a b s t r a c tThe cultivable micro

a b s t r a c t
The cultivable microbiota of skin and cloaca of captive Lithobates catesbeianus includes microorganisms
generally accepted as beneficial and potentially pathogenic bacteria. In order to select a group of potentially
probiotic bacteria, 136 isolates were evaluated for their surface properties and production of antagonistic
metabolites. Then, 11 lactic acid bacteria (LAB) strains were selected and identified as Lactobacillus
plantarum, Lb. brevis, Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis, L. garvieae and Enterococcus gallinarum.
Studies of compatibility indicate that all the strains could be included in a multi-strain probiotic, with
the exception of Ent. gallinarum CRL 1826 which inhibited LAB species through a bacteriocin-like metabolite.
These results contribute to the design of a probiotic product to improve the sanitary status of bullfrogs
in intensive culture systems, to avoid the use of antibiotics and thus to reduce production costs. It
could also be an alternative to prevent infectious diseases during the ex situ breeding of amphibian species
under threat of extinction.
_ 2012 Elsevier Ltd. All rights reserved.
1. Introduction
During the last decades, the culturing of many amphibian species
has grown substantially in an effort to repopulate devastated
environments where specific populations have declined to near
extinction (Rollins-Smith, 2009). On the international market some
species are of great interest to obtain food and by-products (Texeira
et al., 2002). In fact, in pharmacological areas, some amphibian
derived molecules are being studied as anti-tumor or antimicrobial
drugs (Lu et al., 2008; Lib้rio et al., 2011).
The American bullfrog or Lithobates catesbeianus is one of the
species selected for raniculture because of its desirable biological
attributes mainly their muscle mass and by-products such as skin,
liver and gut (Texeira et al., 2002). In intensive growth systems,
animals are exposed to a wide variety of microorganisms (Lauer
et al., 2008; Woodhams et al., 2007). Thus, the indigenous microbiota
of skin and gastrointestinal tract could be affected by many factors
such as microbial interactions, water flows, husbandry
techniques and disinfection, which could alter the equilibrium of
the microbial ecosystems. These aspects, together with the stress
produced by crowding, may overwhelm immune barriers, and
microbial opportunists can cause the outbreak of infectious diseases
(Glorioso et al., 1974; Mauel et al., 2002).
In raniculture, research activities are focused on the isolation of
pathogens associated with bacterial dermatosepticemia or red-leg
syndrome (RLS), an infectious disease that mainly affects bullfrog
hatcheries (Glorioso et al., 1974; Mauel et al., 2002; Densmore
and Earl Green, 2007) and causes high mortality and significant
economic losses. Pathogens include Enterobacteriaceae, Aeromonas
hydrophila, Elizabethkingia meningoseptica, Pseudomonas aeruginosa
and Staphylococcus epidermidis (Glorioso et al., 1974; Mauel et al.,
2002; Schadich et al., 2010). However, RLS has been implicated
in a localized die-off of Bufo americanus. Pathogenic species belong
to the indigenous microbiota and could affect amphibians in the
wild under different environmental conditions (Carey et al., 1999).
Treatment of the captive animals with chemotherapeutics contributes
both to modifications of the indigenous microbiota and to
the spread of antibiotic resistant bacteria (Verschuere et al., 2000;
Vine et al., 2004; Ring๘ et al., 2010). Thus, an alternative therapy is
being developed worldwide, associated with the use of probiotics
to restore beneficial microbial populations that could help to control
potentially pathogenic microorganisms (Reid et al., 2003). Consequently,
knowledge of the main components of the indigenous
microbiota in the normal physiological state is needed. Previously,
the cultivable autochthonous microbiota of an L. catesbeianus
hatchery located in the northwest of Argentina and composed of
0034-5288/$ - see front matter _ 2012 Elsevier Ltd. All rights reserved.
http://dx.doi.org/10.1016/j.rvsc.2012.05.007
⇑ Corresponding author. Tel.: [phone]; fax: [phone].
E-mail address: [e-mail] (M. E. Fแtima Nader-Macํas).
Research in Veterinary Science 93 (2012) 1160–1167
Contents lists available at SciVerse ScienceDirect
Research in Veterinary Science
journal homepage: www.elsevier.com/locate/rvsc

หน้า สอง
lactic acid bacteria (LAB), Micrococcus spp., and Enterobacteriaceae
was evaluated (Pasteris et al., 2006). Among RLS-associated pathogens,
C. freundii, Ps. aeruginosa and S. epidermidis were isolated
(Pasteris et al., 2006, 2009a). A study of the beneficial properties
of LAB was also carried out and some strains were selected as probiotic
candidates for raniculture (Pasteris et al., 2009a,b). However,
the microbiota of L. catesbeianus hatcheries could be modified
according to climatic variations. Keeping in mind the design of a
multi-strain probiotic to be applied in different geographical regions
of the country, the first aim of this work was to evaluate
the cultivable microbiota of another hatchery, with special interest
in those genera recognized as beneficial (LAB, Bifidobacterium and
Bacillus) and potentially pathogens associated with RLS. Since the
use of probiotics in aquaculture is becoming increasingly popular
(Vine et al., 2004; Ringø et al., 2010), the second aim was to study
some beneficial properties of the potentially beneficial bacteria
and select strains to promote the design of a probiotic for
raniculture.
2. Materials and methods
2.1. Animals and samples collection
Samples were taken from twenty L. catesbeianus specimens
without any apparent signs or symptoms of RLS and therefore considered
as healthy frogs. Animals in the fattening phase
(12 months of age, weight between 200 and 250 g) were sampled
in a hatchery located in the center of Argentina (Río Cuarto, Córdoba)
during the autumn (April 2009). Frogs were taken from different
areas of the hatchery and skin samples were obtained by
scraping 1 cm2 of the ventral and dorsal skin (VS, DS) and cloaca
of live animals by using sterile cotton swabs. The samples were
collected in LAPT medium that contains in g/l: yeast extract, 10;
peptone, 15; tryptone, 10 and Tween 80, 1 ml/l, pH 6.8 (Raibaud
et al., 1963) and kept at 4 C for 6 h until laboratory processing.
2.2. Isolation of microbial populations from Lithobates catesbeianus
The quantification of the microorganisms was carried out by the
serial dilution method using 0.1% (vol./vol.) peptone as a dilution
medium. 100 ll samples were plated on selective or differential
culture media. Isolation of LAB was performed using Man, Rogosa,
Sharpe (MRS) agar (de Man et al., 1969), Lactobacillus Selection
Media (LBS) agar and M17 agar. Bilis Esculine Agar (BEA) was employed
for the isolation of group D Streptococcus and Enterococcus,
while Reinforced Clostridium Agar (RCA) supplemented with 1%
aniline blue and 0.05% sodium propionate (Bullen et al., 1973)
was used to reveal the presence of Bifidobacterium; Mannitol Salt
Agar (MSA) for Staphylococcus, Cetrimide (CET) agar for Pseudomonas
and MacConkey (MC) agar for coliform bacteria. Plate Count
Agar (PCA) was used to evaluate the total number of mesophilic
microorganisms and Bacillus cereus Agar (BA) for spore-forming
bacteria. To remove the vegetative forms of the associated microbiota,
samples plated in BA were previously heated at 80 C for
15 min, and then incubated at 37 C for 3 h before plating (Leuschner
et al., 2003). Sabouraud (SAB) agar was employed for yeast and
mycelial fungi isolation. All the plates were incubated in microaerophilic
conditions at 37 C for 48–72 h, except samples plated on
SAB that were incubated during 15 days. Only RCA plates were
incubated for 1 week, at 37 C in anaerobic conditions (Anaero-
Gen™ – Oxoid – United Kingdom).
Selected colonies of each microbial group were grown in different
broth culture media: MRS (for LAB), LAPT + 1% glucose (for
group D Streptococcus/Enterococcus, Staphylococcus spp., Bacillus
spp., Enterobacteriaceae and yeast/fungi), LAPT + 1% glucose + 1%
lactose (for Bifidobacterium spp.) or Brain Heart Infusion (BHI)
(for Pseudomonas spp.) for 18 h at 37 C. Cells collected by centrifugation
at 3000g for 5 min at 4 C were resuspended in MRS
broth + 20% (vol./vol.) glycerol, and stored at 20 C.
All the culture media were obtained from Britania (Argentina)
except for MRS and BA, which were purchased from Merck (Germany)
and BHI from Difco (USA).
2.3. Partial phenotypic identification of members of the indigenous
microbiota
Bacterial identification was performed by morphological and
phenotypic characteristics using standard biochemical assays for
the different groups of microorganisms: Gram staining; catalase,
urease, phosphatase and coagulase activities; nitrate reduction; indole
production; citrate utilization, mobility, arginine, hypurate,
starch and casein hydrolysis; bacitracin and novobiocin susceptibility,
growth in cetrimide; growth in 6.5% and 7% (w./vol.) NaCl,
as well as at different pH and temperatures (4, 42, 50 and 60 C),
and some sugars to determine the fermentation patterns. Gluconate
utilization, gas production in Gibson medium and Voges–
Proskauer reaction were used to determine the homo- and hetero-
fermentative characteristics of the isolates (Holt et al., 1994;
Murray et al., 2003).
2.4. Screening of probiotic characteristics
2.4.1. Bacterial strains and culture conditions
The selection of 136 isolates to evaluate the beneficial properties
was performed according to the following criteria: (a) colonies
that grew in specific media for LAB (MRS, M17, LBS and BEA), and
showed rod or cocci morphology, Gram-positive staining and catalase
negative activity. (b) isolates from BA medium that showed
rod morphology, Gram-positive staining and catalase positive
activity and (c) isolates from RC

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แบบ b s t r กับ c t
microbiota cultivable ผิวและ cloaca catesbeianus Lithobates ภายในกิจการและมีจุลินทรีย์
ยอมรับโดยทั่วไปเป็นแบคทีเรียที่มีประโยชน์ และอาจอุบัติขึ้น การเลือกกลุ่มของอาจ
แบคทีเรียโปรไบโอติกส์ แยก 136 ถูกประเมินคุณสมบัติพื้นผิวและผลิตเป็นปรปักษ์
metabolites แล้ว เลือก และระบุเป็นแลคโตบาซิลลัสสายพันธุ์แบคทีเรีย (LAB) กรด 11
plantarum เทนเซอร์ปอนด์ Pediococcus pentosaceus, Lactococcus lactis, L. garvieae และ Enterococcus gallinarum.
ศึกษากันบ่งชี้ว่า สายพันธุ์ทั้งหมดสามารถถูกรวมในการต้องใช้หลายโปรไบโอติกส์ กับ
ยกเว้นเอนท์ gallinarum 1826 CRL ที่ห้ามปฏิบัติชนิดผ่าน metabolite bacteriocin เหมือนเป็นการ
ผลลัพธ์เหล่านี้นำไปสู่การออกแบบผลิตภัณฑ์โปรไบโอติกส์เพื่อปรับปรุงสถานะสุขาภิบาลของ bullfrogs
ในระบบวัฒนธรรมเร่งรัด หลีกเลี่ยงการใช้ยาปฏิชีวนะ และทำให้ลดต้นทุนการผลิต มัน
นอกจากนี้ยังอาจเป็นทางเลือกในการป้องกันโรคติดเชื้อในระหว่างอดีตซิพันธุ์พันธุ์ amphibian
ภายใต้ภัยคุกคามของดับ
_ 2012 Elsevier จำกัด สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมด.
1 แนะนำ
ระหว่างทศวรรษ culturing amphibian พันธุ์หลาย
ได้เติบโตขึ้นมากในการพยายาม repopulate ทำลาย
สภาพแวดล้อมที่มีปฏิเสธเฉพาะประชากรที่ใกล้
ดับ (โรลลินส์สมิธ 2009) สากลตลาดบาง
ชนิดที่น่าสนใจดีจะได้รับอาหารและสินค้าพลอยได้ (Texeira
et al., 2002) ในความเป็นจริง ในพื้นที่ pharmacological, amphibian บาง
โมเลกุลได้รับเป็นการศึกษาเนื้องอกต่อต้านหรือยับยั้งจุลินทรีย์
ยา (Lu et al., 2008 Lib้rio et al., 2011) .
กบบูลฟร็อกอเมริกันหรือ Lithobates catesbeianus เป็นหนึ่งใน
สายพันธุ์ที่เลือกสำหรับ raniculture เพราะทางชีวภาพสมควร
คุณลักษณะส่วนใหญ่ของกล้ามเนื้อเช่นผิวหนัง และมวล
ตับและลำไส้ (Texeira et al., 2002) ในระบบเร่งรัดการเจริญเติบโต,
สัตว์กำลังเผชิญกับความหลากหลายของจุลินทรีย์ (Lauer
et al., 2008 Woodhams et al., 2007) ดังนั้น microbiota ชน
ของผิวหนัง และระบบทางเดินอาจได้รับผลกระทบจากปัจจัยหลาย
เช่นโต้ตอบจุลินทรีย์ น้ำไหล เลี้ยง
เทคนิคและฆ่าเชื้อ ซึ่งสามารถเปลี่ยนสมดุลของ
ระบบนิเวศจุลินทรีย์ได้ แง่ กับความเครียด
ผลิต โดยกครั้ง อาจล้นอุปสรรคภูมิคุ้มกัน และ
opportunists จุลินทรีย์สามารถทำให้เกิดการระบาดของโรค
(กลอริโอโซ et al., 1974 Mauel และ al., 2002) .
ใน raniculture กิจกรรมวิจัยจะมุ่งเน้นในการแยกของ
โรคที่เกี่ยวข้องกับแบคทีเรีย dermatosepticemia หรือขาแดง
กลุ่มอาการ (RLS), เป็นโรคที่ส่วนใหญ่มีผลต่อกบบูลฟร็อก
hatcheries (กลอริโอโซ et al., 1974 Mauel และ al., 2002 Densmore
และเอิร์ลสี เขียว 2007) และเป็นสาเหตุการตายที่สูง และที่สำคัญ
สูญเสียทางเศรษฐกิจ โรครวม Enterobacteriaceae, Aeromonas
hydrophila, Elizabethkingia meningoseptica, Pseudomonas aeruginosa
และ Staphylococcus epidermidis (กลอริโอโซ et al., 1974 Mauel et al.,
2002 Schadich et al., 2010) อย่างไรก็ตาม มีแล้วอู๊ด RLS
ใน die-off เป็นภาษาท้องถิ่นของ Bufo americanus พันธุ์อุบัติอยู่
การ microbiota ชน และอาจส่งผลกระทบต่อสัตว์ในการ
ป่าภายใต้สภาพแวดล้อมที่แตกต่างกัน (โชว์พลัง et al., 1999) .
จัดสรรรักษาสัตว์ภายในกิจการและมี chemotherapeutics
ทั้งเพื่อแก้ไข microbiota ชน และถึง
การแพร่กระจายของแบคทีเรียดื้อยาปฏิชีวนะ (Verschuere et al., 2000;
Vine et al., 2004 Ring๘ et al., 2010) ดังนั้น การบำบัดทางเลือกเป็น
กำลังพัฒนาทั่วโลก เกี่ยวข้องกับการใช้ probiotics
เพื่อคืนประโยชน์ต่อประชากรจุลินทรีย์ที่ช่วยควบคุม
อาจจุลินทรีย์ (Reid et al., 2003) ดังนั้น,
ความรู้ส่วนประกอบหลักของการชน
microbiota ในรัฐสรีรวิทยาปกติจำเป็นต้องใช้ ก่อนหน้านี้,
microbiota autochthonous cultivable ของการ catesbeianus L.
โรงเพาะอยู่ในตะวันตกเฉียงเหนือของอาร์เจนตินา และประกอบ
0034-5288 / $ - ดูเรื่องหน้า_ 2012 Elsevier จำกัด สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมด.
http://dx.doi.org/10.1016/j.rvsc.2012.05.007
⇑ Corresponding ผู้เขียน โทรศัพท์: 54 381 4310465 โทรสาร: 54 381 4311720.
ที่อยู่อีเมล: [e-mail] (M. E. Fแtima Nader-Macํas) .
วิจัยสัตวแพทย์วิทยาศาสตร์ 93 (2012) 1160–1167
เนื้อหารายการ SciVerse ScienceDirect
วิจัยสัตวแพทยศาสตร์
สมุดหน้าแรก: www.elsevier.com/ ค้น หา/rvsc

หน้าสอง
แบคทีเรียกรดแลกติก (LAB), โอรำ และ Enterobacteriaceae
มีค่า (Pasteris และ al., 2006) ระหว่างบทบาทเชื่อมโยงโรค,
c. freundii, Ps. aeruginosa และ S. epidermidis ถูกแยก
(Pasteris และ al., 2006, 2009a) การศึกษาคุณสมบัติประโยชน์
ของแล็บยังทำออกมา และบางสายพันธุ์ถูกเลือกเป็นโปรไบโอติกส์
สำหรับ raniculture (Pasteris et al., 2009a, b) อย่างไรก็ตาม,
สามารถแก้ไข microbiota ของ L. catesbeianus hatcheries
ตามเปลี่ยนแปลง climatic ทำให้ทราบการออกแบบการ
ต้องใช้หลายโปรไบโอติกส์จะใช้ในภูมิภาคทางภูมิศาสตร์
ของประเทศ จุดมุ่งหมายแรกของงานนี้คือเพื่อ ประเมิน
microbiota cultivable ของโรงเพาะอื่น ดอกเบี้ยพิเศษ
ในสกุลเหล่านั้นเป็นประโยชน์ (LAB, Bifidobacterium และ
คัด) โรคอาจเกี่ยวข้องกับบทบาทและการ ตั้งแต่
การใช้ probiotics ในสัตว์น้ำกำลังเป็นที่นิยมมากขึ้นเรื่อย ๆ
(Vine et al., 2004 Ringø et al., 2010), จุดมุ่งหมายที่สองคือการ ศึกษา
คุณสมบัติบางประโยชน์ของแบคทีเรียอาจมีประโยชน์
เลือกสายพันธุ์เพื่อส่งเสริมการออกแบบของโปรไบโอติกส์สำหรับ
raniculture.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 สัตว์และตัวอย่างชุด
ตัวอย่างที่ถ่ายจาก 20 L. catesbeianus ไว้เป็นตัวอย่าง
โดยไม่ปรากฏอาการหรืออาการของบทบาทใด ๆ และดังนั้นจึง ถือว่า
เป็นกบมีสุขภาพดี สัตว์ในระยะ fattening
(12 เดือนของอายุ น้ำหนักระหว่าง 200 และ 250 g) มีความ
ในโรงเพาะที่อยู่ในศูนย์ของอาร์เจนติน่า (รีโอเดลาป Cuarto กอร์โดบา)
ระหว่างฤดูใบไม้ร่วง (2552 เมษายน) กบที่ได้มาจากอื่น
พื้นที่อย่างโรงเพาะและผิวได้รับโดย
scraping cm2 1 ผิว dorsal และ ventral (VS, DS) และ cloaca
ชีวิตโดย swabs ผ้ากอซ ตัวอย่างดี
รวบรวมไว้ใน LAPT ที่ประกอบด้วยในบัญชี g/l:ยีสต์สกัด 10;
peptone, 15 tryptone, 10 และ Tween 80, 1 ml/l ค่า pH 6.8 (Raibaud
et al., 1963) และเก็บจนประมวลผลปฏิบัติการที่ 4 C สำหรับ 6 h
2.2 แยกของประชากรจุลินทรีย์จาก Lithobates catesbeianus
นับจุลินทรีย์ถูกดำเนินการโดยการ
วิธีเจือจางประจำใช้ peptone 0.1% (ปี) เป็นตัวเจือจาง
สื่อ ตัวอย่าง 100 จะถูกชุบงาน หรือส่วนที่แตกต่าง
สื่อวัฒนธรรม แยกของห้องปฏิบัติที่ดำเนินการโดยใช้คน Rogosa,
agar Sharpe (นาง) (เดคนร้อยเอ็ด al., 1969), แลคโตบาซิลลัสเลือก
agar Media (ปอนด์) และ M17 agar Bilis Esculine Agar (บดินทร์) ถูกว่าจ้าง
สำหรับแยกกลุ่ม D อุณหภูมิและ Enterococcus,
ขณะเสริมเชื้อ Clostridium Agar (RCA) เสริม ด้วย 1%
aniline บลูและ 0.05% โซเดียม propionate (Bullen et al., 1973)
ถูกใช้เพื่อแสดงสถานะของ Bifidobacterium เกลือ mannitol
Agar (MSA) สำหรับ Staphylococcus, agar Cetrimide (cet โดย) สำหรับลี
agar MacConkey (MC) สำหรับโคลิฟอร์มแบคทีเรียและการ นับจาน
Agar (PCA) ถูกใช้เพื่อประเมินจำนวน mesophilic
จุลินทรีย์และคัด cereus Agar (BA) สำหรับขึ้นรูปสปอร์
แบคทีเรีย เอาแบบผักเรื้อรัง microbiota สัมพันธ์,
ตัวอย่างชุบใน BA ได้ก่อนหน้านี้ความร้อนที่ 80 C สำหรับ
15 นาที และ incubated แล้ว ที่ 37 C สำหรับ h 3 ก่อนชุบ (Leuschner
et al., 2003) Agar Sabouraud (ส.) ได้รับการว่าจ้างสำหรับยีสต์ และ
แยกเชื้อรา mycelial แผ่นทั้งหมดถูก incubated ใน microaerophilic
เงื่อนไขที่ 37 C h ยกเว้นตัวอย่างที่ชุบบน 48–72
ส.ที่ถูก incubated ในระหว่างวันที่ 15 เฉพาะ RCA แผ่นถูก
incubated สำหรับสัปดาห์ที่ 1 ที่ 37 C ในสภาพไร้อากาศแบบ (Anaero-
™ Gen – Oxoid – สหราชอาณาจักร) .
เลือกอาณานิคมของแต่ละกลุ่มจุลินทรีย์เติบโตในต่าง
สื่อวัฒนธรรมซุป: MRS (สำหรับห้องปฏิบัติการ) LAPT 1% กลูโคส (สำหรับ
กลุ่ม D อุณหภูมิ/Enterococcus, Staphylococcus โอ คัด
โอ Enterobacteriaceae และยีสต์/เชื้อรา), LAPT 1% กลูโคส 1%
แล็กโทส (สำหรับโอ Bifidobacterium) หรือสมองหัวใจคอนกรีต (BHI)
(for Pseudomonas spp.) สำหรับ h 18 ที่เซลล์ 37 C. โดย centrifugation
ที่ 3000 g ใน 5 นาทีที่ 4 C ถูก resuspended ใน MRS
ซุป 20% (ปี) กลีเซอร และจัดเก็บที่ 20 C.
สื่อวัฒนธรรมได้รับจาก Britania (อาร์เจนตินา)
ยกเว้น MRS และ BAซึ่งซื้อจากบริษัทเมอร์ค (ประเทศเยอรมนี)
และ BHI จาก Difco (สหรัฐอเมริกา) .
2.3 รหัสไทป์บางส่วนของสมาชิกของที่พื้น
microbiota
แบคทีเรียรหัสถูกดำเนินการ โดยสัณฐาน และ
ไทป์ลักษณะใช้มาตรฐาน assays ชีวเคมีสำหรับ
กลุ่มจุลินทรีย์: ย้อมสีกรัม catalase,
ยู ฟอสฟาเตสและ coagulase กิจกรรม ไนเตรตลด อินโดล
ผลิต ใช้ประโยชน์ซิเตรต เคลื่อนไหว อาร์จินีน hypurate,
แป้งและเคซีนไฮโตรไลซ์ bacitracin และ novobiocin ภูมิไวรับ,
ใน cetrimide เติบโต 6.5% และ 7% (w. / ปี) NaCl,
เช่นกันเป็นที่อื่นค่า pH และอุณหภูมิ (4, 42, 50 และ 60 C),
และน้ำตาลบางส่วนเพื่อกำหนดรูปแบบการหมัก Gluconate
ใช้ประโยชน์ การผลิตแก๊สในกลางกิบสันและ Voges–
ปฏิกิริยา Proskauer ถูกใช้เพื่อกำหนดตุ๊ด -และ hetero-
fermentative ลักษณะของการแยก (Holt et al., 1994;
เมอร์เรย์และ al., 2003) .
2.4 การคัดกรองของโปรไบโอติกส์ลักษณะ
2.4.1 สายพันธุ์แบคทีเรียและสภาพวัฒนธรรม
เลือกแยกประเมินคุณสมบัติประโยชน์ 136
ทำตามเงื่อนไขต่อไปนี้: อาณานิคม (a)
ที่เติบโตในสื่อเฉพาะในแล็บ (MRS, M17 ปอนด์ และบดินทร์), และ
พบร็อดหรือ cocci สัณฐานวิทยา การย้อมสีแบคทีเรียแกรมบวก และ catalase
ลบกิจกรรม (ข) แยกจากกลาง BA ที่พบ
ร็อดสัณฐานวิทยา การย้อมสีแบคทีเรียแกรมบวก และบวก catalase
กิจกรรมและ (c) แยกจาก RC

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

B S T R A C T
ไมโครไบโ ้าเพาะปลูกของผิวและล้างกลุ่มของเชลย lithobates catesbeianus รวมถึงจุลินทรีย์
ยอมรับกันโดยทั่วไปว่าเป็นประโยชน์ และอาจเป็นเชื้อโรคแบคทีเรีย เพื่อเลือกกลุ่มของแบคทีเรียโปรไบโอติกอาจ
136 สายพันธุ์มาศึกษาสมบัติของพวกเขาและการผลิตสารปฏิปักษ์

จากนั้น11 แบคทีเรียผลิตกรดแลกติกสายพันธุ์ที่เลือกและระบุเป็น Lactobacillus
plantarum ปอนด์ในแบคทีเรีย 3 , L . lactis และแลคโตค คัส , garvieae เอ็นเทโรค็อกคัส gallinarum .
ศึกษาความเข้ากันได้ พบว่า สายพันธุ์ทั้งหมดได้รวมอยู่ในหลายสายพันธุ์ โปรไบโอติก กับ
ข้อยกเว้นของ Ent .หา gallinarum 1826 ซึ่งยับยั้งปฏิบัติการชนิดผ่านต่อเหมือนไลท์ .
ผลลัพธ์เหล่านี้มีส่วนร่วมในการออกแบบของผลิตภัณฑ์โปรไบโอติกเพื่อการปรับปรุงสภาพสุขาภิบาล bullfrogs
ในระบบการเลี้ยง เพื่อหลีกเลี่ยงการใช้ยาปฏิชีวนะ และดังนั้นจึง ลดต้นทุนการผลิต มัน
ยังสามารถเป็นทางเลือกเพื่อป้องกันโรคติดเชื้อใน ex situ การปรับปรุงพันธุ์สัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำ
ภายใต้การคุกคามของการสูญเสีย
_ 2012 บริษัท จำกัด .
1 บทนำ
ในระหว่างทศวรรษที่ผ่านมา , การเพาะเลี้ยงหลายพันธุ์สัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำ
ได้เติบโตขึ้นอย่างมากในความพยายามที่จะเพิ่มจำนวนประชากรที่เฉพาะเจาะจง มีสภาพแวดล้อมที่ทำลาย

ลดลงไปใกล้การสูญพันธุ์ ( โรลลินส์ สมิธ , 2009 ) ในตลาดต่างประเทศบางส่วน
ชนิดจะน่าสนใจมากที่จะได้รับจากอาหารและ ( เท็กเซร่า
et al . , 2002 ) ในความเป็นจริงในพื้นที่ ยา บางสัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำ
ได้มาโมเลกุลที่มีการศึกษาเป็น anti-tumor หรือจุลชีพ
ยา ( Lu et al . , 2008 ; lib . . ริโอ et al . , 2011 ) .
อึ่งอเมริกันหรือ lithobates catesbeianus เป็นหนึ่งของ
ชนิดเลือก raniculture เพราะ
ทางชีววิทยาคุณลักษณะส่วนใหญ่เป็นมวลกล้ามเนื้อของพวกเขาและผลิตภัณฑ์ เช่น ผิวหนัง ตับและลำไส้
( เท็กเซร่า et al . , 2002 ) ในระบบการเร่งรัด
สัตว์สัมผัสกับความหลากหลายของจุลินทรีย์ ( >
et al . , 2008 ; woodhams et al . , 2007 ) ดังนั้น ,
ไมโครไบโ ้าพื้นเมืองของผิวหนัง และระบบทางเดินอาหาร อาจได้รับผลกระทบจากปัจจัยหลายอย่าง เช่น การโต้ตอบ
จุลินทรีย์ , น้ำไหล , เทคนิคการเลี้ยง
และฆ่าเชื้อโรคที่อาจเปลี่ยนแปลงความสมดุลของระบบนิเวศจุลินทรีย์
. ด้านเหล่านี้พร้อมกับความเครียด
ผลิต โดยเบียด อาจเอาชนะอุปสรรค ภูมิคุ้มกัน และสามารถทำให้จุลินทรีย์ฉวยโอกาส
การระบาดของโรคติดเชื้อ
( โกล ริโอโซ et al . ,1974 ; mauel et al . , 2002 ) raniculture
ในกิจกรรมการวิจัยจะมุ่งเน้นการแยกเชื้อแบคทีเรียหรือเชื้อโรคที่เกี่ยวข้องกับ dermatosepticemia

ขาผื่นแดง ( RLS ) เป็นการติดเชื้อที่ส่วนใหญ่มีผลต่ออึ่ง
โรงเพาะฟัก ( โกล ริโอโซ et al . , 1974 ; mauel et al . , 2002 ; ดินส์มอร์
และ เอิร์ลสีเขียว , 2007 ) และสาเหตุการตายสูง และการสูญเสียทางเศรษฐกิจที่สำคัญ

เชื้อโรค ได้แก่ เชื้อใน elizabethkingia ผิดเพี้ยน
, ,
meningoseptica Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus และอาหาร ( โกล ริโอโซ et al . , 1974 ;
mauel et al . , 2002 ; schadich et al . , 2010 ) อย่างไรก็ตาม มีการพาดพิงถึง RLS
ในถิ่นที่ตายของบูโฟ มริกานัส . เชื้อโรคสายพันธุ์ของ
กับไมโครไบโ ้าพื้นเมืองและอาจมีผลต่อสัตว์ครึ่งบกครึ่งน้ำใน
ป่าภายใต้สภาพแวดล้อมที่แตกต่างกัน ( Carey et al . , 1999 ) .
รักษาสัตว์ไว้กับ chemotherapeutics มีส่วนช่วย
ทั้งการปรับเปลี่ยนของไมโครไบโ ้าพื้นเมือง และการแพร่กระจายของแบคทีเรียต้านทานยาปฏิชีวนะ
( verschuere et al . , 2000 ;
เถา et al . , 2004 ; แหวนแยก et al . , 2010 ) . ดังนั้น การรักษาทางเลือก
ถูกพัฒนาทั่วโลกที่เกี่ยวข้องกับการใช้โปรไบโอติก
เพื่อฟื้นฟูประชากรจุลินทรีย์ที่เป็นประโยชน์ที่สามารถช่วยในการควบคุมเชื้อจุลินทรีย์ (
อาจ Reid et al . , 2003 ) โดย
ความรู้ของคอมโพเนนต์หลักของไมโครไบโ ้าพื้นเมือง
ในรัฐทางสรีรวิทยาปกติเป็นสิ่งจำเป็น ก่อนหน้านี้ ไมโครไบโ ้า
autochthonous เพาะปลูกของ catesbeianus
Lฟาร์มตั้งอยู่ในทิศตะวันตกเฉียงเหนือของอาร์เจนตินา และประกอบด้วย
0034-5288 / $ - ดูเรื่องหน้า _ 2012 บริษัท จำกัด .
http : / / DX ดอย . org / 10.1016 / j.rvsc . 2012.05.007
⇑ที่สอดคล้องกันของผู้เขียน โทร . 54 381 4310465 ; โทรสาร : 54 381 4311720 .
e - mail address : [e-mail] ( M . E . F เจ้าไทม่า Nader Mac ํ ) .
การวิจัยทางวิทยาศาสตร์การสัตวแพทย์ 93 ( 2012 ) ( 1167
1160เนื้อหารายการของที่งานวิจัยบริการสัตวแพทย์วารสารวิทยาศาสตร์

sciverse หน้าแรก : www.elsevier . com / ค้นหา / rvsc

หน้าสอง
แบคทีเรียผลิตกรดแลกติก , Micrococcus spp . และผิดเพี้ยน
ถูกประเมิน ( pasteris et al . , 2006 ) ของ RLS เชื้อโรคที่เกี่ยวข้อง ,
c freundii . aeruginosa , และ S . อาหารแยก
( pasteris et al . , 2006 , 2009a )การศึกษาประโยชน์คุณสมบัติ
แล็ป ดำเนินการ และบางสายพันธุ์ที่ได้รับเลือกเป็นผู้สมัครสำหรับโปรไบโอติก
raniculture ( pasteris et al . , 2009a , B ) อย่างไรก็ตาม ไมโครไบโ ้าของ L .

catesbeianus โรงเพาะฟักที่ไม่สามารถแก้ไขไปตามความผันแปรสภาพอากาศ การรักษาในใจการออกแบบของ
หลายสายพันธุ์ โปรไบโอติกเพื่อใช้ในภูมิภาคที่แตกต่างกันทางภูมิศาสตร์
ของประเทศจุดมุ่งหมายแรกของงานนี้ คือ เพื่อประเมิน
ไมโครไบโ ้าเพาะปลูกของฟาร์มอื่นๆ ที่มีความสนใจพิเศษในนั้นได้รับการยอมรับเป็นประโยชน์
สกุล ( แลปไบฟิโดแบคทีเรียและ
< ) และอาจเป็นเชื้อโรคที่เกี่ยวข้องกับ RLS . ตั้งแต่
ใช้โปรไบโอติกในการเพาะเลี้ยงสัตว์น้ำจะกลายเป็นที่นิยมมากขึ้น
( เถา et al . , 2004 ; แหวนขึ้น et al . , 2010 ) , เป้าหมายที่สองคือศึกษา
บางประโยชน์คุณสมบัติของ
แบคทีเรียอาจเป็นประโยชน์และเลือกสายพันธุ์ที่จะส่งเสริมการออกแบบของโปรไบโอติกสำหรับ raniculture
.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . สัตว์และตัวอย่างคอลเลกชัน
ตัวอย่างถ่ายจากยี่สิบลิตร catesbeianus ตัวอย่าง
ไม่มีสัญญาณหรืออาการของ RLS ชัดเจนใด ๆและดังนั้นจึงถือว่า
เป็นกบที่มีสุขภาพดี สัตว์ในขุนเฟส
( 12 เดือนของอายุน้ำหนักระหว่าง 200 และ 250 กรัม ) จำนวน
ในโรงเพาะฟัก ตั้งอยู่ในศูนย์กลางของอาร์เจนตินา ( R í o cuarto กอร์โดบา , )
ในช่วงฤดูใบไม้ร่วง ( เมษายน 2552 ) กบถ่ายจากพื้นที่ต่าง ๆของโรงเพาะฟักและผิว

ตัวอย่างได้โดยขูด 1 ตร. ซม. ของครีบท้องและหลังผิว ( VS DS ) และล้างกลุ่ม
สัตว์มีชีวิต โดยใช้ผ้าฝ้าย swabs หมัน จำนวน
เก็บใน LAPT ขนาดกลางที่มีใน G / L : สารสกัดจากยีสต์ , 10 ;
; ทริพโทน extract , 15 , 10 และทวีน 80 1 มิลลิลิตรพีเอช 6.8 ( raibaud
et al . , 1963 ) และเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมง จนกว่ากระบวนการปฏิบัติการ .
2.2 . การแยกของประชากรจุลินทรีย์จาก lithobates catesbeianus
ปริมาณของจุลินทรีย์ที่ถูกดำเนินการโดย
อุทิศถวายโดยใช้ 0.1% ( Vol / Vol ) เปปโตนเป็นเจือจาง
ปานกลาง จำนวน 100 จะชุบบนเลือกหรือ differential
สื่อวัฒนธรรม การแยกของห้องปฏิบัติการการใช้คน rogosa
, ชาร์ป ( นาง ) วุ้น ( de Man et al . , 1969 ) , สื่อการ
แลคโตบาซิลลัส ( ปอนด์ ) m17 วุ้น และวุ้น และ esculine ( บี ) ใช้สำหรับแยกกลุ่ม D

และเชื้อเอ็นเทโรค็อกคัสในขณะที่เสริม , Clostridium ( RCA ) เสริมด้วย %
1เมอร์เซเดสเบนซ์และ 0.05 % โซเดียม propionate ( บุลเลน et al . , 1973 )
เคยเปิดเผยการปรากฏตัวของบิฟิโดแบคทีเรีย ; 5 เกลือ
( MSA ) Staphylococcus , ซิตริไมด์ ( CET ) วุ้นสำหรับ Pseudomonas
macconkey ( MC ) และวุ้นสำหรับโคลิฟอร์มแบคทีเรีย วุ้นนับ
จาน ( PCA ) ถูกใช้เพื่อประเมินจำนวนของจุลินทรีย์ Bacillus cereus และมี

( BA ) เป็นแบคทีเรียที่สร้างสปอร์เอารูปแบบลักษณะของไมโครไบโ ้าตัวอย่างที่เกี่ยวข้อง , ชุบบาก่อนหน้านี้

อุ่นที่ 80 องศาเซลเซียสนาน 15 นาที แล้วบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 ชม. ก่อนชุบ ( leuschner
et al . , 2003 ) sabouraud ( SAB ) วุ้นก็ใช้ยีสต์และเชื้อรา
เจริญแยก จานทั้งหมดถูกบ่มในสภาวะไมโครแอโรฟิลิก
ที่อุณหภูมิ 37 48 - 72 ชั่วโมง ยกเว้น ชุบบน
ตัวอย่างทรัพย์ที่ถูกบ่มใน 15 วัน แต่แผ่นเป็น RCA
บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 สัปดาห์ ในเงื่อนไข anaerobic ( anaero -
Gen ™– oxoid –สหราชอาณาจักร ) .
เลือกโคโลนีของจุลินทรีย์แต่ละกลุ่มถูกปลูกในที่แตกต่างกัน
ซุปวัฒนธรรมสื่อ : คุณนาย ( Lab ) LAPT 1% กลูโคส (
D / เอ็นเทโรค็อกคัสกลุ่ม Streptococcus , Staphylococcus spp . , Bacillus
spp . และยีสต์ / เชื้อราผิดเพี้ยน )บทความ / บล็อก : 1% กลูโคส 1%
แล็กโตส ( Bifidobacterium spp . ) หรือสมองหัวใจฉีด ( BHI )
( Pseudomonas spp . ) ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง เซลล์ที่เก็บรวบรวมโดยปั่น
ที่ 3000g เป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 C คือ resuspended ในคุณนาย
ซุป 20% ( Vol / Vol ) กลีเซอรอลและเก็บไว้ที่ - 20 C .
สื่อสังคมทั้งหมดได้จากบริทตาเนีย ( อาร์เจนตินา )
ยกเว้นนาง และ บา ซึ่งถูกซื้อจากเมอร์ค ( เยอรมนี )
และ จาก difco BHI ( USA ) .
2.3 การระบุคุณสมบัติบางส่วนของสมาชิกของชนพื้นเมือง

แบคทีเรียไมโครไบโ ้าตัวโดยใช้ลักษณะทางสัณฐานวิทยาและลักษณะทางฟีโนไทป์โดยใช้มาตรฐาน

) สำหรับกลุ่มที่แตกต่างกันของจุลินทรีย์ : กรัมคราบ ; Catalase ,
ที่มีกิจกรรมและการเปลี่ยนแปลง , โคกูเลส ; ไนเตรท ; การผลิตอินโดล
; การใช้ซิเตรตการเคลื่อนย้าย , อาร์ hypurate
, , แป้งและเคซีนไฮโดร ; และ Bacitracin โนโวไบโอซินกลุ่ม
การเจริญเติบโตในซิตริไมด์ ; การเจริญเติบโตในไตรมาสที่ 1 และ 7 % ( w /
. ) เกลือ , เช่นเดียวกับที่ระดับพีเอชและอุณหภูมิ ( 4 , 42 , 50 และ 60 องศาเซลเซียส ) และน้ำตาล
ศึกษาการหมัก รูปแบบ การใช้กลูโคเนต
, การผลิตก๊าซในระดับปานกลางและ Voges –
กิบสันproskauer ปฏิกิริยาถูกใช้เพื่อตรวจสอบโฮโม - และ -
วิศวกรรมเคมี อื่น ลักษณะของสายพันธุ์ ( Holt et al . , 1994 ;
เมอร์เรย์ et al . , 2003 ) .
2.4 . การคัดเลือกโปรไบโอติก
ลักษณะเครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . สายพันธุ์แบคทีเรียและสภาพวัฒนธรรม
เลือก 136 สายพันธุ์เพื่อประเมิน
คุณสมบัติประโยชน์ได้ปฏิบัติตามเกณฑ์ต่อไปนี้ : (
) อาณานิคมที่เติบโตในสื่อเฉพาะสำหรับห้องปฏิบัติการ ( นาง m17 , ปอนด์ และ บี ) และพบท่อนไม้หรือเชื้อ
สัณฐานวิทยา แกรมบวก และสามารถย้อม
ลบกิจกรรม ( ข ) ที่แยกได้จากบาขนาดกลางที่พบ
ร็อด สัณฐานวิทยา แกรมบวก และสามารถติดกิจกรรมบวก
( C ) ที่แยกได้จาก RC