1. IntroductionIn the modern swine

1. Introduction
In the modern swine industry, mortality of piglets in weaning stage accounts for about 70% of the whole breeding period (Zhen et al., 2006). The traditional way to reduce the loss of piglets is to include high dose of antibiotics in feed, however the overuse of antibiotics has caused drug resistance, environmental pollution, residues in human food and many other problems, thus alternatives to antibiotics are desperately needed.

Casein glycomacropeptide (CGMP), derived from κ-casein, is a glycosylated phosphate peptide. During the process of cheese making, chymosin hydrolyzes phenylalanine–methionine bond of κ-casein into an insoluble para-κ-casein (residues 1–105) and a soluble polypeptide CGMP (residues 106–169) (Silva-Hernandez et al., 2002). Para-κ-casein is left in the curd, while CGMP is separated from whey and becomes by-products. It has been reported that many bioactive peptides with high nutritional values are located in whey protein such as immunoglobulins, lactoferrin and β-globulin; however CGMP is probably the least known cheese whey proteins despite its content in total whey protein being 15–20% (Saito et al., 1991).

The most important functional group of CGMP is polysaccharide sialic acid (SA) (N-acetylneuraminic acid). It plays an important role in defense mechanism in vivo. SA is widely distributed in the key position of sugar chains, secreted glycoproteins and glycolipids ( Schauer, 2004), and from the rule of the evolution of species indicates that higher species have abundant SA. Human breast milk contains high concentration of SA, which is closely related to infants' development and immune system maturation under infection conditions ( Wang et al., 2001). More than 75% of the SA in milk is detected in the CGMP, indicating that CGMP's physiological function is very important.

Studies have shown that CGMP can neutralize enterotoxin (Oh et al., 2000), inhibit virus or bacterial adhesion to cells (Bruck et al., 2006), inhibit gastrointestinal secretions (Brody, 2000), promote proliferation of beneficial bacteria (Janer et al., 2004) and exert immune regulation function (Otani and Hata, 1995). With these advantages, CGMP attracted widespread attention in the fields of functional food research, medicine, and health care. However, there are few reports about its potential as a feed additive or substitution of antibiotics.

In this study, we used the enterotoxigenic Escherichia coli K88 (E. coli K88) challenged weaned piglet model ( Gao et al., 2013) to investigate the effects of CGMP on protecting piglets against post weaning diarrhea, and to lay experimental foundation for the potential application of CGMP as feed additives.

2. Materials and methods
The animal protocols for the present study were according to the guidelines stated in the guide for the care and use of agricultural animals in research and teaching and were approved by the animal care committee of Zhejiang University.

2.1. Casein glycomacropeptide source

This study used a commercial product (LACPRODAN® CGMP-10, Arla Foods) as a source of CGMP with the following declared composition: protein content 82–85%, CGMP content (of protein) 80 ± 5% and SA content approximated to 4.2%.

2.2. Bacterial strains

The bacterial strain used in this study (Enterotoxigenic E. coli K88 C83907) was purchased from the China Institute of Veterinary Drugs Control (Beijing, China) and preserved by the National Engineering Laboratory of Bio-feed Safety and Pollution Prevention (Hangzhou, China). The challenge strain harbored the genes for enterotoxin STb, LT and the genes for fimbria F4ac detected as described by Gao (2014).

2.3. Animals and experimental design

A total of 18 crossbred (Duroc × Landrace × Yorkshire) weaning piglets (weaned on d 23, initial body weight 7.42 ± 0.19 kg) were randomly assigned to 3 experimental groups (6 pigs per treatment, half males and half females): control group, K88 challenged group and CGMP treated group. Control group and K88 challenged group were fed a corn–soybean basal diet, and CGMP treated group was fed the basal diets supplemented with 1% CGMP. All piglets had ad libitum access to feed and water throughout the 12-day trial. All weaning pigs were fed the basal diet for 3 days as pretreatment. In days 8–10, 30 mL of 10% (w/v) NaCHO3 and 20% (w/v) sucrose solution was orally administered to all of the piglets, and 30 min later, 30 mL of LB broth containing 109 CFU/mL of E. coli K88 was inoculated to the K88 challenged group and CGMP treated group, while 30 mL of sterile LB broth was inoculated to the control group. The average daily gain (ADG), average daily feed intake (ADFI), and feed/gain (F/G) of each pig were monitored throughout the experimental period. The fecal scores were graded by Castillo et al. (2008) (0 = normally shaped feces, 1 = shapeless feces, 2 = soft feces, and 3 = thin, liquid feces).

The corn–soybean meal basal diet was formulated to meet the nutrient requirements according to NRC (2012). (Table 1).

Table 1.
Composition and nutrient levels of basal diets (days 1–12 of trial).
Ingredients Content, % Calculated composition Content, %
Corn 23.00 Digestible energy, MJ/kg 3.35
Extruded corn 20.00 Crude protein 19.01
Soybean meal 6.50 Crude fat 4.99
Fermented soybean meal 6.50 Crude fiber 1.77
Oats meal 15.00 Calcium 1.06
Fish meal 6.00 Available phosphorus 0.59
Whey permeate 15.00 SID-lysine 1.26
Soybean oil 1.00 SID-methionine 0.46
Limestone 1.20 SID-threonine 0.79
Calcium bicarbonate 0.80 SID-tryptophan 0.27
Premix1 4.00
SID = standardized ileal digestible.

1
Provided per kilogram of diet: vitamin A 13,000 IU, vitamin D3 1,800 IU, vitamin E 60 mg, vitamin K1 3.0 mg, vitamin B1 2.0 mg, vitamin B2 6.0 mg, vitamin B6 10.0 mg, vitamin B12 0.02 mg, niacin 35.0 mg, calcium pantothenic 15.0 mg, biotin 0.12 mg, folic acid 1.0 mg; Fe 150.0 mg, Cu 120.0 mg, Zn 150.0 mg, Mn 45.0 mg, Se 0.30 mg, Co 1 mg, I 0.30 mg.

Table options
2.4. Sampling and processing

At the end of the experiment (day 13), blood samples were taken from the jugular vein and coagulated at room temperature for 60 min. Serum was separated by centrifugation (3,000 rpm, 10 min, 4 °C) and stored at −20 °C until biochemical analysis and ELISA. After blood sampling, all of the piglets were euthanized. The abdomen was immediately opened and intestinal contents of colon and cecum were collected for bacterial counts. Tissues from terminal ileum were removed and immediately frozen in liquid nitrogen. The samples were stored at −80 °C until analysis. Tissues from the jejunum were collected and fixed in 4% paraformaldehyde solution for analysis.

2.5. Biochemical determinations

Serum levels of pig major acute-phase protein (Pig-MAP), D-lactate and diamine oxidase (DAO) were determined using commercial ELISA kits purchased from Beijing Luyuan Byrd biological technology Co., Ltd. (Beijing, China), following the standard procedures described by the manufacturer. Serum levels of SA were measured using a commercial SA assay kit purchased from Nanjing Jiancheng Institute of Bioengineering (Jiangsu, China) according to the manufacturer's protocols.

Histological measurements of jejunum were analyzed according to H&E staining described by Moeser et al. (2012). Villus height and crypt depth were measured under a Leica microscope (DM3000; Leica, Wetzlar, Germany). A minimum of 10 villi from each pig were measured.

Intestinal segments were removed from distal ileum of each piglet, rinsed with 1 × PBS to remove excess blood, homogenized in 1 mL of 1 × PBS, and stored overnight at −20 °C. After 2 freeze–thaw cycles to break up the cell membranes, the homogenate was centrifuged at 5,000 × g for 5 min at 4 °C, and the supernatant was collected, aliquoted in a 1.5 mL tube, and stored at −20 °C until use ( Gao et al., 2013). The ileal protein amount was determined using BCA Protein Assay Kit (KEYGEN, Nanjing, China) following the manufacturer's procedures. The ileal secretory immunoglobulin A (SIgA) levels (pg/mL) were measured using a commercially available ELISA kit (Luyuan Byrd biological technology Co., Ltd., Beijing, China) according to the manufacturer's protocols. The final results were calculated in the form of mg SIgA per g protein.

The intestinal content samples were diluted in ten-fold serial dilutions. The 10 μL of each serial dilution was spread on bacteriological media to allow enumeration of specific bacterial types (Broom et al., 2006). E. coli was determined by growth on Eosin-Methylene Blue Agar (Hopebio, Qingdao, China), following incubation at 37 °C for 18–24 h in air.

2.6. Statistical analysis

All data are presented as means and SEM. The statistical analyses were performed in SPSS 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). The significance of the differences between all of the treatment groups was analyzed by one-way ANOVA and means separation using Duncan's significant difference test except for the data of fecal scores and E. coli counts of cecum and colon, which were analyzed by rank sum test. A significance level of 0.05 was used as default and each row with different small letter superscripts meant significant difference.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. บทนำในอุตสาหกรรมสุกรที่ทันสมัย การตายของทรูดในการ weaning ขั้นบัญชีประมาณ 70% ของรอบระยะเวลาเพาะพันธุ์ทั้งหมด (เจินและ al., 2006) วิธีการลดการสูญเสียของทรูดดั้งเดิมคือการ รวมปริมาณสูงของยาปฏิชีวนะในอาหาร ไร overuse ของยาปฏิชีวนะเกิดต้านทานยาเสพติด มลพิษทางสิ่งแวดล้อม ตกค้างในอาหารมนุษย์ และปัญหาอื่น ๆ อีกมากมาย จึง แทนยาปฏิชีวนะจำเป็นหมดGlycomacropeptide เคซีน (CGMP), มาκ-เคซีน เพปไทด์ glycosylated ฟอสเฟตได้ ในระหว่างขั้นตอนการทำชีส chymosin hydrolyzes บอนด์ phenylalanine-methionine ของκ-เคซีนในการละลาย para-κ-เคซีน (ตก 1-105) และ polypeptide ละลาย CGMP (ตก 106 – 169) (นานเดซ Silva et al., 2002) เคซีนκพาราที่เหลือในซีอิ้ว CGMP ถูกแยกออกจากเวย์ และกลายเป็น สินค้าพลอยได้ มีรายงานว่า เปปไทด์กรรมการกที่มาก ด้วยคุณค่าทางโภชนาการสูงอยู่ในเวย์โปรตีน immunoglobulins, lactoferrin และβ-กลอบูลิ น อย่างไรก็ตาม CGMP อาจเป็นโปรตีนจากนมชีสรู้จักอย่างน้อยแม้ มีเนื้อหาในโปรตีนเวย์รวมเป็น 15-20% (Saito et al., 1991)กลุ่ม functional สำคัญของ CGMP เป็นกรด sialic polysaccharide (SA) (N-acetylneuraminic กรด) มันมีบทบาทสำคัญในกลไกป้องกันในสัตว์ทดลอง สานำไปเผยแพร่ในฐานะคีย์โซ่น้ำตาล secreted glycoproteins และ glycolipids (Schauer, 2004), และจากกฎของวิวัฒนาการพันธุ์บ่งชี้ว่า ชนิดสูงมีอุดมสมบูรณ์สะอาด มนุษย์นมประกอบด้วยความเข้มข้นสูงของสา ซึ่งสัมพันธ์ใกล้ชิดกับทารกพัฒนาและระบบภูมิคุ้มกันแก่สภาวะติดเชื้อ (วังและ al., 2001) มากกว่า 75% ของ SA ในนมจะตรวจพบใน CGMP แสดงว่า ฟังก์ชันสรีรวิทยาของ CGMP เป็นสิ่งสำคัญมากการศึกษาได้แสดงว่า CGMP สามารถแก้ enterotoxin (Oh และ al., 2000), ยับยั้งไวรัสหรือแบคทีเรียยึดเกาะเซลล์ (Bruck และ al., 2006), ยับยั้งการหลั่งของระบบ (โบรดี 2000), ส่งเสริมการขยายตัวของแบคทีเรียที่เป็นประโยชน์ (Janer et al., 2004) และแรงฟังก์ชันควบคุมภูมิคุ้มกัน (โอและฮาตะ 1995) ด้วยข้อดีเหล่านี้ CGMP ดึงดูดความสนใจอย่างแพร่หลายในด้านของอาหารทำงานวิจัย แพทย์ และสุขภาพ อย่างไรก็ตาม มีรายงานน้อยเกี่ยวกับศักยภาพเป็นอาหารที่สามารถทดแทนยาปฏิชีวนะในการศึกษานี้ เราใช้ enterotoxigenic Escherichia coli K88 (E. coli K88) ลูกสุกรหย่านมถึงสนุก ๆ แบบ (เกา et al., 2013) เพื่อตรวจสอบผลกระทบของ CGMP ครองทรูดกับไปรษณีย์ weaning โรคท้องร่วง และวางรากฐานทดลองสำหรับโปรแกรมประยุกต์ที่เป็นไปได้ของ CGMP เป็นสารอาหาร2. วัสดุและวิธีการโพรโทคอลที่สัตว์การศึกษาปัจจุบันได้ตามแนวทางระบุไว้ในคำแนะนำสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์เกษตรในการวิจัยและการเรียนการสอน และได้รับการอนุมัติ โดยคณะกรรมการดูแลสัตว์มหาวิทยาลัยเจ้อเจียง2.1. เคซีน glycomacropeptide แหล่งที่มาการศึกษานี้ใช้เป็นผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์ (LACPRODAN ® CGMP-10, Arla อาหาร) เป็นแหล่งของ CGMP ด้วยตามประกาศองค์ประกอบ: โปรตีนเนื้อหา 82-85%, CGMP เนื้อหา (จากโปรตีน) 80 ± 5% และ SA เนื้อหาเลียนแบบเป็น 4.2% การ2.2. แบคทีเรียสายพันธุ์สายพันธุ์แบคทีเรียที่ใช้ในการศึกษานี้ (Enterotoxigenic E. coli K88 C83907) ซื้อจากจีนสถาบันของสัตวแพทย์ยาควบคุม (ปักกิ่ง จีน) และรักษาความปลอดภัยแห่งชาติปฏิบัติการวิศวกรรมชีวภาพอาหารและการป้องกันมลพิษ (หางโจว จีน) พันธุ์ท้าทาย harbored ยีน enterotoxin STb, LT และยีนของ fimbria F4ac ตรวจพบตามที่อธิบายไว้ โดยเกา (2014)2.3. สัตว์และออกแบบการทดลองจำนวน 18 ผลิตทรูด weaning (Duroc ××แม่ยอร์คเชียร์) (หย่านมถึงบน d 23 เริ่มต้นร่างกายน้ำหนัก 7.42 ± 0.19 กิโลกรัม) ถูกกำหนดแบบสุ่มกลุ่มทดลอง 3 (6 สุกร ต่อการรักษา ครึ่งชายครึ่งหญิง): กลุ่มควบคุม K88 ท้าทายกลุ่มและกลุ่ม CGMP ที่ถือว่า กลุ่มควบคุมและกลุ่มสนุก ๆ K88 ได้เลี้ยงอาหารโรคข้าวโพดถั่วเหลือง และกลุ่มบำบัด CGMP ถูกเลี้ยงอาหารโรคเสริม 1% CGMP ทั้งหมดทรูดมี ad libitum เข้าถึงอาหาร และน้ำตลอดทดลอง 12 วัน สุกรทั้งหมด weaning ได้เลี้ยงอาหารโรค 3 วันเป็น pretreatment ในวันที่ 8 – 10, 30 mL 10% (w/v) NaCHO3 และ 20% (w/v) ซูโครสโซลูชันถูกเนื้อหาจัดการทรูด และ 30 นาทีทั้งหมดในภายหลัง 30 mL ของซุปปอนด์ประกอบด้วย 109 CFU/mL ของ E. coli K88 ถูก inoculated การ K88 ที่ท้าทายกลุ่มและกลุ่มรับ CGMP ขณะ 30 mL ของซุปปอนด์ใส่ได้ inoculated การควบคุม ทุกวันเฉลี่ยกำไร (ADG), ทุกวันเฉลี่ยอาหารบริโภค (ADFI), และมีการตรวจสอบอาหาร/กำไร (F/G) ของหมูแต่ละตลอดระยะเวลาทดลอง คะแนน fecal ถูกแบ่งแยกโดย Castillo et al. (2008) (0 =ปกติรูปอุจจาระ 1 = shapeless อุจจาระ 2 =อุจจาระนุ่ม และ 3 =อุจจาระบาง ของเหลว)อาหารโรคอาหารข้าวโพดกากถั่วเหลืองที่ทำตรงกับความต้องการธาตุอาหารตาม NRC (2012) (ตาราง 1)ตารางที่ 1องค์ประกอบและสารอาหารระดับของโรคอาหาร (วันที่ 1-12 ของการทดลอง)ส่วนผสมเนื้อหา คำนวณองค์ประกอบเนื้อหา %ข้าวโพด 23.00 Digestible พลังงาน MJ/kg 3.35โปรตีนดิบข้าวโพด extruded 20.00 19.01ถั่วเหลืองไขมันดิบอาหาร 6.50 4.99ถั่วเหลืองหมักอาหาร 6.50 ดิบไฟเบอร์ 1.77ข้าวโอ๊ตมื้อ 15.00 แคลเซียม 1.06ปลาอาหาร 6.00 มีฟอสฟอรัสคือ 0.59เวย์ permeate SID 15.00-ไลซีน 1.26ถั่วเหลืองน้ำมัน 1.00 SID-methionine 0.46หินปูน 1.20 0.79 SID-ทรีโอนีนแคลเซียมไบคาร์บอเนต 0.80 SID-ทริปโตเฟน 0.27Premix1 4.00 SID =มาตรฐาน ileal digestible1ให้ต่อกิโลกรัมของอาหาร: มิลลิกรัมวิตามินอี 60 IU 13000 วิตามินดี 3 1800 IU วิตามินเอ วิตามิน K1 3.0 มิลลิกรัม วิตามินบี 1 2.0 มิลลิกรัม วิตามินบี 2 มิลลิกรัม 6.0, 10.0 มิลลิกรัม วิตามินบี 12 0.02 มิลลิกรัม ไนอาซินมิลลิกรัม 35.0 แคลเซียมแพนโทธีนิค 15.0 มิลลิกรัม ไบโอติน 0.12 มิลลิกรัม กรดโฟลิควิตามินบี 6 1.0 มก. Fe 150.0 มิลลิกรัม Cu 120.0 mg, Zn 150.0 มิลลิกรัม Mn 45.0 มิลลิกรัม Se 0.30 mg, Co 1 มิลลิกรัม ฉัน 0.30 มิลลิกรัมตัวเลือกตาราง2.4. การสุ่มตัวอย่าง และการประมวลผลเมื่อสิ้นสุดการทดลอง (วันที่ 13), เลือดตัวอย่างที่มาจากหลอดเลือดดำ jugular และ coagulated ที่อุณหภูมิห้องใน 60 นาทีเซรั่มถูกคั่น ด้วย centrifugation (3000 รอบต่อนาที 10 นาที 4 ° C) และเก็บไว้ที่ −20 ° C จนวิเคราะห์ชีวเคมีและ ELISA หลังจากเก็บตัวอย่างเลือด ทรูดทั้งหมดถูก euthanized สิ่งนั้น ทันทีเปิดช่องท้อง และลำไส้เนื้อหาคู่และ cecum ถูกเก็บรวบรวมการตรวจนับแบคทีเรีย เนื้อเยื่อจาก terminal ileum ถูกเอาออก และแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวทันที ตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C จนถึงการวิเคราะห์ เนื้อเยื่อจาก jejunum ถูกรวบรวม และถาวรในโซลูชั่น paraformaldehyde 4% สำหรับการวิเคราะห์2.5. ชีวเคมี determinationsระดับ serum ของหมูใหญ่ระยะเฉียบพลันโปรตีน (หมูแผนที่), D lactate และ diamine oxidase (ดาว) ได้กำหนดใช้พาณิชย์ ELISA ชุดซื้อจากปักกิ่ง Luyuan Byrd เทคโนโลยีชีวภาพ Co., Ltd. (ปักกิ่ง ประเทศจีน), ทำตามขั้นตอนมาตรฐานโดยผู้ผลิต ระดับ serum ของ SA ถูกวัดโดยใช้การค้า SA วิเคราะห์ชุดซื้อตามโปรโตคอลของผู้ผลิตจากจิง Jiancheng สถาบันของ Bioengineering (มณฑลเจียงซู จีน)มีวิเคราะห์ประเมินสรีรวิทยาของ jejunum ตาม H & E ย้อมสีอธิบายโดย Moeser et al. (2012) มีวัดความลึกความสูงและ crypt villus ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ไล (DM3000 ไลก้า Wetzlar เยอรมนี) มีวัดอย่างน้อย villi 10 จากหมูแต่ละส่วนลำไส้ออกจาก ileum กระดูกของลูกสุกรแต่ละ rinsed ด้วย 1 × PBS เอาเลือดส่วนเกิน homogenized เป็นกลุ่มใน 1 mL ของ PBS ที่ซื้อ 1 และเก็บค้างคืนที่ −20 องศาเซลเซียส หลังจากที่ 2 หยุด – thaw วงจรการสลายเยื่อหุ้มเซลล์ homogenate ถูก centrifuged ที่ 5000 × g ใน 5 นาทีที่ 4 ° C และ supernatant ถูกรวบรวม aliquoted ในหลอด 1.5 มิลลิลิตร และเก็บไว้ที่ −20 ° C จนถึงใช้ (เกา et al., 2013) ยอดโปรตีน ileal ถูกกำหนดใช้ BCA โปรตีน Assay Kit (KEYGEN นานกิง ประเทศจีน) ตามขั้นตอนของผู้ผลิต การ ileal secretory immunoglobulin ระดับ (SIgA) (pg/mL) ถูกวัดโดยใช้ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ ELISA ชุด (Luyuan Byrd ชีวภาพเทคโนโลยี Co., ltd ปักกิ่ง จีน) ตามโปรโตคอลของบริษัทผู้ผลิต ผลสุดท้ายถูกคำนวณในรูปของมิลลิกรัม SIgA ต่อกรัมโปรตีนตัวอย่างเนื้อหาลำไส้ถูกทำให้เจือจางใน dilutions ten-fold ประจำ ΜL 10 ของเจือจางแต่ละล็อตได้แพร่กระจายไปบนสื่อ bacteriological เพื่ออนุญาตให้การแจงนับของชนิดแบคทีเรียเฉพาะ (ไม้กวาดและ al., 2006) E. coli ถูกกำหนด โดยเติบโตในเมทิลีนได Eosin บลู Agar (Hopebio ชิงเต่า จีน), ต่อไปนี้บ่มที่ 37 ° C สำหรับ 18-24 h ในอากาศ2.6. สถิติวิเคราะห์มีแสดงข้อมูลทั้งหมดเป็นวิธีและ SEM. มีดำเนินการวิเคราะห์ทางสถิติในโปรแกรม 16.0 (โปรแกรม Inc. ชิคาโก IL) มีวิเคราะห์ความสำคัญของความแตกต่างระหว่างกลุ่มรักษา โดยทางเดียวการวิเคราะห์ความแปรปรวนและวิธีแยกโดยใช้การทดสอบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญของดันแคนยกเว้นข้อมูลของ fecal คะแนนและจำนวน E. coli cecum และลำไส้ใหญ่ ที่ถูกวิเคราะห์ โดยการทดสอบผลอันดับ ระดับนัยสำคัญ 0.05 ถูกใช้เป็นค่าเริ่มต้น และแต่ละแถว มีตัวยกตัวอักษรขนาดเล็กหมายถึง ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1.
บทนำในอุตสาหกรรมการเลี้ยงสุกรที่ทันสมัย, การตายของลูกสุกรหย่านมในบัญชีขั้นตอนประมาณ 70% ของระยะเวลาการเพาะพันธุ์ทั้ง (Zhen et al., 2006) วิธีแบบดั้งเดิมในการลดการสูญเสียลูกสุกรคือการรวมปริมาณสูงของยาปฏิชีวนะในอาหาร แต่มากเกินไปของยาปฏิชีวนะได้ก่อให้เกิดการดื้อยามลภาวะต่อสิ่งแวดล้อมตกค้างในอาหารของมนุษย์และปัญหาอื่น ๆ ทางเลือกที่ทำให้การใช้ยาปฏิชีวนะที่มีความจำเป็นอย่างยิ่งที่. เคซีน glycomacropeptide (CGMP) ที่ได้มาจากκ-เคซีนเป็นเปปไทด์ฟอสเฟต glycosylated ในระหว่างขั้นตอนของการทำชีส chymosin ไฮโดรไลซ์พันธบัตร phenylalanine-methionine ของκ-เคซีนเป็นที่ไม่ละลายน้ำพาราκ-เคซีน (ตกค้าง 1-105) และเพปไทด์ที่ละลายใน CGMP (ตกค้าง 106-169) (ซิลวา-Hernandez et al., 2002) พาราκ-เคซีนที่เหลืออยู่ในนมเปรี้ยวในขณะที่ CGMP ถูกแยกออกจากเวย์และจะกลายเป็นผลพลอยได้ มันได้รับรายงานว่าเปปไทด์ที่ออกฤทธิ์ทางชีวภาพจำนวนมากที่มีคุณค่าทางโภชนาการสูงตั้งอยู่ในเวย์โปรตีนเช่นภูมิคุ้มกันบกพร่อง, lactoferrin และβ-โกลบูลิ; แต่ CGMP น่าจะเป็นโปรตีนชีสที่รู้จักกันอย่างน้อยเวย์แม้จะมีเนื้อหาในเวย์โปรตีนรวมเป็น 15-20% (Saito et al., 1991). กลุ่มการทำงานที่สำคัญที่สุดของ CGMP เป็นกรด sialic polysaccharide (SA) (กรดอะเซทิล N- ) มันมีบทบาทสำคัญในกลไกการป้องกันในร่างกาย SA มีการกระจายอย่างกว้างขวางในตำแหน่งที่สำคัญของกลุ่มน้ำตาลไกลโคโปรตีนที่หลั่งและ glycolipids (Schauer, 2004) และจากการปกครองของวิวัฒนาการของเผ่าพันธุ์ที่แสดงให้เห็นว่ามีสายพันธุ์ที่สูงขึ้น SA มากมาย น้ำนมแม่มีความเข้มข้นสูงของ SA ซึ่งเป็นเรื่องที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดกับการพัฒนาเด็กทารกและการเจริญเติบโตของระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายภายใต้เงื่อนไขการติดเชื้อ (Wang et al., 2001) มากกว่า 75% ของ SA ในนมที่มีการตรวจพบใน CGMP แสดงให้เห็นว่าการทำงานทางสรีรวิทยา CGMP เป็นสิ่งที่สำคัญมาก. การศึกษาได้แสดงให้เห็นว่า CGMP สามารถแก้ enterotoxin (โอ้ et al., 2000) ยับยั้งไวรัสหรือการยึดเกาะของแบคทีเรียให้กับเซลล์ (Bruck et al., 2006) ยับยั้งการหลั่งระบบทางเดินอาหาร (โบรดี้, 2000) ส่งเสริมการแพร่กระจายของแบคทีเรียที่มีประโยชน์ (JANER et al., 2004) และฟังก์ชั่นการควบคุมออกแรงภูมิคุ้มกัน (Otani และตะ, 1995) มีข้อได้เปรียบเหล่านี้ CGMP ดึงดูดความสนใจอย่างกว้างขวางในด้านของการวิจัยอาหารทำงาน, การแพทย์และการดูแลสุขภาพ อย่างไรก็ตามมีรายงานบางอย่างเกี่ยวกับศักยภาพของการเป็นอาหารเสริมหรือทดแทนยาปฏิชีวนะ. ในการศึกษานี้เราใช้ enterotoxigenic อีโค K88 (เชื้อ E. coli K88) ท้าทายหย่านมลูกสุกรรุ่น (Gao et al., 2013) การตรวจสอบ ผลกระทบของการ CGMP ในการปกป้องลูกสุกรหย่านมกับท้องเสียโพสต์และเพื่อวางรากฐานการทดลองสำหรับการประยุกต์ใช้ศักยภาพของ CGMP เป็นสารอาหาร. 2 วัสดุและวิธีการโปรโตคอลสัตว์สำหรับการศึกษาในปัจจุบันได้รับการตามแนวทางที่กำหนดไว้ในคู่มือสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์เกษตรในการวิจัยและการเรียนการสอนและได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการการดูแลสัตว์ของมหาวิทยาลัยเจ้อเจียง. 2.1 แหล่งที่มาของเคซีน glycomacropeptide การศึกษาครั้งนี้ใช้ผลิตภัณฑ์ในเชิงพาณิชย์ (LACPRODAN® CGMP-10, Arla อาหาร) เป็นแหล่งที่มาของ CGMP กับองค์ประกอบประกาศต่อไปนี้: ปริมาณโปรตีน 82-85% เนื้อหา CGMP (โปรตีน) 80 ± 5% และเนื้อหา SA ประมาณ 4.2%. 2.2 แบคทีเรียสายพันธุ์สายพันธุ์แบคทีเรียที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ (Enterotoxigenic เชื้อ E. coli K88 C83907) ถูกซื้อจากสถาบันจีนสัตวแพทย์ควบคุมยาเสพติด (กรุงปักกิ่งประเทศจีน) และเก็บรักษาไว้โดยห้องปฏิบัติการวิศวกรรมความปลอดภัยแห่งชาติของไบโอฟีดและป้องกันมลพิษ (หางโจว จีน) ความเครียดความท้าทายเก็บงำยีนสำหรับ enterotoxin STB, LT และยีนสำหรับ fimbria F4ac ตรวจพบว่าเป็นอธิบายโดย Gao (2014). 2.3 สัตว์และการออกแบบการทดลองทั้งหมด 18 ลูกผสม (Duroc ×แลนด์เรซ×อร์กเชียร์) หย่านมลูกสุกร (หย่านมใน d 23 น้ำหนักตัวเริ่มต้น 7.42 ± 0.19 กิโลกรัม) ถูกสุ่มให้ได้ 3 กลุ่มทดลอง (6 สุกรต่อการรักษาเพศชายครึ่งหญิงครึ่งหนึ่ง ) กลุ่มควบคุม K88 ท้าทายของกลุ่มและได้รับการรักษา CGMP กลุ่ม กลุ่มควบคุมและ K88 ท้าทายกลุ่มได้รับการเลี้ยงดูอาหารฐานข้าวโพดถั่วเหลืองและกลุ่มได้รับการรักษา CGMP กินอาหารที่เสริมด้วยฐาน 1% CGMP ลูกสุกรทั้งหมดมีการเข้าถึงโฆษณา libitum ฟีดและน้ำตลอดการทดลองใช้ 12 วัน สุกรหย่านมทั้งหมดได้รับการเลี้ยงดูอาหารพื้นฐานเป็นเวลา 3 วันในขณะที่การปรับสภาพ ใน 8-10 วัน, 30 มิลลิลิตร 10% (w / v) NaCHO3 และ 20% (w / v) สารละลายน้ำตาลซูโครสเป็นยารับประทานทั้งหมดของลูกสุกรและ 30 นาทีต่อมาวันที่ 30 มิลลิลิตรของน้ำซุปที่มี LB 109 CFU / มิลลิลิตรของเชื้อ E. coli K88 ได้รับเชื้อไปยังกลุ่ม K88 ท้าทายและ CGMP กลุ่มได้รับการรักษาในขณะที่ 30 มิลลิลิตรของน้ำซุป LB ผ่านการฆ่าเชื้อได้รับการฉีดวัคซีนกับกลุ่มควบคุม กำไรเฉลี่ยต่อวัน (ADG) เฉลี่ยปริมาณอาหารที่กินในชีวิตประจำวัน (ADFI) และฟีด / กำไร (F / G) ของหมูแต่ละถูกตรวจสอบตลอดระยะเวลาการทดลอง คะแนนอุจจาระถูกจัดลำดับตาม Castillo et al, (2008) (0 = อุจจาระมีรูปร่างปกติ 1 = อุจจาระไม่มีรูปแบบ 2 = อุจจาระนุ่มและ 3 = บางอุจจาระเหลว). อาหารข้าวโพดถั่วเหลืองอาหารพื้นฐานเป็นสูตรที่จะตอบสนองความต้องการสารอาหารตามที่อาร์ซี (2012) (ตารางที่ 1). ตารางที่ 1 องค์ประกอบและระดับสารอาหารพื้นฐานของอาหาร (วันที่ 1-12 ของการพิจารณาคดี). เนื้อหาส่วนผสม% เนื้อหาองค์ประกอบการคำนวณ% ข้าวโพด 23.00 พลังงานย่อย, MJ / kg 3.35 ข้าวโพดอัดโปรตีน 20.00 19.01 กากถั่วเหลือง 6.50 ไขมันดิบ 4.99 หมักกากถั่วเหลือง 6.50 เส้นใยดิบ 1.77 ข้าวโอ๊ตอาหาร 15.00 แคลเซียม 1.06 ปลาป่น 6.00 ฟอสฟอรัสที่มีจำหน่าย 0.59 เวย์ซึม 15.00 SID-ไลซีน 1.26 น้ำมันถั่วเหลือง 1.00 SID-methionine 0.46 หินปูน 1.20 SID-threonine 0.79 ไบคาร์บอเนตแคลเซียม 0.80 SID-โพรไบโอ 0.27 Premix1 4.00 SID = มาตรฐาน ileal ย่อย. 1 ให้ต่อกิโลกรัมของอาหาร: วิตามินเอ 13,000 IU วิตามิน D3 1,800 IU, วิตามินอี 60 มก. วิตามิน K1 3.0 มก. วิตามินบี 1 2.0 มก. วิตามินบี 2 6.0 มก. วิตามินบี 6 10.0 มิลลิกรัมวิตามิน บี 12 0.02 มิลลิกรัมไนอาซิน 35.0 มิลลิกรัมแคลเซียม pantothenic 15.0 มก., ไบโอติน 0.12 มิลลิกรัมกรดโฟลิค 1.0 มก; เฟ 150.0 มิลลิกรัม Cu 120.0 มิลลิกรัมสังกะสี 150.0 มิลลิกรัมแมงกานีส 45.0 มิลลิกรัม Se 0.30 มก. ร่วม 1 มิลลิกรัมผม 0.30 มก. ตัวเลือกตารางที่2.4 การเก็บตัวอย่างและการประมวลผลในตอนท้ายของการทดสอบ (วันที่ 13), ตัวอย่างเลือดถูกนำมาจากเส้นเลือดใหญ่เส้นและจับตัวที่อุณหภูมิห้องนาน 60 นาที เซรั่มที่ถูกแยกจากกันโดยการหมุนเหวี่ยง (3,000 รอบต่อนาที, 10 นาที, 4 ° C) และเก็บไว้ที่ -20 ° C จนการวิเคราะห์ทางชีวเคมีและวิธี ELISA หลังจากการเก็บตัวอย่างเลือดทั้งหมดของลูกสุกรที่ถูก euthanized หน้าท้องถูกเปิดทันทีและเนื้อหาในลำไส้ของลำไส้ใหญ่และลำไส้ใหญ่ส่วนต้นถูกเก็บไว้สำหรับการนับจำนวนแบคทีเรีย เนื้อเยื่อจาก ileum ขั้วถูกถอดออกและแช่แข็งทันทีในไนโตรเจนเหลว กลุ่มตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนถึงการวิเคราะห์ เนื้อเยื่อจากลำไส้เล็กส่วนกลางถูกเก็บรวบรวมและการแก้ไขใน 4% วิธีการแก้ปัญหาในการวิเคราะห์ paraformaldehyde. 2.5 หาความชีวเคมีระดับเซรั่มหมูโปรตีนที่สำคัญเฟสเฉียบพลัน (หมู-MAP) D-แลคเตทและเดส diamine (DAO) ได้รับการพิจารณาโดยใช้ชุด ELISA เชิงพาณิชย์ที่ซื้อมาจากปักกิ่ง Luyuan เบิร์ดเทคโนโลยีชีวภาพ จำกัด (กรุงปักกิ่งประเทศจีน) ต่อไปนี้ขั้นตอนมาตรฐานที่อธิบายไว้โดยผู้ผลิต ระดับซีรั่มของ SA ถูกวัดโดยใช้ชุดทดสอบเชิงพาณิชย์ SA ซื้อจากหนานจิง Jiancheng สถาบันวิศวกรรมชีวภาพ (Jiangsu, จีน) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต. วัดเนื้อเยื่อลำไส้วิเคราะห์ตามการย้อมสี H & E อธิบายโดย Moeser et al, (2012) ความสูงและความลึก villus ฝังศพใต้ถุนโบสถ์วัดภายใต้กล้องจุลทรรศน์ Leica (DM3000; Leica, Wetzlar, เยอรมนี) อย่างน้อย 10 villi จากหมูแต่ละวัด. ส่วนลำไส้ออกจากปลาย ileum ของแต่ละลูกสุกรล้างด้วย 1 ×พีบีเอสที่จะเอาเลือดส่วนเกินหดหายใน 1 มิลลิลิตร 1 ×พีบีเอสและเก็บไว้ค้างคืนที่ -20 ° C หลังจากนั้น 2 รอบแช่แข็งละลายที่จะทำลายเยื่อหุ้มเซลล์ที่ homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 5000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 ° C และสารละลายที่ถูกเก็บรวบรวม aliquoted ในหลอดมิลลิลิตร 1.5 และเก็บไว้ที่ -20 ° C จน ใช้ (Gao et al., 2013) ปริมาณโปรตีน ileal ถูกกำหนดใช้เก็บกวาดโปรตีน Assay Kit (Keygen หนานจิงประเทศจีน) ทำตามขั้นตอนของผู้ผลิต อิมมูโนหลั่ง ileal A (SIGA) ระดับ (pg / มิลลิลิตร) ถูกวัดโดยใช้ชุด ELISA ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ (Luyuan เบิร์ดเทคโนโลยีชีวภาพ จำกัด , ปักกิ่ง, จีน) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ผลสุดท้ายจะถูกคำนวณในรูปแบบของมก. SIGA ต่อกรัมโปรตีน. กลุ่มตัวอย่างเนื้อหาในลำไส้ถูกเจือจางในเจือจางอนุกรมสิบเท่า 10 ไมโครลิตรของแต่ละเจือจางอนุกรมกระจายในสื่อแบคทีเรียเพื่อให้การแจงนับของแบคทีเรียชนิดที่เฉพาะเจาะจง (ไม้กวาด et al., 2006) เชื้อ E. coli ถูกกำหนดโดยการเจริญเติบโตใน Eosin-สีน้ำเงิน Methylene วุ้น (Hopebio ชิงเต่าประเทศจีน) ต่อไปบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมงในอากาศ. 2.6 การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลทั้งหมดจะถูกนำเสนอเป็นวิธีและ SEM การวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการในโปรแกรม SPSS 16.0 (SPSS อิงค์, Chicago, IL) อย่างมีนัยสำคัญของความแตกต่างระหว่างกลุ่มการรักษาได้รับการวิเคราะห์โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวและหมายถึงการแยกการใช้การทดสอบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญของดันแคนยกเว้นสำหรับข้อมูลของคะแนนอุจจาระและ E. นับ coli ของลำไส้ใหญ่และลำไส้ซึ่งได้รับการวิเคราะห์โดยการจัดอันดับการทดสอบผลรวม . ระดับความสำคัญของ 0.05 ถูกใช้เป็นค่าเริ่มต้นและแถวที่มีอักษรตัวเล็กตัวยกที่แตกต่างกันในแต่ละความหมายแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . บทนำ
ในอุตสาหกรรมสุกรที่ทันสมัย อัตราการตายของลูกสุกรหย่านมเวทีในบัญชีประมาณ 70% ของระยะเวลาการเลี้ยงทั้งหมด ( เจิน et al . , 2006 ) วิธีแบบดั้งเดิมเพื่อลดการสูญเสียของลูกสุกรจะรวมถึงปริมาณของยาปฏิชีวนะในอาหาร แต่การใช้มากเกินไปของยาปฏิชีวนะ ทำให้เกิดการดื้อยาในสิ่งแวดล้อม มลภาวะ ตกค้างในอาหารของมนุษย์ และปัญหาอื่นๆดังนั้นทางเลือกยาปฏิชีวนะจำเป็นหมดท่า

glycomacropeptide เคซีน ( cGMP ) ได้มาจากκ - เคซีนเป็นเปปไทด์อื่นฟอสเฟต . ในระหว่างกระบวนการของการทำชีส เมทไธโอนีนไคโมซิน hydrolyzes ฟีนี–พันธบัตรของκ - เคซีนเป็นไม่ละลายพารา - κ - เคซีน ( ตกค้าง 1 – 105 ) และ cGMP polypeptide ที่ละลายน้ำได้ ( ตกค้าง 106 ( 169 ) ( ซิลวา Hernandez et al . , 2002 )พารา - κ - เคซีนที่เหลืออยู่ในหู ขณะที่ยังถูกแยกจากเวย์กลายเป็นผลพลอยได้ มันได้รับรายงานว่าเปปไทด์ออกฤทธิ์ทางชีวภาพมากมาย ที่มีคุณค่าทางอาหารสูง ตั้งอยู่ใน เวย์โปรตีน เช่น มมูโนโกลบูลิน และบีตา - แลคโตเฟอร์ริน , โกลบูลิน อย่างไรก็ตามยังอาจรู้จักน้อย ชีส whey โปรตีน แม้เนื้อหาในเวย์โปรตีนรวมที่ 15 – 20% ( ไซโตะ et al . , 1991 ) .

กลุ่มฟังก์ชันที่สำคัญที่สุดของ cGMP เป็นโพลีแซคคาไรด์ กรด ( SA ) ( n-acetylneuraminic กรด ) มันมีบทบาทสำคัญในกลไกการป้องกันในสิ่งมีชีวิต ซา จะกระจายอย่างกว้างขวางในตำแหน่งสำคัญของน้ำตาลโซ่ และหลั่งโปรตีนไกลโคลิพิด ( เชาเออร์ , 2004 ) และจากกฎของวิวัฒนาการของสายพันธุ์พบว่าสายพันธุ์ที่สูงขึ้นในมากมาย