The Escherichia coli expression sys

The Escherichia coli expression system is a powerful tool for the production of recombinant eukaryotic proteins. We use it to produce Shadoo, a protein belonging to the prion family. A chromatographic method for the purification of (His)6-tagged recombinant Shadoo expressed as inclusion bodies is described. The inclusion bodies are solubilized in 8 M urea and bound to a Ni(2+)-charged column to perform ion affinity chromatography. Bound proteins are eluted by a gradient of imidazole. Fractions containing Shadoo protein are subjected to size exclusion chromatography to obtain a highly purified protein. In the final step purified Shadoo is desalted to remove salts, urea and imidazole. Recombinant Shadoo protein is an important reagent for biophysical and biochemical studies of protein conformation disorders occurring in prion diseases. Many reports demonstrated that prion neurodegenerative diseases originate from the deposition of stable, ordered amyloid fibrils. Sample protocols describing how to fibrillate Shadoo into amyloid fibrils at acidic and neutral/basic pHs are presented. The methods on how to produce and fibrillate Shadoo can facilitate research in laboratories working on prion diseases, since it allows for production of large amounts of protein in a rapid and low cost manne

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Escherichia coli นิพจน์ระบบเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการผลิต recombinant โปรตีน eukaryotic เราใช้มันเพื่อผลิต Shadoo โปรตีนที่เป็นสมาชิกของครอบครัวพรีออน อธิบายวิธีการทำให้บริสุทธิ์ของ (เขา) แท็ก 6 recombinant Shadoo แสดงเป็นศพรวม chromatographic ศพรวม solubilized ใน urea 8 เมตร และผูกไว้กับคอลัมน์ที่คิด Ni(2+) ทำไอออนความสัมพันธ์ chromatography โปรตีนที่ถูกผูกไว้ที่ eluted โดยการไล่ระดับสีของอิมิดาโซล เศษส่วนที่ประกอบด้วยโปรตีน Shadoo อยู่ภายใต้การ chromatography แยกขนาดเพื่อให้ได้โปรตีนบริสุทธิ์สูง ขั้นตอนสุดท้าย desalted Shadoo บริสุทธิ์เอาเกลือ urea และอิมิดาโซล Shadoo recombinant โปรตีนเป็นรีเอเจนต์สำคัญศึกษา biophysical และชีวเคมีของโรค conformation โปรตีนที่เกิดขึ้นในโรคพรีออน หลายรายงานแสดงว่า โรค neurodegenerative พรีออนมาจากการสะสมของมั่นคง สั่ง fibrils แอมีลอยด์ โปรโตคอลอย่างที่อธิบายวิธีการ fibrillate Shadoo เป็นแอมีลอยด์ fibrils ที่กรด และกลาง/ล่างจะแสดง pHs วิธีการผลิต และ fibrillate Shadoo สามารถช่วยในการวิจัยในห้องปฏิบัติการทำพรีออนโรค เนื่องจากจะช่วยให้การผลิตโปรตีนใน manne อย่างรวดเร็ว และต้นทุนต่ำจำนวนมาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Escherichia coli ระบบการแสดงออกเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการผลิตโปรตีน eukaryotic ไข้ทรพิษ เราใช้มันในการผลิต Shadoo ซึ่งเป็นโปรตีนที่เป็นของครอบครัวพรีออน วิธีโครมาสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ (ของเขา) recombinant 6 ที่ติดแท็ก Shadoo แสดงเป็นร่างรวมมีการอธิบาย ศพรวมจะละลายใน 8 M ยูเรียและผูกพันกับ Ni (2 +) - คอลัมน์ค่าใช้จ่ายในการดำเนินความสัมพันธ์โคไอออน โปรตีนที่ถูกผูกไว้จะชะโดยการไล่ระดับสีของ imidazole เศษส่วนที่มีโปรตีน Shadoo ที่อาจจะยกเว้นโคขนาดที่จะได้รับโปรตีนบริสุทธิ์สูง ในขั้นตอนสุดท้ายคือการทำให้บริสุทธิ์ Shadoo desalted การลบเกลือ, ยูเรียและ imidazole โปรตีน Shadoo เป็นสารสำคัญสำหรับการศึกษาชีวฟิสิกส์และชีวเคมีของความผิดปกติของโครงสร้างโปรตีนที่เกิดขึ้นในโรคพรีออน รายงานจำนวนมากแสดงให้เห็นว่าโรคที่เกี่ยวกับระบบประสาทพรีออนมาจากการสะสมของเสถียรภาพสั่ง amyloid ซ่าน โปรโตคอลตัวอย่างอธิบายวิธีการ fibrillate Shadoo เข้าซ่าน amyloid ที่เป็นกรดและเป็นกลาง / พีเอชพื้นฐานที่นำเสนอ วิธีการเกี่ยวกับการผลิตและ fibrillate Shadoo สามารถอำนวยความสะดวกการวิจัยในห้องปฏิบัติการที่ทำงานเกี่ยวกับโรคพรีออนเนื่องจากจะช่วยให้การผลิตในปริมาณมากของโปรตีนในค่าใช้จ่ายอย่างรวดเร็วและต่ำ Manne

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ Escherichia coli การแสดงออกระบบเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีน eukaryotic . เราใช้มันเพื่อผลิต shadoo เป็นโปรตีนที่อยู่ในครอบครัวผิดปกติ วิธีโครมาโตกราฟีเพื่อความบริสุทธิ์ของ ( ของเขา ) 6-tagged recombinant shadoo แสดงเป็น inclusion bodies ที่จะอธิบายรวมร่างเป็นสารละลายใน 8 M ยูเรียและผูกพันกับผม ( 2 ) - ค่าคอลัมน์ chromatography ไอออนแสดงความสัมพันธ์ . ผูกพันโปรตีนตัวอย่างโดยการไล่ระดับของอิมิดาโซล . เศษส่วนที่มีโปรตีน shadoo อาจมีขนาดยกเว้นโครมขอรับบริสุทธิ์สูงและโปรตีน ในขั้นตอนสุดท้ายของ shadoo บริสุทธิ์เป็น desalted เอาเกลือและยูเรียอิมิดาโซล .shadoo recombinant โปรตีนเป็นสารเคมีที่สำคัญทางชีวฟิสิกส์และชีวเคมีของโปรตีนโครงสร้างความผิดปกติเกิดขึ้นในโรคตัวนี้ รายงานหลายคนแสดงให้เห็นว่า prion Neurodegenerative โรคมาจากคำให้การของ มั่นคง สั่งแอลกอฮอล์ไฟบริล .ตัวอย่างโปรโตคอลอธิบายวิธีการสั่นระริก shadoo เป็น fibrils ไมโตคอนเดรียที่เปรี้ยวและเป็นกลาง / 5 พื้นฐานได้แก่ วิธีการเกี่ยวกับวิธีการผลิต และสั่นระริก shadoo สามารถอำนวยความสะดวกการวิจัยทางห้องปฏิบัติการทำโรคตัวนี้ เนื่องจากมันช่วยให้สำหรับการผลิตขนาดใหญ่ปริมาณของโปรตีนในที่รวดเร็วและค่าใช้จ่ายต่ำ มานน์