1. Dissolve 3.5 g sucrose into 8.8

1. Dissolve 3.5 g sucrose into 8.8 ml of DMSO
(cell culture grade). Add 62 ml of complete
modified TYI-S-33 medium and an additional 20 ml of heat-inactivated bovine
serum. Mix well on a magnetic stirrer,
then fi lter sterilize with 0.22M filter (i.e.
Millipore Millex syringe driven filter unit)
(DO NOT autoclave). Use immediately or
store at –20°C until use (see #2).
2. Aliquot 5 ml of FM into 15 ml culture tubes
and store at –20°C until use. Vortex aliquots
following defrosting to resuspend the FM.
If you notice that the FM has a white, flaky
precipitate that does not easily go back into
solution discard it (and remaining aliquots
from same sample preparation) and prepare
fresh FM

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. 3.5 กรัมซูโครสละลายเป็น 8.8 มลของ DMSO(เซลล์เกรดวัฒนธรรม) เพิ่มมล 62 ของสมบูรณ์แก้ไข TYI S 33 ปานกลางและมีปริมาณ 20 ml เติมของยกเลิกร้อนวัวซีรั่ม ผสมดีบนช้อนคนเป็นแม่เหล็กแล้ว ความเร็วสูงและวัสดุเป็นหมัน ด้วยกรอง 0.22 M (เช่นMillex มากเข็มขับเคลื่อนหน่วยกรอง)(ทำไม่ด้วย) ใช้ได้ทันที หรือเก็บ –20 ° C จนถึงใช้ (ดู #2)2. ส่วนลงตัว 5 ml ของ FM เป็นหลอดวัฒนธรรม 15 mlและร้านค้าที่ –20 ° C จนกว่าจะใช้ Vortex aliquotsการละลายน้ำแข็งต่อไปนี้เพื่อ resuspend เอฟเอ็มถ้าคุณสังเกตเห็นว่า FM ที่มีขาว ไม่สม่ำเสมอprecipitate ที่ไม่ได้กลับไปโซลูชั่นละทิ้งมัน (และคงเหลือ aliquotsจากการเตรียมตัวอย่างเดียวกัน) และเตรียมความพร้อมFM สด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1. ละลาย 3.5 กรัมน้ำตาลซูโครสลงใน 8.8 มิลลิลิตร DMSO
(การเพาะเลี้ยงเซลล์ชั้นประถมศึกษาปี) เพิ่ม 62
มลสมบูรณ์ปรับเปลี่ยนTYI-S-33 ขนาดกลางและเพิ่มอีก 20 มล.
ของวัวความร้อนใช้งานในซีรั่ม ผสมกันในเครื่องกวนแม่เหล็กแล้ว fi กรองฆ่าเชื้อด้วย 0.22? M ตัวกรอง (เช่นเข็มฉีดยาคMillex ขับเคลื่อนหน่วยกรอง) (ไม่ Autoclave) ใช้งานได้ทันทีหรือเก็บที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน (ดู # 2). 2 aliquot 5 มิลลิลิตรเอฟเอ็มเป็น 15 มล. หลอดวัฒนธรรมและการจัดเก็บที่อุณหภูมิ-20 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน aliquots Vortex ต่อไปนี้จะละลายน้ำแข็ง resuspend ความถี่. ถ้าคุณสังเกตเห็นว่าเอฟเอ็มมีสีขาวเป็นขุยตะกอนที่ไม่ได้อย่างง่ายดายกลับไปสู่การแก้ปัญหาการทิ้งมัน(และ aliquots ที่เหลือจากการเตรียมตัวอย่างเดียว) และเตรียมความพร้อมเอฟเอ็มสด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . ละลายน้ำตาลทราย 3.5 กรัมเป็น 8.8 มลของ DMSO
( ระดับเซลล์ ) เพิ่ม 62 มล. สมบูรณ์ปานกลาง tyi-s-33
แก้ไขและเพิ่มเติม 20 ml ของความร้อนซึ่งใช้ซีรั่มวัว

ผสมให้เข้ากันบน stirrer แม่เหล็ก
แล้ว Fi lter ฆ่าเชื้อกับ 0.22  M ตัวกรอง ( เช่น
มิลลิ millex เข็มขับเคลื่อนหน่วยกรอง )
( ไม่นึ่ง ) ใช้งานได้ทันที หรือเก็บที่อุณหภูมิ 20 ° C (
( ดูจนใช้# 2 )
2ส่วนลงตัว 5 ml ของ FM ในวัฒนธรรมหลอด 15 ml
และเก็บที่ 20 –° C จนใช้ น้ำวนเฉยๆ
ต่อไปนี้การละลายน้ำแข็งเพื่อ resuspend FM .
ถ้าคุณสังเกตเห็นว่า FM มีสีขาว เป็นขุย
ตะกอนที่ไม่สามารถกลับไปแก้ไขมัน ( และเหลือทิ้ง

จากการเตรียมสารตัวอย่างเดียวกันเฉยๆ ) และเตรียม
fm สด