2.4. Analytical procedures2.4.1. De

2.4. Analytical procedures

2.4.1. Determination of gas composition

The gas blends of O2/CO2 were implemented on-board the trawler using a gas mixer (MAP Mix 9000, PBI-Dansensor A/S, Denmark). To determine the gas composition of samples under MAP shortly after arrival at laboratory and at the 12th month of storage, the food package analyser (Series 1400, Servomex Ltd, Crowborough, East Sussex TN6 3FB, UK) was employed.

2.4.2. Determinations of proximate composition, pH, total volatile basic-nitrogen (TVB-N), and thiobarbituric acid (TBA)

Quantitative numbers of GRS samples homogenized using Waring Blender (Model BB90E, Waring Products, New Hartford, CT, USA) were used to assess the following chemical parameters: (a) Proximate composition represented by total carbohydrates, as well as water, ash, fat and protein contents (measured in g/100 g) were determined before packaging/storage using method described by AOAC (2011); (b) Using a digital pH metre (WTW GmbH & Co. KG, Weilheim, Germany) the pH was determined; (c) By distillation and using the method described by Billon, Ollieuz, and Tao (1979), the total volatile basic nitrogen (TVB-N) (measured in mg/100 g tissue) was determined; and (d) using the method described by Tarladgis, Watts, and Younathan (1960), the thiobarbituric acid (TBA) (measured in mg of malonaldehyde (MDA)/kg of tissue/sample) was also determined.

2.4.3. Assessment of melanosis

A trained panel of four experienced judges assessed the melanosis of the treated-GRS samples. After general inspection of packaged samples, the shrimp were removed from each pack, thawed at ambient temperature and immediately presented to all panellists at the same time. Melanosis assessment involved a five-point descriptive scale where 0 indicated either natural or absence of discolouration, 1 indicated yellowing whereas 2, 3, and 4 respectively indicated slight, moderate and intense black spotting (Bono et al., 2012).

2.4.4. Determination of free amino acid (FAA)

The FAAs was analysed, from extraction to chromatography, according to the method described by Antoine, Wei, Littell, and Marshall (1999) and FAA units expressed in mg/100 g. Ten grams of shrimp and 40 mL of extracting solvent (75% methanol in distilled deionized water) were homogenated, transferred to a 100 mL volumetric flask and stored for 60 min (or overnight) at 4 °C. The contents of the flask were transferred to a 50 mL centrifuge tube and centrifuged at 15,000 rpm for 40 min at 4 °C. The supernatant was filtered on PTFE 0.2 μm filter membrane (Gelman Sciences), before derivatization. By way of o-phthaldialdehyde (OPA) pre-column derivatization, the OPA Thiol Reagent (OPT) was prepared 24 h prior to use by dissolving 27 mg of o-phthaldialdehyde in 500 μL of absolute alcohol. Then, 5 mL of 0.1 M sodium tetraborate (Na2B4O7, 10H2O) (pH 9.5) was added, followed by 50 μL of mercaptoethanol, then, mixed and stored in the dark. The amino acid standards stock solution was prepared by dissolving the equivalent of 2500 nmol of each amino acid in 0.05 M NaH2PO4 buffer (pH 5.5) and then diluted for calibration curve. Further, to 100 μL of amino acid standard or 189 diluted sample supernatant at High Pressure Liquid Chromatography (HPLC), 400 μL of OPT was added, then the sample was manually injected onto the column of HPLC system. Mobile phase A was made up of 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 5.5), methanol, and THF (80: 19:1). Mobile phase B was made up of 80% methanol and 20% of the 0.05 M NaH2PO4 buffer. The pH of phosphate buffer was adjusted to 5.5. The mobile phases were filtered under 0.2 μm filter membranes (Gelman Sciences, Ann Arbor, MI) and degassed by vacuum for 5 min. The HPLC column was an Ultrasphere ODS 5 μm particle size, 4.6 mm × 25 cm (Beckman Instruments, Inc., Fullerton, CA). The gradient elution was generated using a Elite LaChrom equipped with a L-7100 pump (LaChrom, Hitachi), oven L-7350 (LaChrom, Merck), programmable fluorescence detector with excitation monochromator setting of 330 nm as well as an emission cutoff filter of 418 nm. The chromatographic data were processed using software EZChrom Elite (Agilent Tech., Santa Clara, CA 95051, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . ขั้นตอนการวิเคราะห์เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . การกำหนดองค์ประกอบของก๊าซก๊าซผสมระหว่างออกซิเจน / CO2 ถูกนำมาใช้บนเรืออวนลากที่ใช้ก๊าซผสม ( แผนที่ผสม 9000 , pbi dansensor / S , เดนมาร์ก ) เพื่อศึกษาองค์ประกอบของตัวอย่างก๊าซภายใต้แผนที่ไม่นานหลังจากที่มาถึงห้องปฏิบัติการและในเดือน 12 ของกระเป๋า , เครื่องบรรจุภัณฑ์อาหาร ( ชุด 1400 servomex Ltd crowborough East Sussex tn6 3fb , UK ) ที่ใช้2.4.2 . รวมทั้งวิเคราะห์องค์ประกอบด่างที่ระเหยได้ทั้งหมด ( tvb-n พื้นฐานไนโตรเจน ) และเท่ากับ acid ( TBA )ตัวเลขของปริมาณตัวอย่าง GRS บดโดยใช้เครื่องปั่น ( แบบ bb90e waring สินค้า , ผลิตภัณฑ์ใหม่ , Hartford , CT , สหรัฐอเมริกา ) ใช้เพื่อประเมินพารามิเตอร์ต่อไปนี้ : ( เคมี ) วิเคราะห์องค์ประกอบที่แสดงโดยคาร์โบไฮเดรตทั้งหมดเช่นเดียวกับน้ำ เถ้า ไขมัน และโปรตีน ( วัดในกรัม / 100 กรัม ) ได้รับการพิจารณาก่อน กระเป๋าบรรจุภัณฑ์ / การใช้วิธีอธิบายด้วยโปรตีน ( 2011 ) ; ( b ) โดยใช้ pH เมตรดิจิตอล ( wtw GmbH & Co . KG , Weilheim , เยอรมนี ) pH ตั้งใจ ; ( C ) โดยการกลั่นและการใช้วิธีอธิบาย โดยทาง ollieuz , และเต่า ( 1979 ) , ที่ระเหยได้ทั้งหมด ( tvb-n พื้นฐานไนโตรเจน ) ( วัดในเนื้อเยื่อมิลลิกรัม / 100 กรัม ) ได้กำหนด และ ( d ) ใช้วิธีอธิบายโดย tarladgis , วัต และ younathan ( 1960 ) , thiobarbitu ริค แอซิด ( TBA ) ( วัดในมิลลิกรัมมาโลนัลดีไฮด์ ( MDA ) / กก. เนื้อเยื่อ / ตัวอย่าง ) ได้แก่2.4.3 . การประเมินของเมลาโนซิสแผงของผู้พิพากษาที่มีประสบการณ์และผ่านการฝึกอบรม 4 เมลาโนซิสในการรักษา GRS ตัวอย่าง หลังจากการตรวจสอบทั่วไปของแพคเกจตัวอย่างกุ้งที่ถูกถอดออกจากแต่ละแพ็คละลายที่อุณหภูมิห้องและทันทีนำเสนอทั้งหมด Panellists ในเวลาเดียวกัน การประเมินเมลาโนซิส เกี่ยวข้อง กับ ห้าจุดระดับที่ 0 ( บรรยายทั้งธรรมชาติหรือขาดการเปลี่ยนสี ( เหลือง ) 1 , 2 , 3 และ 4 ตามลำดับ พบน้อย ปานกลาง และรุนแรงสีดำเฉพาะ ( โบโน่ et al . , 2012 )2.4.4 . การหาปริมาณกรดอะมิโนอิสระ ( FAA )และ FAAS วิเคราะห์จากการสกัดโครมาโทกราฟี ตามวิธีการที่อธิบายโดย แอนโทน เว่ย ลิตเติล , และมาร์แชล ( 1999 ) และหน่วยที่ 4 มิลลิกรัม / 100 กรัมและ 10 กรัมของกุ้งและ 40 มิลลิลิตรการสกัดตัวทำละลาย ( เมทานอล 75% สารคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำ ) homogenated โอนให้ 100 มล. ปริมาตร ขวด และเก็บไว้ได้นาน 60 นาที ( หรือคืน ) ที่อุณหภูมิ 4 องศา เนื้อหาของขวดที่ถูกโอนไปยัง 50 ml centrifuge หลอดไฟฟ้า 12 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 40 นาทีที่ 4 ° C สูงคือกรองบนμไส้กรองเมมเบรน PTFE 0.2 M ( เกลแมนวิทยาศาสตร์ ) ก่อนกับ . โดยวิธีการ o-phthaldialdehyde ( OPA ) กับ pre คอลัมน์ โอภา thiol Reagent ( เลือก ) พร้อม 24 ชั่วโมง ก่อนใช้ โดยละลาย 27 มิลลิกรัม o-phthaldialdehyde 500 μลิตรของแอลกอฮอล์สัมบูรณ์ จากนั้น 5 ml ของ 0.1 โมลาร์โซเดียมเตตราบอเรต ( na2b4o7 , , ) ( pH 9.5 ) ก็เพิ่มตามμ mercaptoethanol 50 ลิตร แล้วผสมและเก็บไว้ในที่มืด กรดอะมิโนมาตรฐานโซลูชั่นหุ้นถูกเตรียมโดยละลายเท่ากับ 2500 ซึ่งแต่ละกรดอะมิโนใน 0.05 M nah2po4 บัฟเฟอร์ pH 5.5 ) และเจือจางสำหรับการปรับเส้นโค้ง เพิ่มเติม μ 100 ลิตรมาตรฐานกรดอะมิโนหรือ 189 เจือจางตัวอย่างที่นำวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวที่ความดันสูง ( HPLC ) , 400 μผมของเลือกถูกเพิ่มจำนวนด้วยตนเอง แล้วฉีดลงบนคอลัมน์ระบบ HPLC . เฟสเคลื่อนที่เป็นขึ้นของ 0.05 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 5.5 ) , เมทานอล และเตตระไฮโดรฟูแรน ( 80 : 19 : 1 ) มือถือเฟส B ขึ้นของเมธานอล 80% และ 20% ของ 0.05 M nah2po4 บัฟเฟอร์ ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ปรับ pH 5.5 . ระยะเคลื่อนที่เป็นกรองใต้กรองเมมเบรนμ 0.2 M ( เกลแมนวิทยาศาสตร์ , Ann Arbor , MI ) และ degassed สุญญากาศสำหรับ 5 นาที HPLC คอลัมน์เป็น ultrasphere ODS 5 μ M ขนาด 4.6 มม. × 25 ซม. ( Beckman เครื่องมือ , อิงค์ , Fullerton , CA ) การไล่ระดับสี ( ถูกสร้างขึ้น โดยใช้ยอด lachrom พร้อมกับปั๊ม l-7100 ( lachrom , Hitachi ) , เตาอบ l-7350 ( lachrom เมอร์ค ) , เครื่องตรวจจับโปรแกรมที่มีการตั้งค่าระบบโมโนโครเมเตอร์ 330 nm เช่นเดียวกับสารมลพิษตัวกรองของ 405 nm . ข้อมูลที่ถูกประมวลผล และใช้ยอด ezchrom ซอฟต์แวร์เทคโนโลยี Agilent , 95051 ซานตาคลารา , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา )