบีเมื่อทดสอบ serologically และโดยวิธี PCR ที่ซ้อนกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น.
สี่ลิงบาบูนไร้เดียงสาทดลองแต่ละคนเชื้อด้วย 500 ไมโครลิตรของซีรั่มที่ได้รับจากลิงบาบูนไวรัสตับอักเสบบี dna บวกป่าจับจากแอฟริกาใต้ แต่ละลิงบาบูนถูกฉีดด้วยซีรั่มจากลิงบาบูนป่าจับเดียว หลังจากฉีดซีรั่มที่ได้รับจากแต่ละ 4 ลิงบาบูนฉีดใหม่ในช่วงสัปดาห์ ซีรั่มถูกนำมาใช้ในการวัดระดับของ aminotransferase อะลานีน, dehydrogenase isocitrate, γ-glutamyltranspeptidase, HBsAg, ไวรัสตับอักเสบบีอีแอนติเจนแอนติบอดีต่อไวรัสตับอักเสบบีอีแอนติเจนแอนติบอดีกับ HBsAg และป้องกัน hbc.
dna สกัดจากตัวอย่างซีรั่มถูกนำมาใช้สำหรับการขยาย PCR ที่ซ้อนกันในภูมิภาคของยีนผิว (NT 459-710) ยี่สิบห้าสัปดาห์หลังจากการฉีดการศึกษาได้รับการยกเลิกและลิงบาบูนถูกฆ่าเพื่อเก็บเนื้อเยื่อ ที่ชันสูตรศพ,เนื้อเยื่อตับและซีรั่มที่ได้รับจากแต่ละลิงบาบูนสำหรับการทดสอบเพิ่มเติมเพื่อยืนยันไวรัสที่สกัดจากลิงบาบูนไร้เดียงสาทดลองที่เป็นเช่นเดียวกับที่พบในลิงบาบูนเดิม.

ผลความชุกของไวรัสตับอักเสบบีในลิงบาบูนป่าจับในแอฟริกาใต้
ความชุกของ ไวรัสตับอักเสบบีในลิงบาบูน (พีursinus orientalis) ประชากรในแอฟริกาใต้ถูกกำหนดโดยการสกัดดีเอ็นเอจากซีรั่มจาก 69 ลิงบาบูนป่าจับและขยาย 4 ภาคของจีโนมของไวรัส (ภูมิภาค precore / แกนหลักโพลิเมอร์และพื้นผิว) โดยวิธี PCR ที่ซ้อนกัน ไวรัสตับอักเสบบีดีเอ็นเอไม่สามารถขยายด้วย pcr รอบเดียวแสดงให้เห็นว่าไวรัสตับอักเสบบีดีเอ็นเอในปัจจุบันอยู่ในระดับต่ำในลิงบาบูนซีรั่ม.
โดยใช้เก​​ณฑ์ของ> 3 ใน 4 ภูมิภาคเป็น pcr บวกที่เราพบว่า 11 (22.4%) จาก 49 ผู้ใหญ่และ 4 (20.0%) จาก 20 ลิงบาบูนเยาวชนป่าจับเป็นบวกสำหรับไวรัสตับอักเสบบี ความชุกโดยรวมของ dna hepadnaviral ในลิงบาบูนเป็น 21.7% (15/69) ยิ่งไปกว่านั้นการแสดงตนและความจำเพาะของดีเอ็นเอไวรัสตับอักเสบบีได้รับการยืนยันเมื่อตรวจพบโดยตรงในซีรั่มของ 5 จาก 69 ลิงบาบูนโดยใช้การวิเคราะห์ blot ใต้ เพียง 5 จาก 15 pcr บวกตัวอย่างซีรั่มเป็นบวกโดยการผสมข้ามพันธุ์ในภาคใต้เพราะความไวค่อนข้างต่ำของวิธีการนี​​้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดอาร์เอ็นเอ Transcription กลับ และขยาย
อาร์เอ็นเอที่สกัดจากยอดเงินที่แตกต่างกันของเนื้อเยื่อตับลิงบาบูนโดยวิธี guanidinium-กรดวาง (21) และต้อง มีฟรี RNase DNase ฉัน (Fermentas, Waltham, MA, USA) เอาดีเอ็นเอใด ๆ contaminating ความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอที่ถูกกำหนด โดย spectrophotometry ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่าง ND-1000 NanoDrop สร้าง cDNA โดย III ตัวยกกลับ transcriptase (Invitrogen คาร์ลส CA, USA) และไพร oligo (dT) 18 เมอร์ (Invitrogen) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต Non–reverse ควบคุมลบทับถูกจัดเตรียมในลักษณะเหมือนกันยกเว้นว่าน้ำ diethylopyrocarbonate–treated (Invitrogen) ถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละปฏิกิริยาแทน transcriptase กลับ ความสำเร็จของปฏิกิริยา transcription กลับได้รับการยืนยัน โดยขยาย PCR ของบางส่วนของยีน dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (22) Subgenomic ซ้อน amplifications PCR precore/แกน (nt 1732–2045 และ nt 1765–1968) และพื้นผิว (nt 255–759 และ nt 459–710) ภูมิภาคยังดำเนินการ
ตรวจของ Covalently ปิดกลม DNA
ดีเอ็นเอที่สกัดจากเนื้อเยื่อตับลิงบาบูนโดย QIAamp ดีเอ็นเอขนาดเล็กชุด (QIAGEN) สารสกัดดีเอ็นเอได้รับ Plasmid ปลอดภัย DNase การ ATP ขึ้นอยู่กับ (จุดศูนย์กลาง Biotechnologies เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) เพื่อเลือก hydrolyze เส้นคู่-stranded DNA ของโครโมโซมขณะด้วยขั้น covalently ปิดกลม DNA (cccDNA) เหมือนเดิม CccDNA ที่พบ PCR แบบเรียลไทม์ (23) กับพลังงาน SYBR Green PCR หลักผสม (ใช้ Biosystems) .
ด้วยส่งของขั้นการ Experimentally Naive Baboons
ด้วยส่งของขั้นการ experimentally ขำน่า baboons ทำที่สถาบันของสุขภาพแห่งชาติ (เบเทสดา MD สหรัฐอเมริกา) สัตว์มีห้องพัก และรักษาที่ Bioqual, Inc. (ร็อควิลล์ MD สหรัฐอเมริกา) ที่อยู่อาศัยและดูแลสัตว์กำกับแนวทางเกี่ยวข้องและความต้องการ และสัตว์มีแห่งสิ่งอำนวยความสะดวกที่ครบครันได้รับการรับรอง โดยสมาคมประเมินและการรับรองห้องปฏิบัติการสัตว์ดูแลประเทศ โพรโทคอทั้งหมดถูกตรวจสอบ และอนุมัติ โดยสถาบันสัตว์ดูแลและใช้คณะกรรมการของสถาบันแห่งชาติของโรคภูมิแพ้ และโรคติดเชื้อของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ Bioqual, Inc. Experimentally ขำน่า baboons ยกในประเทศได้รับจากพันธุ์ในประเทศ (มูลนิธิ Mannheimer โฮม FL สหรัฐอเมริกา) ก่อนที่จะรวมในการศึกษา สัตว์ เซรั่มไม่เครื่องหมายทั้งหมดของการจำลองแบบด้วยขั้น เมื่อทดสอบ serologically โดยซ้อน PCR ที่อธิบายข้างต้น
สี่ experimentally baboons ขำน่าได้ละ inoculated กับ μL 500 ของซีรั่มที่ได้รับจาก DNA–positive ด้วยขั้นติดป่า baboons จากแอฟริกาใต้ ลิงบาบูนละถูกฉีด ด้วยซีรั่มจากเป็นลิงบาบูนติดป่าเดียว หลังจากฉีด เซรั่มได้รับจาก baboons ใหม่ฉีด 4 ช่วงเวลารายสัปดาห์ เซรั่มที่ใช้วัดระดับของ aminotransferase อะลานีน isocitrate dehydrogenase γ-glutamyltranspeptidase, HBsAg ตรวจหาอีด้วยขั้น แอนตี้กับตรวจหาอีด้วยขั้น แอนตี้ HBsAg และป้องกัน HBc
ดีเอ็นเอที่สกัดจากตัวอย่างซีรั่มที่ใช้สำหรับขยาย PCR ซ้อนภาคของยีนผิว (nt 459–710) ยี่สิบห้าสัปดาห์หลังจากการฉีด การศึกษาหยุดชะงัก และ baboons ถูก euthanized ที่ necropsy เนื้อเยื่อตับและเซรั่มที่ได้จากลิงบาบูนละสำหรับทดสอบเพิ่มเติม เพื่อยืนยันไวรัสที่สกัดจาก experimentally ขำน่า baboons ได้เหมือนกับที่พบในต้นฉบับ baboons
ผล
ด้วยชุกของขั้นในป่าจับ Baboons แอฟริกาใต้
ส่วนในลิงบาบูน (P. ด้วยขั้น ursinus orientalis) ประชากรในแอฟริกาใต้ที่ถูกกำหนด โดยแยกดีเอ็นเอจากซีรั่มของ baboons ติดป่า 69 และมือไวรัสจีโนม (precore/หลัก หลัก พอลิเมอเรส และพื้นที่ผิว) โดย PCR ซ้อน 4 ภูมิภาค ไม่ขยายดีเอ็นเอด้วยขั้นกับ PCR รอบเดียว บ่งชี้ว่า ดีเอ็นเอด้วยขั้นมีที่ระดับต่ำสุดในซีรั่มลิงทโมน.
โดยใช้เกณฑ์ของ > 3 ใน 4 ภูมิภาคการ PCR เป็นบวก เราพบว่า 11 (22.4%) 49 สำหรับผู้ใหญ่ และ 4 (20.0%) 20 baboons ป่าจับอารมณ์ได้ค่าบวกสำหรับด้วยขั้น ความชุกโดยรวมของ hepadnaviral ดีเอ็นเอใน baboons 21.7% (15/69) นอกจากนี้ สถานะและ specificity เอ็นด้วยขั้นถูกยืนยันเมื่อตรวจพบในซีรั่มของ 5 69 baboons โดยวิเคราะห์ภาคใต้คืนในตา เพียง 5 ตัวอย่างซีรั่ม PCR เป็นบวก 15 ถูกบวก โดย hybridization ภาคใต้เนื่องจาก มีความไวค่อนข้างต่ำกว่าวิธีนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การขุดเจาะ rna ,ย้อนกลับการถอดสคริปต์,และการขยายเสียง
rna ได้แยกออกจากกันจำนวนของลิงหน้าหมูตับเนื้อเยื่อโดยใช้ guanidinium - กรด - พีทีทีฟีนอล( 21 )และย่อยด้วย rnase - แบบไม่เสียค่าบริการ dnase I ( fermentas , Waltham , MA , USA )เพื่อลบใดๆอาจดีเอ็นเอ. การรวมกลุ่มเป็น rna ที่กำหนดโดย spectrophotometry ด้วยมอเตอร์ด้าน ND nanodrop - 1000 ที่มีหน่วยความจำที่ใช้ในcdna ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ primers จ่าหน้าซอง III transcriptase ย้อนกลับ( invitrogen ,ห้างสรรพสินค้า Carlsbad Outlet , CA สหรัฐอเมริกา)และ oligo ( DT ) 18 ( invitrogen )โดยเป็นไปตามคำแนะนำของผู้ผลิต การควบคุมที่ถอดสคริปต์แล้วลบไม่ใช่ - ย้อนกลับได้เตรียมความพร้อมในลักษณะเหมือนกันเว้นแต่ว่าน้ำ diethylopyrocarbonate - ได้รับการปฏิบัติ( invitrogen )ได้ถูกเพิ่มลงในการปฏิกริยาแต่ละ transcriptase แทนการให้ทำย้อนลำดับขั้นตอนข้างต้นความสำเร็จของย้อนกลับการถอดสคริปต์การตอบสนองยังได้รับการยืนยันโดยใช้การขยายเสียง pcr ในส่วนของยีน alcohol dehydrogenase glyceraldehyde - 3 - ฟอสเฟต( 22 ) subgenomic ซ้อน pcr amplifications ของ precore / Core ( NT 1732 - 2045 และ NT 1765 - 1968 )และพื้นผิว( NT 255 - 759 และ NT 459 - 710 )เขตพื้นที่และยังดำเนินการ.
การตรวจจับ covalently ปิดแบบกลมดีเอ็นเอ
สกัดดีเอ็นเอจากตับลิงหน้าหมูโดยใช้ qiaamp ดีเอ็นเอมินิชุด( qiagen ) สกัดดีเอ็นเอเป็นการปฏิบัติด้วย plasmid-safe ATP - ขึ้นอยู่กับ dnase (จุดศูนย์รวมทางแฟชั่น biotechnologies Madison , WI สหรัฐอเมริกา)กับ hydrolyze chromosomal ดีเอ็นเอดับเบิลคลิกที่สายตีเกลียวตามแนวยาวในขณะที่กำลังออกจากดีเอ็นเอแบบกลม hbv covalently ปิด( cccdna )ไม่เปลี่ยนแปลงเลือกcccdna ที่มีการตรวจพบโดยแบบเรียลไทม์ pcr ( 23 )พร้อมด้วยกำลังไฟสีเขียว sybr pcr Master ผสม(ใช้ biosystems )..
การส่งสัญญาณของ hbv เพื่อทดลองไร้เดียงสา baboons
ซึ่งจะช่วยการส่งสัญญาณของ hbv เพื่อทดลองไร้เดียงสา baboons ได้ดำเนินการที่สถาบัน สุขภาพ แห่งชาติ(ยัง Rockville , Bethesda , MD , USA ) พวกสัตว์ตั้งอยู่และได้รับการดูแลที่ bioqual , Inc .( Rockville Executive Meeting Center MD , USA )การดูแลและที่พักของสัตว์ต่างๆปฏิบัติตามข้อกำหนดและแนวทางปฏิบัติที่เกี่ยวข้องทั้งหมดและสัตว์ที่ได้ตั้งอยู่ในส่วนอำนวยความสะดวกต่างๆที่ได้รับการรับรองโดยการเชื่อมโยงสำหรับการประเมินผลการปฏิบัติงานและการรับรองจากสถาบัน British Dental Health ในห้องทดลองนานาชาติการดูแลสัตว์อย่างครบครันโปรโตคอลทั้งหมดเป็นการตรวจสอบและได้รับอนุมัติจากที่สถาบันสัตว์การดูแลและการใช้งานของคณะกรรมการของ National Institute of Allergy และโรคติดเชื้อสถาบันของชาติและ สุขภาพ bioqual , Inc .ทดลองจึงกลายเป็นเรื่องที่ทั้งในประเทศยก baboons ได้จากที่เพาะในประเทศ( mannheimer มูลนิธิ, Homestead , FL , USA ) ก่อนการรวมของสัตว์ต่างๆในการศึกษาเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ได้แบบไม่เสียค่าบริการในห้องพักทั้งหมดทำเครื่องหมายของ hbv จำลองแบบเมื่อทำการทดสอบ serologically pcr และซ้อนตามที่อธิบายไว้ข้างต้น.
สี่ทดลองไร้เดียงสา baboons inoculated แต่ละคนพร้อมด้วย 500 μl ของเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ได้รับจาก hbv ดีเอ็นเอ - บวกป่า - จับ baboons จากแอฟริกาใต้. ลิงหน้าหมูแต่ละแบบฉีดขึ้นรูปพร้อมด้วยเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์จากลิงหน้าหมูป่า - จับตัวเดียว หลังจากหัวฉีดเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ได้จาก 4 baboons ที่ได้รับรองแบบฉีดขึ้นรูปที่แต่ละห้องที่ในแต่ละช่วงในทุกสัปดาห์ เจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ก็นำมาใช้ในการวัดระดับของ alcohol dehydrogenase isocitrate aminotransferase alanine γ - glutamyltranspeptidase hbsag , Antigen for อี hbv เมื่อเส้นเลือดต่อ, Antigen for อี hbv เมื่อเส้นเลือดต่อ hbsag และการป้องกัน - Technical troubles , please contact .
สกัดดีเอ็นเอจากตัวอย่างเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ได้ถูกใช้เพื่อการขยายสัญญาณเสียง pcr ซ้อนของเขตพื้นที่ซึ่งยีนบนพื้นผิว( NT 459-710 ) ยี่สิบห้าสัปดาห์หลังจากฉีดการศึกษาที่เป็นอันสิ้นสุดและ baboons ได้ euthanized ที่ necropsyตับเนื้อเยื่อและน้ำเหลืองได้มาจากแต่ละลิงหน้าหมูเพื่อการทดสอบเพื่อยืนยันว่าไวรัสมาจากทดลองไร้เดียงสา baboons เป็นเหมือนกับที่พบในที่เดิม baboons .

มีมากกว่าผลของ hbv ในป่า - จับ baboons ในแอฟริกาใต้
ซึ่งจะช่วยให้มีมากกว่าของ hbv ในลิงหน้าหมู( p .ursinus orientalis )ประชากรในประเทศแอฟริกาใต้ได้ถูกกำหนดโดยการดึงข้อมูลดีเอ็นเอจากเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ของ 69 ป่า - จับ baboons และขยายเสียง ได้ใน 4 ภูมิภาค ของยีนที่เป็นไวรัส( precore / core , core , polymerase ,และพื้นที่เขตพื้นที่)โดยซ้อน pcr. hbv ดีเอ็นเอไม่มีแอมพลิฟายกับ pcr แบบ Single - รอบที่ระบุว่าดีเอ็นเอ hbv อยู่ในระดับต่ำในลิงหน้าหมูเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์.
การใช้เกณฑ์ของ> 3 ใน 4 pcr เขตพื้นที่ที่เป็นบวกเราพบว่า 11 ( 22.4% )จาก 49 และผู้ใหญ่ 4 ( 20.0 เมื่อเทียบกับ% s )ของ baboons 20 เยาวชนป่า - จับเป็นบวกสำหรับ hbv. ในขณะเดียวกันโดยรวมของดีเอ็นเอ hepadnaviral ใน baboons เป็น 21.7% ( 15/69 ) ยิ่งไปกว่านั้นMainstream )เพียงเท่านั้นและการมีอยู่ของ hbv ดีเอ็นเอได้รับการยืนยันเมื่อตรวจพบโดยตรงในซีรัมของ 5 ใน 69 baboons โดยใช้การวิเคราะห์ทำให้เสียไปทางตอนใต้ เพียง 5 แห่งที่ 15 ตัวอย่างเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ pcr - ในเชิงบวกก็บวกโดย hybridization ทางตอนใต้ของเพราะความไวแสงต่ำของวิธีการนี้