To perform TEM, samples were frozen

To perform TEM, samples were frozen using a high pressure
freezer (Leica EMPACT2) at pressure 2000–2050 bar. Freeze substitution
was performed in anhydrous acetone (containing 1% OsO4
and 0.1% uranyl acetate) using a Leica EM AFS2 (automatic freeze
substitution). The samples were kept at 85 C for 3 days, and then
at 60, 20 and 0 C for one day at each temperature, and then
raised to room temperature. The Spurr’s resin was used for infiltration
and embedding. The embedded samples were cut to make
ultrathin sections at 70–90 nm using a Reichert Ultracut S or Leica
EM UC6 (Leica, Vienna, Austria), and the sections were collected
using 100 mesh copper grids. The sections were then stained with
5% uranyl acetate in 50% methanol for 10 min and 0.4% lead citrate
for 4 min. Sections were observed using a Philips CM 100 Transmission
Electron Microscope at 80 kV and the images were recorded
with Gatan Orius CCD camera. SEM was conducted with a
chemical fixation method. The samples were fixed in 2.5% glutaraldehyde
and 4% paraformaldehyde in 0.067 M sodium phosphate
buffer, pH 7.0 at room temperature for 4 h. After 320 min buffer
rinses, the samples were postfixed in 1% OsO4 in the same buffer
for 4 h at room temperature and then rinsed in three 20 min
washes with fresh buffer. Samples were dehydrated in an ethanol
series. Critical point drying was done with a Hitachi HCP-2 critical
point dryer. After coating (with Hitachi E-1010 ion sputter), a FEI
Quanta 200 scanning electron microscope at 20 kV was used for
recording images.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยการดำเนิน ตัวอย่างถูกแช่แข็งโดยใช้ความดันสูงตู้แช่แข็ง (ไล EMPACT2) ที่แรงดัน 2000-2050 ตรึงแทนงานในอะซิโตนได (1% OsO4 ประกอบด้วยและ 0.1% uranyl acetate) ใช้ AFS2 EM ไลก้า (หยุดอัตโนมัติแทน) ตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ที่ 85 C วัน 3 แล้วที่ 60, 20 0 C ในหนึ่งวันในแต่ละอุณหภูมิ และขึ้นกับอุณหภูมิห้อง ยางของ Spurr ถูกใช้สำหรับการแทรกซึมและฝัง ตัวอย่างฝังตัวถูกตัดให้ส่วน ultrathin ที่ 70 – 90 nm ใช้ Reichert Ultracut S หรือไลEM UC6 (ไล เวียนนา ออสเตรีย), และส่วนถูกเก็บรวบรวมใช้กริดตาข่ายทองแดง 100 ส่วนมีสีด้วยแล้วacetate uranyl 5% ใน 50% เมทานอล 10 นาทีและ 0.4% นำซิเตรตสำหรับ 4 นาที ส่วนนายสุภัคใช้ส่ง 100 CM ฟิลิปส์กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนที่ 80 kV และภาพถูกบันทึกไว้กล้อง Gatan Orius CCD SEM ได้ดำเนินการด้วยการวิธีเคมีเบี ตัวอย่างถูกแก้ไขใน 2.5% glutaraldehydeparaformaldehyde 4% ใน 0.067 M โซเดียมฟอสเฟตและบัฟเฟอร์ pH 7.0 อุณหภูมิห้องสำหรับ 4 h หลังจากบัฟเฟอร์ 320 นาทีมีตัวอย่าง rinses, postfixed % 1 OsO4 ในบัฟเฟอร์ที่เดียวกันสำหรับ h 4 ที่อุณหภูมิห้องแล้ว rinsed ใน 3 20 นาทีwashes กับบัฟเฟอร์สด ตัวอย่างที่อบแห้งในตัวเอทานอลชุด จุดสำคัญแห้งทำกับฮิตาชิ HCP-2 สำคัญชี้เป่า หลังจากเคลือบกับฮิตาชิอี-1010 ไอออน sputter), เฟยเป็นกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนการสแกน quanta 200 ที่ 20 kV ที่ใช้สำหรับบันทึกภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อดำเนินการ TEM
ตัวอย่างถูกแช่แข็งโดยใช้ความดันสูงแช่แข็ง(Leica EMPACT2) ที่ความดัน 2000-2050 บาร์ ทดแทนตรึงได้ดำเนินการในอะซีโตนปราศจาก (ที่มี OsO4 1% และอะซิเตท uranyl 0.1%) โดยใช้ EM Leica AFS2 (แช่แข็งอัตโนมัติทดแทน) ตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 วันแล้วที่? 60? 20 และ 0 องศาเซลเซียสเป็นเวลาหนึ่งวันที่อุณหภูมิในแต่ละครั้งและจากนั้นยกที่อุณหภูมิห้อง เรซินของ Spurr ที่ใช้สำหรับการแทรกซึมและการฝัง กลุ่มตัวอย่างที่ฝังตัวถูกตัดเพื่อให้ส่วนที่บางเฉียบที่ 70-90 นาโนเมตรโดยใช้แชร์ Ultracut S หรือ Leica EM UC6 (Leica เวียนนาประเทศออสเตรีย) และส่วนที่ถูกเก็บรวบรวมใช้ 100 กริดทองแดงตาข่าย ส่วนที่มีการย้อมแล้วกับ5% uranyl acetate ในเมทานอล 50% เป็นเวลา 10 นาทีและนำซิเตรต 0.4% เป็นเวลา 4 นาที ส่วนถูกตั้งข้อสังเกตการใช้ฟิลิปส์ CM 100 ส่งกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนที่80 กิโลโวลต์และภาพที่ถูกบันทึกไว้ด้วยGatan Orius กล้อง CCD SEM ได้ดำเนินการด้วยวิธีการตรึงสารเคมี กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการแก้ไขใน glutaraldehyde 2.5% และ 4% ใน paraformaldehyde 0.067 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์pH 7.0 ที่อุณหภูมิห้องนาน 4 ชั่วโมง หลังจาก 320 นาทีบัฟเฟอร์ล้างที่ตัวอย่างหลังค่าเงินใน1% OsO4 ในบัฟเฟอร์เดียวกัน4 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องและล้างแล้วในสาม 20 นาทีล้างด้วยบัฟเฟอร์สด ตัวอย่างแห้งในเอทานอลซีรีส์ การอบแห้งจุดสำคัญได้ทำกับ บริษัท ฮิตาชิ HCP-2 ที่สำคัญเครื่องเป่าจุด หลังจากเคลือบ (กับพ่นไอออนฮิตาชิ E-1010) ซึ่งเป็นเฟควอนตั้ม200 สแกนกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนที่ 20 กิโลโวลต์ที่ใช้ในการบันทึกภาพ