2.7. Cellular caspase activities (C

2.7. Cellular caspase activities (Caspase-3/7, -8 and -9)
HT-29 cells (25,000 cells/well), in RPMI-1640 and 10% FBS, were seeded in the white 96-well plate (SPL, Korea) and incubated overnight at 37 _C with 5% CO2 and 37 _C. The medium was then replaced with fresh medium and the cells treated with the IC50 concentration of WTE for different time periods, i.e., 2, 8, 16, 24 and 48 h. Cells without any treatment and media alone without cells in triplicate for the different times incubated were used as the control and blank. Caspases-3/7, -8 and -9 activities were carried out by using commercial kits purchased from Promega Company (USA) according to the manufacturer’s protocol. In brief, after the treatment time, the reagents of Caspase-Glo™ -3/7, -8 and -9 reagents were prepared and added directly to the cells in 96-well plates and incubated for 30 min before recording luminescence. To reduce nonspecific background activity in cell-based assays, MG-132 inhibitor was added to Caspase-Glo_ -8 and -9 reagent. The plates were read in a luminometer (GloMax microplate luminescence reader, Promega Company, USA). The raw data were collected from the luminometer and the average calculated from the replicates. Background readings were determined from wells containing culture medium without cells. The ‘‘no cell media’’ blank control value was subtracted from each value.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 กิจกรรม caspase โทรศัพท์มือถือ (Caspase-3/7, -8 และ-9)เซลล์เอชที-29 (25000 เซลล์/ดี), ใน RPMI 1640 และ 10% FBS, seeded ในจานดี 96 ขาว (SPL เกาหลี) และ incubated ค้างคืนที่ _C 37 กับ 5% CO2 และ 37 _C สื่อถูกแล้วแทนที่ ด้วยสื่อสดและเซลล์ที่ถือว่า มีความเข้มข้น IC50 ของ WTE สำหรับรอบระยะเวลาต่าง ๆ เช่น h. 2, 8, 16, 24 และ 48 เซลล์ที่ไม่ มีการรักษาใด ๆ และสื่อเพียงอย่างเดียวไม่ มีเซลล์ใน triplicate สำหรับช่วงเวลาต่าง ๆ ที่ incubated ถูกใช้เป็นตัวควบคุม และว่างเปล่า Caspases-3/7, -8 และ-9 ได้ดำเนินการโดยชุดพาณิชย์ซื้อจาก Promega บริษัท (สหรัฐอเมริกา) ตามโพรโทคอลของบริษัทผู้ผลิต สังเขป หลังจากการรักษา เวลา reagents ของ™ Caspase Glo-3/reagents 7, -8 และ-9 ได้เตรียมเพิ่มโดยตรงกับเซลล์ในแผ่นดี 96 และ incubated สำหรับ 30 นาทีก่อน luminescence บันทึก ลดกิจกรรมพื้นหลังเจาะจงในเซลล์ตาม assays, MG 132 ผลถูกเพิ่มกับรีเอเจนต์ Caspase-Glo_-8 และ-9 แผ่นไม่อ่านใน luminometer (GloMax microplate luminescence อ่าน บริษัท Promega สหรัฐอเมริกา) มีการรวบรวมข้อมูลดิบจาก luminometer การ และคำนวณค่าเฉลี่ยจากการคัดลอกตัวเอง อ่านเบื้องหลังถูกกำหนดจากบ่อประกอบด้วยสื่อวัฒนธรรม โดยเซลล์ ค่าควบคุมเปล่า ''ไม่เซลล์สื่อ '' ถูกหักออกจากค่าแต่ละค่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 กิจกรรมเซ่เซลลูลาร์ (แคสเป-3/7 -8 และ -9)
HT-29 เซลล์ (25,000 เซลล์ / ดี) ใน RPMI-1640 และ 10% FBS ถูกเมล็ดในสีขาวแผ่น 96 หลุม (SPL เกาหลี) และบ่มค้างคืนที่ 37 _C กับ CO2 5% และ 37 _C กลางถูกแทนที่แล้วกับสื่อสดและเซลล์ได้รับการรักษาที่มีความเข้มข้นของ IC50 WTE สำหรับช่วงเวลาที่แตกต่างกันคือ 2, 8, 16, 24 และ 48 ชั่วโมง เซลล์โดยไม่ต้องรักษาใด ๆ และสื่อเพียงอย่างเดียวโดยไม่ต้องเซลล์ในเพิ่มขึ้นสามเท่าสำหรับเวลาที่ต่างกันบ่มถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมและว่างเปล่า caspases-3/7 -8 และกิจกรรม -9 ได้ดำเนินการโดยใช้ชุดการค้าที่ซื้อมาจาก บริษัท Promega (USA) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ในช่วงสั้น ๆ หลังจากเวลารักษาน้ำยาของแคสเป-Glo ™ -3/7 -8 และ -9 น้ำยาถูกเตรียมความพร้อมและเพิ่มโดยตรงกับเซลล์ในแผ่น 96 ดีและบ่มเป็นเวลา 30 นาทีก่อนที่จะบันทึกการเรืองแสง เพื่อลดกิจกรรมพื้นหลังเชิญชมในการตรวจเซลล์ที่ใช้ยับยั้ง MG-132 ถูกบันทึกอยู่ในแคสเป-Glo_ -8 และ -9 น้ำยา แผ่นถูกอ่านใน luminometer (GloMax microplate อ่านเรืองแสง, Promega บริษัท , ประเทศสหรัฐอเมริกา) ข้อมูลดิบที่ถูกเก็บรวบรวมจาก luminometer และค่าเฉลี่ยที่คำนวณจากซ้ำ อ่านประวัติความเป็นมาได้รับการพิจารณาจากบ่อที่มีอาหารเลี้ยงเซลล์โดยไม่ต้อง '' ไม่มีสื่อมือถือ '' มูลค่าการควบคุมว่างเปล่าถูกหักออกจากแต่ละค่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . กิจกรรมเซลลูลาร์แคสเปส ( การศึกษาลักษณะ / 7 - 8 - 9 )
ht-29 เซลล์ ( 25 , 000 เซลล์ / ดี ) ใน rpmi-1640 และ 10% FBS ถูก seeded ในจานสีขาว 96 ( SPL , เกาหลี ) และบ่มค้างคืนที่ 37 _c กับคาร์บอนไดออกไซด์ 5% และ 37 _c สื่อที่ถูกแทนที่ด้วย สื่อสดและเซลล์ที่มีต่อความเข้มข้นของ wte ic50 คนละช่วงเวลาคือ 2 , 8 , 16 , 24 และ 48 ชั่วโมงเซลล์ไม่มีการรักษาใด ๆและสื่อเพียงอย่างเดียว โดยเซลล์ทั้งสามใบ สำหรับเวลาที่ต่างกัน ) ซึ่งใช้ควบคุมและว่างเปล่า caspases-3 / 7 - 8 - 9 และกิจกรรมที่ดำเนินการโดยการใช้ในเชิงพาณิชย์ชุดซื้อจาก บริษัท promega ( USA ) ตามขั้นตอนของผู้ผลิต ในช่วงสั้นๆ หลังจากเวลารักษา สารเคมีของตนเอง ™แคสเปส - 3 / 7- 8 - 9 และ 10 ถูกเตรียมและเพิ่มไปยังเซลล์ใน 96 ดีแผ่นและบ่ม 30 นาทีก่อนการบันทึก กิจกรรมในพื้นหลังเพื่อลดการติดเชื้อปัจจุบันใช้ mg-132 ยับยั้ง , เติม caspase-glo_ - 8 - 9 3 . จานถูกอ่านในลูมิโนมิเตอร์ ( glomax เรืองแสงอ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย บริษัท promega USA )ข้อมูลดิบถูกรวบรวมจากลูมิโนมิเตอร์และค่าเฉลี่ยที่คำนวณจาก ได้แก่ การอ่านพื้นหลังถูกกำหนดจากบ่อน้ำที่มีอาหารเลี้ยงเชื้อปราศจากเซลล์ ' ' สื่อ ' ' ควบคุมเซลล์ว่างถูกหักออกจากค่าแต่ละค่า