The autolysin activity of B. thurin

The autolysin activity of B. thuringiensis strain was evaluated by the method of Raddadi et al. (2004) with a few modifications. Briefly, the cells grown in LB broth were harvested atOD600 1.2. The cells were washed inMES (2-Nmorpholino-ethansulfonic acid 50 mM, pH 6), resuspended in the same buffer, in potassium phosphate buffer (50 mM, pH 6.5) or Tris–HCl (50 mM, pH 8.5) buffers and incubated at 30C without agitation. The autolytic rate was expressed as the percentage decrease of the OD600 after 72 h. To evaluate hydrolase action of autolysins, commercially available substrate p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide (Sigma) and respective enzyme standard (b-N-acetylglucosaminidase of Canavalia ensiformis; Sigma) was used and assayed as described previously (Tsujii et al. 1996). In brief, 100 ll supernatant of SE strain was added in 50 mM phosphate buffer at pH 6.7 and incubated at 37C for 30 min. The enzymatic reaction was initiated by adding 0.5 mM p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide and incubated for 1 h at 37C. The reaction was stopped by adding three volumes of 1 M Na2CO3. Enzymatic activity was quantified by measuring the absorption at 405 nm and compared with standard curve of p-nitrophenol. One unit of hydrolase activity is defined as amount of enzyme converting 1.0 lmole of p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide to p-nitrophenol per min under the assay conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รับการประเมินกิจกรรม autolysin ของ B. thuringiensis สายพันธุ์ โดยวิธีของ Raddadi et al. (2004) กับกี่ modifications Briefly เซลล์ที่เติบโตในน้ำซุปปอนด์ถูกเก็บเกี่ยว atOD600 1.2 เซลล์ถูกล้าง inMES (2-Nmorpholino-ethansulfonic กรด 50 มม. pH 6), resuspended ในบัฟเฟอร์ที่เดียวกัน ในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (50 มม. pH 6.5) หรือทริสเรทติ้ง – HCl (50 มม. pH 8.5) บัฟเฟอร์ และรับการกกที่ 30 C โดยไม่ก่อกวน ราคา autolytic ถูกแสดงเป็นการลดเปอร์เซ็นต์ของการ OD600 หลัง 72 ชม การประเมินการกระทำ hydrolase ของ autolysins จำหน่ายพื้น p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide (Sigma) และเอนไซม์แต่ละมาตรฐาน (b-N-acetylglucosaminidase ของ Canavalia ensiformis ใช้ sigma) และ assayed ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tsujii et al. 1996) สังเขป 100 ll supernatant ของสายพันธุ์ SE ใน 50 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.7 และรับการกกที่ 37 C 30 นาที ปฏิกิริยาเอนไซม์เริ่มต้น โดยการเพิ่ม p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide 0.5 mM และรับการกก 1 ชั่วโมงที่ 37 c ปฏิกิริยาถูกหยุด โดยการเพิ่มปริมาณสาม 1 M Na2CO3 เอนไซม์ถูก quantified โดยการวัดการดูดซึมที่ 405 nm และเมื่อเทียบกับกราฟมาตรฐานของ p-nitrophenol กำหนดเป็นจำนวนแปลง 1.0 lmole ของ p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide p-nitrophenol ต่อนาทีภายใต้สภาวะการทดสอบเอนไซม์ hydrolase กิจกรรมหนึ่งหน่วยได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรม autolysin ความเครียด thuringiensis บีได้รับการประเมินโดยวิธีการ Raddadi et al, (2004) ที่มีไม่กี่ไพเพอร์ Modi Fi บรีฟลอริด้า Y เซลล์ที่ปลูกในน้ำซุป LB เก็บเกี่ยว atOD600 1.2 inMES เซลล์ถูกล้าง (กรด 2 Nmorpholino-ethansulfonic ขนาด 50 มมค่า pH 6), resuspended ในบัฟเฟอร์เดียวกันในบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (ขนาด 50 มมค่า pH 6.5) หรือ Tris-HCl (ขนาด 50 มมค่า pH 8.5) บัฟเฟอร์และบ่ม วันที่ 30 องศาเซลเซียสโดยไม่ต้องปั่นป่วน อัตราการสลายตัวของถูกแสดงเป็นลดลงร้อยละของ OD600 หลังจาก 72 ชั่วโมง ในการประเมินผลการดำเนินการของ hydrolase autolysins ในเชิงพาณิชย์ตั้งต้นใช้ได้ P-Nitrophenyl-N-acetyl-BD-glucosaminide (ซิกม่า) และมาตรฐานการทำงานของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้อง (BN-acetylglucosaminidase ของ ensiformis Canavalia; ซิกม่า) ถูกนำมาใช้และ assayed ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Tsujii et al, 1996) ในช่วงสั้น ๆ 100 LL ใสความเครียด SE ถูกเพิ่มเข้ามาในขนาด 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 6.7 และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาของเอนไซม์ได้ริเริ่มขึ้นโดยการเพิ่ม 0.5 มิลลิ P-Nitrophenyl-N-acetyl-BD-glucosaminide และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่มสามเล่ม 1 เมตร Na2CO3 เอนไซม์ถูก Fi quanti ed โดยการวัดการดูดซึมที่ 405 นาโนเมตรและเมื่อเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐานของ P-nitrophenol หนึ่งหน่วยของกิจกรรม hydrolase คือนิยามเป็นปริมาณของเอนไซม์แปลง 1.0 lmole ของ P-Nitrophenyl-N-acetyl-BD-glucosaminide เพื่อ P-nitrophenol ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การจำแลงกิจกรรมของ B . thuringiensis สายพันธุ์ที่ประเมินโดยวิธี raddadi et al . ( 2004 ) มีไม่กี่ Modi จึงทำให้ . บรี fl Y , เซลล์ที่ปลูกในน้ำซุปปอนด์เก็บ atod600 1.2 เซลล์ต้นแบบ ( 2-nmorpholino-ethansulfonic ) ล้างกรด 50 มม. , pH 6 ) , resuspended ในบัฟเฟอร์เดียวกันในโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 50 มม. , pH 6.5 ) หรือบริษัท– HCl ( 50 มม. และบัฟเฟอร์ pH 8.5 ) บ่มที่อุณหภูมิ 30C ไม่มีการกวน อัตรา autolytic ถูกแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์การลดลงของ od600 หลังจาก 72 ชั่วโมง เพื่อประเมินการกระทำของไฮโดรเลส autolysins ในเชิงพาณิชย์ของพื้นผิว p-nitrophenyl-n-acetyl-b-d-glucosaminide ( Sigma ) และมาตรฐานที่เกี่ยวข้อง ( b-n-acetylglucosaminidase เอนไซม์ของถั่วพร้า ensiformis ; Sigma ) และใช้ปริมาณตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( tsujii et al . 1996 ) ในช่วงสั้น ๆ , 100 จะนำของเซความเครียดเพิ่มในฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.7 และ 50 มิลลิเมตร บ่มที่ 37c เป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่ถูกริเริ่มโดยการเพิ่ม p-nitrophenyl-n-acetyl-b-d-glucosaminide 0.5 มม. และบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ใน 37c ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่มสามเล่ม 1 M Na2CO3 . เอนไซม์คือการไฟฟ้าจึงเอ็ดโดยวัดการดูดกลืนที่ 405 nm และเทียบกับกราฟมาตรฐานของ p-nitrophenol . หน่วยหนึ่งของกิจกรรมไฮโดรเลสคือ เดอ จึงเป็นปริมาณของเอนไซม์แปลงสำหรับเน็ด lmole ของ p-nitrophenyl-n-acetyl-b-d-glucosaminide เพื่อ p-nitrophenol ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ