MechanismThe method combines the re

Mechanism
The method combines the reactions of copper ions with the peptide bonds under alkaline conditions with the oxidation of aromatic protein residues. The Lowry method is best used with protein concentrations of 0.01-1.0 mg/ml and is based on the reaction of Cu+, produced by the oxidation of peptide bonds, with Folin-Ciocalteu reagent (a mixture of phosphotungstic acid and phosphomolybdic acid in the Folin-Ciocalteu reaction). The reaction mechanism is not well understood, but involves reduction of the Folin-Ciocalteu reagent and oxidation of aromatic residues (mainly tryptophan, also tyrosine).
1.1Preparation of Lowry reagent by mixing reagent A:B:C in the following ratio: 100 ml:1ml:1ml
A: 2% Na2CO3 ใน 0.1 N NaOH
B: 2% NaK Tartrate
C: 1% CuSO4 5(H2O)
1.2 Proceed experiments according to the following steps
Solution (ml)
Standard solution Sample
Blank 1 2 3 4 5
BSA 200 mg/l - 1ml 2
ml 3
ml 4
ml 5
ml
Sample - - - - - - 
Distilled H2O 5 4 ml 3
ml 2
ml 1
ml -
Concentration (g/ml) 0 40 60 80 100 120
1.3 Pipette 0.5 ml of the solution from tube no. blank, 1-5 to new tubes
1.4 Add 0.7 ml of Lowry reagent to test tubes prepared in 1.3, incubate at room temp. for 10 min
1.5 Prepare working solution of Folin reagent by diluting it with distilled H2O in a ratio of 1:1
1.6 Add 0.1 ml of Folin reagent (working solution)in test tubes, mix, and incubate at room temp for 30 mins
1.7 Measure optical density (OD) at 600 nm
2. Enzyme extraction and Kinetic parameter assay
2.1 To a chilled motar, add 20g washed cell paste
2.2 Prepare 40g of quartz sand (SiO2) to add when grinding

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กลไกวิธีการรวมปฏิกิริยาของไอออนทองแดงที่ มีพันธะเปปไทด์สภาวะด่างกับการเกิดออกซิเดชันหอมโปรตีนตกค้าง เหมาะที่จะใช้วิธี Lowry กับโปรตีนความเข้มข้น 0.01-1.0 mg/ml และขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของ Cu + ผลิต โดยการเกิดออกซิเดชันของพันธะเปปไทด์ กับรีเอเจนต์ท่อง Ciocalteu (ส่วนผสมของกรด phosphotungstic และ phosphomolybdic กรดในปฏิกิริยาท่อง Ciocalteu) กลไกปฏิกิริยาไม่เป็นอย่างที่เข้าใจ แต่เกี่ยวข้องกับการลดลงของรีเอเจนต์ท่อง Ciocalteu ออกซิเดชันหอมตกค้าง (ส่วนใหญ่เป็นโพรไบโอ ยังไทโรซีน)1.1Preparation ของรีเอเจนต์ Lowry โดยผสมน้ำยา A:B:C ในอัตราส่วนต่อไปนี้: ml:1 100 มล.: 1 มิลลิลิตรA: 2% Na2CO3 ใน 0.1 N NaOHB:เทรต NaK 2%C: 1% CuSO4 5(H2O)1.2 ดำเนินการทดลองตามขั้นตอนต่อไปนี้ โซลูชัน (ml) สารละลายมาตรฐานตัวอย่าง เปล่า 1 2 3 4 5 บีเอสเอ 200 mg/l - 1ml 2มล. 3มล. 4มล. 5มล. ตัวอย่าง-H2O กลั่น 5 มิลลิลิตร 4 3มล. 2มล. 1มล.- ความเข้มข้น (g/ml) 0 40 60 80 100 120 1.3 ปิเปต 0.5 ml ของสารละลายจากหลอด ว่างเปล่า หลอดใหม่ถึง 1-51.4 เพิ่ม 0.7 ml ของ Lowry น้ำยาทดสอบหลอดใน 1.3 ฟักที่อุณหภูมิห้อง สำหรับ 10 นาที1.5 เตรียมแก้ปัญหาทำงานของเอเจนต์ท่อง โดยเจือจางด้วย H2O กลั่นในอัตราส่วน 1:11.6 เพิ่ม 0.1 ml ของรีเอเจนต์ท่อง (โซลูชั่นการทำงาน) ในหลอดทดลอง ผสม และฟักที่อุณหภูมิห้อง 30 นาที 1.7 วัดความหนาแน่นออปติคอล (OD) ที่ 600 นาโนเมตร2. เอนไซม์สกัดและพารามิเตอร์ Kinetic assay2.1 การ motar แช่เย็น เพิ่ม 20 กรัมล้างเซลล์ลงไป2.2 จัดเตรียมทรายควอตซ์ (SiO2) เพิ่มเมื่อบด 40 กรัม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กลไก
วิธีการรวมปฏิกิริยาของไอออนทองแดงพันธบัตรเปปไทด์ภายใต้เงื่อนไขที่อัลคาไลน์ที่มีการเกิดออกซิเดชันของโปรตีนตกค้างหอม วิธี Lowry จะใช้ดีที่สุดที่มีความเข้มข้นของโปรตีน 0.01-1.0 mg / ml และขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของ Cu + ผลิตโดยการเกิดออกซิเดชันของพันธบัตรเปปไทด์ที่มี Folin-Ciocalteu น้ำยา (ส่วนผสมของกรด phosphotungstic และกรด phosphomolybdic ใน Folin ปฏิกิริยา -Ciocalteu) กลไกการเกิดปฏิกิริยาไม่เป็นที่เข้าใจกัน แต่เกี่ยวข้องกับการลดลงของสาร Folin-Ciocalteu และการเกิดออกซิเดชันของสารตกค้างหอม (ส่วนใหญ่โพรไบโอซายน์ยัง).
1.1Preparation โลว์รีย์สารโดยการผสมน้ำยา A: B: ซีในอัตราส่วนดังต่อไปนี้: 100 มล. : 1ml: 1ml
A: 2% Na2CO3 ใน 0.1 N NaOH
B: 2% NaK Tartrate
C: 1% CuSO 4 5 (H2O)
1.2 ดำเนินการทดลองตามขั้นตอนต่อไป
โซลูชัน (มล.)
สารละลายตัวอย่างมาตรฐาน
ที่ว่างเปล่า 1 2 3 4 5
บีเอสเอ 200 mg / l - 1ml 2
มล. 3
มล. 4
มล. 5
มล.
ตัวอย่าง - - - - - - 
H2O กลั่น 5 4 มล. 3
มล. 2
มล. 1
มล. -
ความเข้มข้น (g / ml) 0 40 60 80 100 120
1.3 0.5 เปต มล. ของการแก้ปัญหาจากหลอดไม่มี ว่าง 1-5 เพื่อท่อใหม่
1.4 เพิ่ม 0.7 มิลลิลิตรโลว์รีย์สารในการทดสอบหลอดจัดทำขึ้น 1.3 ฟักไข่ที่อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 10 นาที
1.5 เตรียมการแก้ปัญหาของ Folin น้ำยาทำงานโดยเจือจางด้วยกลั่น H2O ในอัตราส่วน 1: 1 ที่
1.6 เพิ่ม 0.1 มิลลิลิตร Folin น้ำยา (วิธีการทำงาน) ในหลอดทดลองผสมและบ่มเพาะที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที
1.7 การวัด ความหนาแน่นของแสง (OD) ที่ 600 นาโนเมตร
2 การสกัดเอนไซม์และพารามิเตอร์ Kinetic ทดสอบ
2.1 เมื่อต้องการ motar แช่เย็นเพิ่ม 20 กรัมล้างเซลล์วาง
2.2 เตรียม 40g ของทรายควอทซ์ (SiO2) เพื่อเพิ่มเมื่อบด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กลไกวิธีการรวมปฏิกิริยาของไอออนทองแดงด้วยเปปไทด์พันธบัตรภายใต้สภาวะด่างปฏิกิริยาออกซิเดชันของโปรตีนตกค้างหอม โลว์รี่ วิธีดีที่สุดคือใช้กับโปรตีนปริมาณมิลลิกรัม / มิลลิลิตรและ 0.01-1.0 ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของ Cu + ผลิตโดยออกซิเดชันของพันธะเปปไทด์ที่มี folin ciocalteu รีเอเจนต์ ( ส่วนผสมของกรด phosphotungstic และฟอสโฟโมลิบดิกแอซิดใน folin ciocalteu ปฏิกิริยา ) กลไกปฏิกิริยาที่ไม่เข้าใจกัน แต่เกี่ยวข้องกับการลดลงของ folin ciocalteu รีเอเจนต์และออกซิเดชันของตกค้างหอม ( ส่วนใหญ่ทริปโตเฟนยังซีน )1.1preparation ของโลว์รีย์สารเคมีโดยการผสมสารเคมี A : B : C ในอัตราส่วนดังต่อไปนี้ : 1ml : 1ml 100 มล.A : Na2CO3 the 0.1 N NaOH 2%B : 2 % นาคทาร์เทรตC : 1 % CuSO4 5 ( H2O )1.2 ดำเนินการทดลองตามขั้นตอนต่อไปนี้วิธีแก้ปัญหา ( ml )ตัวอย่างโซลูชั่นมาตรฐานว่าง 1 2 3 4 5BSA 200 มก. / ล. - 1ml 2มล. 3มล. 45 มิลลิลิตรมลตัวอย่าง - - - - - - กลั่น H2O 5 4 3 มิลลิลิตรมล 2มิลลิลิตร 1มิลลิลิตร -สมาธิ (  g / ml ) 0 40 60 80 100 1201.3 หลอด 0.5 มิลลิลิตร สารละลายจากหลอดว่างหมายเลข 1-5 หลอดใหม่1.4 เพิ่ม 0.7 ml เบสรีเอเจนต์ทดสอบท่อที่เตรียมไว้ใน 1.3 , บ่มที่อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 10 นาที1.5 เตรียมวิธีการแก้ปัญหาการทำงานของ folin Reagent โดยเจือจางด้วยน้ำกลั่นในอัตราส่วน 1 : 1 โอ1.6 เพิ่ม 0.1 มิลลิลิตร folin Reagent ( ทํางานโซลูชั่น ) ในหลอด ทดลองผสม และบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที1.7 วัดความหนาแน่นของแสง ( OD ) ที่ 600 นาโนเมตร2 . การสกัดเอนไซม์จลนศาสตร์และพารามิเตอร์ การทดสอบ2.1 เพื่อเย็นพ่นเพิ่มทาล้างเซลล์วาง2.2 จัดเตรียม 40g ของทรายควอตซ์ ( SiO2 ) เพื่อเพิ่มเมื่อบด