Environmental monitoring is importa

Environmental monitoring is important to enable effective resource management and public health protection as well as rapid and accurate identification of Vibrio cholerae in drinking-water sources. Traditional methods employed in identification are laborious, time-consuming and practically not viable for screening of a large number of samples. In this study, a direct cell duplex PCR assay for the detection of viable toxigenic V. cholerae in environmental water samples was developed. In the PCR assay, two gene sequences were amplified together, one of outer membrane protein (ompW), which is species-specific and another of cholera toxin (ctxAB). The detection limit of duplex PCR was 5 × 104 V.cholerae/reaction. Different environmental water samples were artificially spiked with V. cholerae O1 cells and filtered through a 0.22 μm membrane, and the filters enriched in alkaline peptone water for 6 h and then used directly in the duplex PCR assay. The PCR procedure coupled with enrichment could detect as few as 1.2 c.f.u./ml in ground water, 1.2 × 102 c.f.u. ml−1 in sewer water and 1.2 × 103c.f.u. ml−1 in tap water. The assay was successfully applied directly for screening of environmental potable water samples collected from a cholera-affected area. The proposed method is simple and can be used for environmental monitoring of toxigenic as well as non-toxigenic V. cholerae.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจสอบสิ่งแวดล้อมเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้สามารถใช้ทรัพยากรที่มีประสิทธิภาพป้องกันจัดการและสาธารณสุขรวมทั้งรหัสอย่างรวดเร็ว และแม่นยำของผล cholerae ในแหล่งน้ำดื่ม วิธีการดั้งเดิมในรหัสลำบาก ใช้เวลามาก และทำงานได้ไม่จริงสำหรับคัดของจำนวนตัวอย่างขนาดใหญ่ ในการศึกษานี้ มีพัฒนาเป็นเซลล์โดยตรงสอง PCR assay ตรวจได้ toxigenic V. cholerae ในตัวอย่างน้ำสิ่งแวดล้อม ใน PCR assay ลำดับยีนสองมีโปรตีนเมมเบรนภายนอก (ompW), ซึ่งเป็น species-specific เอาต์กัน หนึ่ง และอหิวาตกโรคพิษ (ctxAB) อีกด้วย จำนวนหน้า PCR ตรวจได้ 5 × 104 V.cholerae/reaction ตัวอย่างน้ำสิ่งแวดล้อมต่าง ๆ ได้เหือด spiked กับ V. cholerae O1 เซลล์ และกรองผ่านเยื่อ 0.22 μm และตัวกรองอุดมไปในน้ำอัลคาไลน์ peptone 6 h และใช้โดยตรงในการดูเพล็กซ์ PCR assay กระบวนการ PCR ควบคู่ไปกับการเติมเต็มให้สามารถตรวจพบน้อยเป็น c.f.u./ml ในน้ำใต้ดิน 1.2, 1.2 × 102 c.f.u. ml−1 ในท่อระบายน้ำน้ำและ 1.2 × 103c.f.u ml−1 ในน้ำประปา วิเคราะห์ถูกนำไปใช้โดยตรงในการคัดกรองตัวอย่างน้ำใช้สิ่งแวดล้อมที่รวบรวมจากพื้นที่ที่ได้รับผลกระทบอหิวาตกโรค วิธีการนำเสนอง่าย และสามารถใช้สำหรับการตรวจสอบสิ่งแวดล้อม ของ toxigenic ไม่ใช่-toxigenic V. cholerae

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตรวจสอบด้านสิ่งแวดล้อมเป็นสิ่งสำคัญที่จะช่วยให้การบริหารจัดการทรัพยากรที่มีประสิทธิภาพและการป้องกันสุขภาพของประชาชนเช่นเดียวกับการระบุอย่างรวดเร็วและถูกต้องของเชื้อ Vibrio cholerae ในแหล่งน้ำดื่ม วิธีการแบบดั้งเดิมที่ใช้ในการระบุตัวตนมีความลำบากใช้เวลานานและทำงานได้จริงไม่ได้สำหรับการคัดกรองของจำนวนมากของกลุ่มตัวอย่าง ในการศึกษานี้เซลล์เพล็กซ์โดยตรงทดสอบ PCR ในการตรวจหาที่ทำงานได้ Toxigenic V. cholerae ในตัวอย่างน้ำสิ่งแวดล้อมได้รับการพัฒนา ในการทดสอบ PCR สองลำดับยีนถูกขยายด้วยกันหนึ่งของโปรตีนเยื่อหุ้มชั้นนอก (ompW) ซึ่งเป็นสายพันธุ์ที่เฉพาะเจาะจงและอีกคนหนึ่งของสารพิษอหิวาตกโรค (ctxAB) ขีด จำกัด ของการตรวจสอบของ PCR เพล็กซ์ 5 × 104 V.cholerae / ปฏิกิริยา ตัวอย่างน้ำสิ่งแวดล้อมที่แตกต่างกันถูกแทงเทียมกับ V. cholerae O1 เซลล์และกรองผ่านเยื่อ 0.22 ไมโครเมตรและตัวกรองอุดมไปในน้ำอัลคาไลน์เปปโตนเวลา 6 ชั่วโมงและนำไปใช้โดยตรงในการทดสอบ PCR เพล็กซ์ ขั้นตอนวิธี PCR ควบคู่ไปกับการตกแต่งสามารถตรวจสอบเป็นเพียง 1.2 โคโลนี / มิลลิลิตรในน้ำพื้นดิน 1.2 × 102 CFU ml-1 ในน้ำและท่อระบายน้ำ 1.2 × 103c.fu ml-1 ในน้ำประปา ถูกนำมาใช้ทดสอบประสบความสำเร็จโดยตรงสำหรับการคัดกรองของสิ่งแวดล้อมตัวอย่างน้ำดื่มที่เก็บรวบรวมจากอหิวาตกโรคในพื้นที่ได้รับผลกระทบ วิธีการที่นำเสนอเป็นเรื่องง่ายและสามารถนำมาใช้สำหรับการตรวจสอบด้านสิ่งแวดล้อมของ Toxigenic เช่นเดียวกับที่ไม่ Toxigenic V. cholerae

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบด้านสิ่งแวดล้อมเป็นสำคัญ เพื่อให้การจัดการทรัพยากรอย่างมีประสิทธิภาพ และป้องกันสุขภาพของประชาชนรวมทั้งอย่างรวดเร็วและถูกต้องการจำแนก Vibrio cholerae ในแหล่งน้ำดื่ม วิธีการแบบดั้งเดิมที่ใช้ในการระบุจะลําบาก ใช้เวลานาน และแทบจะไม่วางอนาคตสำหรับการคัดกรองของจำนวนมากของกลุ่มตัวอย่าง ในการศึกษานี้เซลล์โดยตรง ( Duplex PCR เพื่อตรวจหาได้ toxigenic V . cholerae ในตัวอย่างน้ำ สิ่งแวดล้อม การพัฒนา ในการตรวจวิเคราะห์ยีน ลำดับสองคือขยายด้วยกัน หนึ่งของโปรตีนเมมเบรนชั้นนอก ( ompw ) ซึ่งเป็นอีกเผ่าพันธุ์ - เฉพาะของพิษอหิวาตกโรค ( ctxab ) การตรวจหาดีเอ็นเอของเพล็กซ์จำกัด 5 × 104 v.cholerae/reaction .ตัวอย่างน้ำจากสิ่งแวดล้อมต่าง ๆ ต่อด้วย V . cholerae 01 เซลล์ และกรองผ่านเมมเบรน 0.22 μ M , และตัวกรองที่อุดมด้วยอัลคาไลน์ในเปปโตนน้ำ 6 ชั่วโมงแล้วใช้โดยตรงในเพล็กซ์พีซีอาร์ ตามลำดับ ร่วมกระบวนการควบคู่กับการไม่สามารถตรวจพบเพียง 1.2 c.f.u. / มล. ในน้ำดิน c.f.u. 1.2 × 102 + − 1 ในน้ำ ท่อระบายน้ำ และ 1.2 × f.u. 103c .มล − 1 ในน้ำประปา วิเคราะห์ได้โดยตรงใช้สำหรับการฉายสิ่งแวดล้อมการเก็บตัวอย่างน้ำดื่มจากอหิวาตกโรคในพื้นที่ได้รับผลกระทบ . เสนอวิธีการง่าย ๆและสามารถใช้สำหรับการตรวจสอบด้านสิ่งแวดล้อมของ toxigenic รวมทั้งไม่ toxigenic V . cholerae .