To determine Cosenza mutation, geno

To determine Cosenza mutation, genomic DNA was amplified by PCR using Cos F and Cos R primers (Bioneer Co, Korea). PCR reaction was performed in a 50-µl volume. For this purpose, 5µl buffer, 3µl Mgcl2, 0.5µl dNTPs, 1µl of each Cos F 5'-GCAGCCAGTGGGATCAGCAAG-3' and Cos R 5'-GGCAAGGAGGGTGGCCGTGG-3' primers, and 0.3µl of 5-unit Taq (Gene Fanavaran Co.) were added to 1µl of patient′s DNA. Amplification of this region of G6PD gene was performed using the thermal cycler (Techne/Techgene, England). For this purpose, DNA was first subjected to one round at 94 °C for 1 min. It then underwent 38 rounds at 94, 66, and 72 degree centigrade respectively, each for 1 min. In the end, DNA was subjected to one round of final extension at at 72° C for 4 min. After this step, PCR products were electerophoresed on 1.5% agarose gel; the appearance of a 548-nucleotide band was indicative of correct DNA replication.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจสอบการกลายพันธุ์ Cosenza, genomic DNA ถูกขยาย โดย PCR ใช้ Cos F และ Cos R ไพรเมอร์ (Bioneer Co เกาหลี) ทำปฏิกิริยา PCR ในปริมาณ 50 µl สำหรับวัตถุประสงค์นี้ 5µl บัฟเฟอร์ 3µl Mgcl2, 0.5µl dNTPs, 1µl ละ 5 F Cos' - GCAGCCAGTGGGATCAGCAAG - 3 และ Cos R 5' ไพรเมอร์ - GGCAAGGAGGGTGGCCGTGG - 3 และ 0.3µl ของ Taq 5 หน่วย (ยีน Fanavaran Co.) ได้เพิ่ม 1µl patient′s ดีเอ็นเอ ขยายของยีน G6PD ที่ดำเนินการโดยใช้ความร้อน cycler (Techne/Techgene อังกฤษ) สำหรับวัตถุประสงค์นี้ ดีเอ็นเอถูกแรกภายใต้หนึ่งรอบที่ 94 องศาเซลเซียสใน 1 นาที มันแล้วแต่ละรอบ 38 ที่ 94, 66, 72 องศาองศาเซลเซียสตามลำดับ 1 นาทีละกัน ในสุด ดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้หนึ่งรอบต่ออายุสุดท้ายที่ที่ 72° C ใน 4 นาที หลังจากนี้ขั้นตอน ผลิตภัณฑ์ PCR มี electerophoresed บน 1.5% agarose เจล ลักษณะของวง 548-นิวคลีโอไทด์ถูกส่อจำลองดีเอ็นเอที่ถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบการกลายพันธุ์เซนซา, ดีเอ็นเอถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้คอส F และคอสไพรเมอร์ R (Bioneer Co, เกาหลี) ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการในปริมาณ 50 ไมโครลิตร เพื่อจุดประสงค์นี้บัฟเฟอร์5μl, 3μl MgCl2, dNTPs 0.5μl, 1μlของแต่ละคอส F 5'-GCAGCCAGTGGGATCAGCAAG-3 และคอส R 5'-GGCAAGGAGGGTGGCCGTGG-3 'ไพรเมอร์และ0.3μlของ Taq 5 หน่วย (ยีน Fanavaran ร่วม .) ที่ถูกเพิ่มเข้า1μlดีเอ็นเอของผู้ป่วย การขยายของภาคเหนือของยีน G6PD นี้ได้รับการดำเนินการโดยใช้ความร้อน Cycler (Techne / Techgene อังกฤษ) เพื่อจุดประสงค์นี้ดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้เป็นหนึ่งในครั้งแรกรอบ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที แล้วก็เปลี่ยนไป 38 รอบที่ 94, 66 และ 72 องศาเซลเซียสตามลำดับในแต่ละเวลา 1 นาที ในท้ายที่สุดดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้เป็นหนึ่งในรอบสุดท้ายของการขยายที่ที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาที หลังจากขั้นตอนนี้ผลิตภัณฑ์ PCR ถูก electerophoresed 1.5% agarose เจล; ลักษณะของวง 548-เบื่อหน่ายเป็นตัวบ่งชี้ของการจำลองแบบดีเอ็นเอที่ถูกต้อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อตรวจสอบการกลายพันธุ์ดีเอ็นเอโคเซนซา , ถูกขยายโดยวิธี PCR โดยใช้ primers คอสคอส F และ R ( bioneer Co , เกาหลี ) ปฏิกิริยา PCR แสดงใน 50 เล่ม ผมµ . เพื่อวัตถุประสงค์นี้ , 5 µชั้นบัฟเฟอร์ 3 µ L ชุด 0.5 µผม dntps 1 µ L ของแต่ละคอส F 5 ' - gcagccagtgggatcagcaag-3 ' cos R 5 ' - ggcaaggagggtggccgtgg-3 ' ไพรเมอร์ , และ 0.3 µ l 5-unit แท็ค ( ยีน fanavaran Co . ) เพิ่ม 1 µล. ดูแลผู้ป่วยด้วยดีเอ็นเอ .การขยายของเขตของยีน G6PD นี้ถูกดำเนินการโดยใช้วงจรความร้อน ( techne / Techgene , อังกฤษ ) สำหรับวัตถุประสงค์นี้ ดีเอ็นเอ เป็นครั้งแรกภายใต้หนึ่งรอบที่ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที แล้วถึง 38 นัดที่ 94 , 66 , และ 72 องศาเซนติเกรด ตามลำดับ แต่ละ 1 นาทีท้ายที่สุด ดีเอ็นเอภายใต้หนึ่งรอบของการสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 4 นาที หลังจากขั้นตอนนี้ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูก electerophoresed บน 1.5 % เจล ; ลักษณะของนิวคลีโอไทด์เป็นวง แต่แสดงให้เห็นถึงการถ่ายแบบดีเอ็นเอที่ถูกต้อง