การประดิษฐ์ from such host cell may

การประดิษฐ์ from such host cell may all be conventional techniques.
Typically, the culture method of the การประดิษฐ์นี้ is a serum-free culture method, usually by
culturing cells serum-free in suspension. Likewise, once produced, the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of
the การประดิษฐ์ may be purified from the cell culture contents according to standard procedures of the
art, ที่รวมถึง ammonium sulfate precipitation, affinity columns, column chromatography, gel 10 electrophoresis and the like. Such techniques are within the skill of the art and do not limit this
การประดิษฐ์. For example, preparations of altered antibodies are described in WO 99/58679 and WO 96/16990.
Yet another method of expression of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน may utilize expression in a
transgenic animal, such as described in U. S. Patent No. 4,873,316. This relates to an expression 15 system using the animals casein promoter which when transgenically incorporated into a mammal
permits the female to produce the desired recombinant protein in its milk.
ในลักษณะ ต่อไป of the การประดิษฐ์ there is provided a method of producing an antigen
binding protein (e.g. a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี) of the การประดิษฐ์ which method ประกอบรวมด้วยs the step of
culturing a host cell transformed or ทรานสเฟคต์ with a vector encoding the light and/or heavy chain 20 of the antibody of the การประดิษฐ์ and recovering the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน thereby produced.
In accordance with the การประดิษฐ์นี้ there is provided a method of producing an anti-
LAG-3 โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน (e.g. a ฮิวเมไนซ์ แอนติบอดี) of the การประดิษฐ์นี้ which binds to human LAG-3, which method ประกอบรวมด้วยs the steps of;
(a) providing a first vector encoding a heavy chain of the antibody;
25 (b) providing a second vector encoding a light chain of the antibody;
(c) transforming a mammalian host cell (e.g. CHO) with said first and second vectors;
(d) culturing the host cell of step (c) under conditions conducive to the secretion of the antibody from said host cell into said culture media;
(e) recovering the secreted antibody of step (d).
30 Once expressed by the desired method, the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน may then be examined
for in vitro activity by use of an appropriate assay, such as Biacore surface Plasmon resonance analysis, to assess binding of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน to LAG-3. Additionally, other in vitro and in vivo assays may also be used to determine an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน's ability to cause การลดปริมาณ of cells expressing LAG-3, such as activated human T cell populations.
35 The skilled person will appreciate that, upon production of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน such
as an antibody, in particular depending on the cell line used and particular amino acid sequence of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน, post-translational modifications may occur. For example, this may
12





รวมถึง the cleavage of certain leader sequences, the addition of various sugar moieties in various glycosylation and phosphorylation patterns, deamidation, oxidation, disulfide bond scrambling, isomerisation, C-terminal lysine clipping, and N-terminal glutamine cyclisation. The การประดิษฐ์นี้
encompasses the use of โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน which have been subjected to, or have undergone, 5 one or more post-translational modifications. Thus an "โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน" or "antibody" of the
การประดิษฐ์ รวมถึง an "โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน" or "antibody", respectively, as defined earlier which
has undergone a post-translational modification such as described herein.
Glycosylation of antibodies at conserved positions in their constant regions is known to have
a profound effect on antibody function, particularly เอฟเฟคเตอร์ functioning, see for example, Boyd et al. 10 (1996) Mol. Immunol. 32: 1311-1318. Glycosylation variants of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the
การประดิษฐ์ โดยที่ one or more carbohydrate moiety is added, substituted, deleted or modified are
contemplated. Introduction of an asparagine-X-serine or asparagine-X-threonine motif creates a
potential site for enzymatic attachment of carbohydrate moieties and may therefore be used to
manipulate the glycosylation of an antibody. In Raju et al. (2001) Biochemistry 40: 8868-8876 the
15 terminal sialyation of a TNFR-IgG immunoadhesin was increased through a process of
regalactosylation and/or resialylation using beta-1, 4-galactosyltransferace and/or alpha, 2,3
sialyltransferase. Increasing the terminal sialylation is believed to increase the half-life of the
อิมมูโนโกลบูลิน. Antibodies, in common with most glycoproteins, are typically produced as a
mixture of glycoforms. This mixture is particularly apparent when antibodies are produced in
20 eukaryotic, particularly mammalian cells. A variety of methods have been developed to manufacture
defined glycoforms, see Zhang et al. (2004) Science 303: 371: Sears et al. (2001) Science 291:
2344; Wacker et al. (2002) Science 298: 1790; Davis et al. (2002) Chem. Rev. 102: 579; Hang et al. (2001) Acc. Chem. Res 34: 727. The antibodies (for example of the IgG isotype, e.g. IgG1) as herein described may ประกอบรวมด้วย a defined number (e.g. 7 or less, for example 5 or less, such as two
25 or a single) of glycoform(s).
Deamidation is an enzymatic reaction primarily converting asparagine (N) to iso-aspartic acid and aspartic acid (D) at approximately 3:1 ratio. To a much lesser degree, deamidation can occur with glutamine เรซิดิว in a similar manner. Deamidation in a CDR results in a change in charge of the molecule, but typically does not result in a change in antigen binding, nor does it impact on
30 PK/PD.
Oxidation can occur during production and storage (i.e. in the presence of oxidizing conditions) and results in a covalent modification of a protein, induced either directly by reactive oxygen species or indirectly by reaction with secondary by-products of oxidative stress. Oxidation happens primarily with methionine เรซิดิว, but occasionally can occur at tryptophan and free
35 cysteine เรซิดิว.





13





Disulfide bond scrambling can occur during production and basic storage conditions. Under certain circumstances, disulfide bonds can break or form incorrectly, resulting in unpaired cysteine เรซิดิว (-SH). These free (unpaired) sulfhydryls (-SH) can promote shuffling.
Isomerization typically occurs during production, purification, and storage (at acidic pH) and 5 usually occurs when aspartic acid is converted to isoaspartic acid through a chemical process.
N-terminal glutamine in the heavy chain and/or light chain is likely to form pyroglutamate
(pGlu). Most pGlu formation happens in the production bioreactor, but it can be formed non-
enzymatically, depending on pH and temperature of processing and storage conditions. pGlu formation is considered as one of the principal degradation pathways for recombinant mAbs.
10 C-terminal lysine clipping is an enzymatic reaction catalyzed by carboxypeptidases, and is
commonly observed in recombinant mAbs. Variants of this process รวมถึง removal of lysine from one or both heavy chains. Lysine clipping does not appear to impact bioactivity and has no effect on mAb เอฟเฟคเตอร์ function.


15 เอฟเฟคเตอร์ Function Enhancement
The interaction between the constant region of an โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน and various Fc receptors (FcR) ที่รวมถึง FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) and FcyRIII (CD16) is believed to mediate the เอฟเฟคเตอร์ functions, such as ADCC and CDC, of the โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน.
The term "เอฟเฟคเตอร์ Function" as used herein is meant to refer to one or more of Antibody 20 dependant cell mediated cytotoxic activity (ADCC), Complement—dependant cytotoxic activity (CDC)
mediated responses, Fc-mediated phagocytosis or antibody dependant cellular phagocytosis (ADCP)
and antibody recycling via the FcRn receptor.
The ADCC or CDC properties of โปรตีน ยึดเกาะ แอนติเจน of the การประดิษฐ์นี้ may be enhanced in a number of ways.
25 Human IgG1 constant regions containing specific mutations or altered glycosylation on
เรซิดิว Asn297 have been shown to enhance binding to Fc receptors. In some cases these mutations have also been shown to enhance ADCC and CDC (Lazar et al. PNAS 2006, 103; 4005-
4010; Shields et al. J Biol Chem 2001, 276; 6591-6604; Nechansky et al. Mol Immunol, 2007, 44; 1815-1817).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การประดิษฐ์จากเซลล์โฮสต์ดังกล่าวทั้งหมดได้เทคนิค ปกติ วัฒนธรรมวิธีการของการประดิษฐ์นี้เป็นวิธีวัฒนธรรมฟรีเซรั่ม ปกติโดย culturing เซลล์ซีรั่มฟรีในระบบกันสะเทือน ในทำนองเดียวกัน เมื่อผลิต แอนติเจนยึดเกาะโปรตีนของ อาจจะบริสุทธิ์การประดิษฐ์ที่จากเซลล์วัฒนธรรมตามกระบวนการมาตรฐาน ศิลปะ ฝนที่รวมถึงซัลเฟตแอมโมเนีย ความสัมพันธ์คอลัมน์ คอลัมน์ chromatography, electrophoresis เจล 10 และเช่น เทคนิคดังกล่าวมีทักษะของศิลปะ และไม่จำกัดนี้การประดิษฐ์ ตัวอย่าง เตรียมของแอนตี้เปลี่ยนแปลงไว้ใน WO 99/58679 และ WO 96/16990แต่วิธีอีกวิธีหนึ่งของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนอาจใช้นิพจน์ในการ ถั่วเหลืองสัตว์ เช่นที่อธิบายไว้ใน 4,873,316 หมายเลขสิทธิบัตรของสหรัฐ นี้เกี่ยวข้องกับระบบการนิพจน์ 15 ใช้โปรโมเตอร์เคซีนสัตว์เมื่อใด transgenically เรทเป็นเท้า อนุญาตให้หญิงการผลิต recombinant โปรตีนต้องในนมต่อไปในลักษณะของการประดิษฐ์มีไว้วิธีการตรวจหาการผลิต ผูกโปรตีน (เช่นแอนติบอดีฮิวเมไนซ์) ของการประดิษฐ์การ ประกอบรวมด้วยs วิธีการขั้นตอนการ culturing แปลงเซลล์โฮสต์หรือทรานสเฟคต์กับเวกเตอร์โซ่เบา หรือหนัก 20 ของแอนติบอดีของการประดิษฐ์การเข้ารหัส และการกู้คืนโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนจึงผลิต ในกับการประดิษฐ์นี้มีไว้วิธีการผลิตป้องกันการ-ความล่าช้า 3 โปรตีนยึดเกาะแอนติเจน (เช่นแอนติบอดีฮิวเมไนซ์) ของการประดิษฐ์นี้ที่ binds มนุษย์ที่ความล่าช้า-3, ประกอบรวมด้วยs วิธีการขั้นตอนของ(ก) ให้เข้าห่วงโซ่หนักของแอนติบอดี เวกเตอร์แรก25 (b) เวกเตอร์สองสายไฟของแอนติบอดี การเข้ารหัสให้(ค) เซลล์โฮสต์ mammalian (เช่นช่อ) เปลี่ยนกับเวกเตอร์ดังกล่าวก่อน และสอง(d) culturing เซลล์โฮสต์ของขั้นตอน (c) ภายใต้เงื่อนไขที่เอื้อต่อการหลั่งของแอนติบอดีที่จากเซลล์โฮสต์ดังกล่าวเชื่อว่าวัฒนธรรมสื่อ(อี) แอนติบอดี secreted (d) ขั้นตอนการกู้คืน30 เมื่อแสดง โดยระบุวิธี อาจตรวจโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนแล้วสำหรับกิจกรรมการเพาะเลี้ยงโดยใช้การวิเคราะห์ที่เหมาะสม เช่น Biacore ผิว Plasmon สั่นพ้องการวิเคราะห์ ในการประเมินรวมของแอนติเจนยึดเกาะโปรตีนเป็นความล่าช้า 3 นอกจากนี้ assays ในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลองอื่น ๆ ยังสามารถใช้เพื่อกำหนดความสามารถของแอนติเจนยึดเกาะเป็นโปรตีนการลดปริมาณของเซลล์ที่แสดงความล่าช้า-3 เช่นประชากร T เซลล์มนุษย์เปิดทำ35 ผู้เชี่ยวชาญบุคคลจะชื่นชมที่ เมื่อผลิตเป็นโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนดังกล่าวเป็นแอนติบอดีที่ โดยเฉพาะอย่างยิ่งเซลล์ใช้บรรทัด และเฉพาะอะมิโนกรดลำดับของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจน แก้ไข post-translational อาจเกิดขึ้น ตัวอย่าง นี้อาจ 12 รวมถึงปริของผู้นำบางลำดับ เพิ่ม moieties ระดับต่าง ๆ น้ำตาลต่าง ๆ รูป glycosylation และ phosphorylation, deamidation ออกซิเดชัน แปลงพันธะไดซัลไฟด์ isomerisation คลิปหน้าเทอร์มินัลซีแอล-ไลซีน และสถานี N glutamine cyclisation การประดิษฐ์นี้ครอบคลุมการใช้โปรตีนแอนติเจนยึดเกาะซึ่งอยู่ภายใต้การ หรือ มีระดับ 5 แก้ไข post-translational น้อย ดังนั้น "โปรตีนยึดเกาะแอนติเจน" หรือ "แอนติบอดี" ของการ การประดิษฐ์รวมถึงเป็น "โปรตีนยึดเกาะแอนติเจน" หรือ "แอนติบอดี" ตามลำดับ ตามที่กำหนดไว้ก่อนหน้านี้ซึ่ง มีเปลี่ยนแก้ไข post-translational เช่นนี้อธิบายGlycosylation แอนตี้ที่ตำแหน่งนำในภูมิภาคของตนคงเป็นที่รู้จักกันได้ ผลอย่างยิ่งในฟังก์ชันแอนติบอดี โดยเฉพาะอย่างยิ่งเอฟเฟคเตอร์ที่ทำงาน ตัวอย่าง ดู Boyd et al. 10 Immunol Mol. (1996) 32:1311-1318 ตัวแปร Glycosylation ของแอนติเจนยึดเกาะโปรตีนของ การประดิษฐ์โดยที่ moiety คาร์โบไฮเดรต น้อยเพิ่ม แทน ลบ หรือแก้ไขได้ ไตร่ตรอง แนะนำเป็น asparagine X แถ หรือ asparagine-X-ทรีโอนีนแปลนสร้างเป็น เป็นเว็บไซต์สำหรับการแนบเอนไซม์ในระบบของคาร์โบไฮเดรต moieties และดังนั้นจึงอาจใช้ จัดการ glycosylation ของแอนติบอดีที่ ในชีวเคมีจู et al. (2001) 40:8868-887615 sialyation เทอร์มินัลของ immunoadhesin ที่ TNFR IgG เพิ่มขึ้นตลอดกระบวนการของใช้เบต้า-1, 4 galactosyltransferace และ/หรืออัล ฟ่า 2,3 resialylation / regalactosylationsialyltransferase เพิ่ม sialylation เทอร์มินัลเชื่อว่าเพิ่ม half-life ของการอิมมูโนโกลบูลิน โดยทั่วไปผลิตแอนตี้ in common with glycoproteins ส่วนใหญ่ เป็นการส่วนผสมของ glycoforms ส่วนผสมนี้จะเห็นได้ชัดโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมีผลิตแอนตี้ใน20 eukaryotic โดยเฉพาะอย่างยิ่ง mammalian เซลล์ ได้รับการพัฒนาความหลากหลายของวิธีการผลิตกำหนด glycoforms ดูจางและ al. (2004) วิทยาศาสตร์ 303:371: Sears et al. (2001) วิทยาศาสตร์ 291:2344 วิทยาศาสตร์ wacker et al. (2002) 298:ดำรง Davis et al. (2002) Chem. รายได้ 102:579 หางและ al. (2001) บัญชี Chem. ทรัพยากร 34:727 แอนตี้ (ตัวอย่างของการ IgG isotype เช่น IgG1) ซึ่งเป็นอธิบายอาจประกอบรวมด้วยหมายเลขที่กำหนด (เช่น 7 หรือน้อย กว่า เช่น 5 หรือน้อย กว่า เช่นสอง25 หรือเดียว) ของ glycoform(s)Deamidation เป็นปฏิกิริยาที่เอนไซม์ในระบบแปลง asparagine (N) เป็นหลักการ iso aspartic กรดกรด aspartic (D) ในอัตราส่วนประมาณ 3:1 ระดับน้อยมาก deamidation สามารถเกิดขึ้นกับ glutamine เรซิดิวในลักษณะคล้ายกัน Deamidation ใน CDR เกิดการเปลี่ยนแปลงค่าใช้จ่ายโมเลกุล แต่โดยทั่วไปผลที่เปลี่ยนแปลงในการตรวจหาผูก หรือไม่ส่งผลกระทบใน30 PK/PDออกซิเดชันสามารถเกิดขึ้นได้ในระหว่างการผลิต และเก็บข้อมูล (เช่นในต่อหน้าของเงื่อนไขเติมออกซิเจน) และมีผลในการปรับเปลี่ยนโปรตีนเป็น covalent เกิดหรือโดยตรง โดยชนิดออกซิเจนปฏิกิริยาโดยทางอ้อม โดยปฏิกิริยากับสินค้าพลอยรอง oxidative เครียดได้ ออกซิเดชันที่เกิดขึ้นเป็นหลักกับ methionine เรซิดิว แต่บางครั้งสามารถเกิดขึ้นในทริปโตเฟน และฟรีเรซิดิว 35 cysteine13 ไดซัลไฟด์บอนด์แปลงสามารถเกิดขึ้นได้ในระหว่างการผลิตและสภาพการจัดเก็บพื้นฐาน ในบางสถานการณ์ พันธบัตรไดซัลไฟด์สามารถแบ่ง หรือฟอร์มไม่ถูกต้อง เกิดในเรซิดิว unpaired cysteine (-SH) เหล่านี้ฟรี (unpaired) sulfhydryls (-SH) สามารถเลื่อนสลับกันIsomerization โดยทั่วไปเกิดขึ้นในระหว่างการผลิต ฟอก และเก็บข้อมูล (ที่ pH กรด) และ 5 มักเกิดขึ้นเมื่อแปลง aspartic กรดเป็นกรด isoaspartic ผ่านทางกระบวนการเคมี เทอร์มินัล N glutamine ในโซ่หนัก/ เบาโซ่จะไป pyroglutamate(pGlu) ผู้แต่ง pGlu ส่วนใหญ่เกิดขึ้นใน bioreactor ผลิต แต่สามารถเกิดขึ้นไม่ได้enzymatically ขึ้นอยู่กับค่า pH และอุณหภูมิของเงื่อนไขการประมวลผลและจัดเก็บ ผู้แต่ง pGlu ถือเป็นหนึ่งของมนต์สร้างหลักสำหรับ recombinant mAbsคลิปหน้า 10 เทอร์มินัลซีแอล-ไลซีนเป็นปฏิกิริยาที่เอนไซม์ในระบบกระบวน โดย carboxypeptidases และโดยทั่วไปสังเกต recombinant mAbs ตัวแปรของกระบวนการรวมถึงเอาของไลซีนจากโซ่หนักหนึ่ง หรือทั้งสอง ไลซีนคลิปหน้าไม่ส่งผลกระทบต่อทางชีวภาพ และไม่มีผลกับฟังก์ชันเอฟเฟคเตอร์มาบเพิ่มประสิทธิภาพฟังก์ชัน 15 เอฟเฟคเตอร์การโต้ตอบระหว่างแคว้นแอนติเจนยึดเกาะโปรตีนคงและที่รวมถึง receptors (FcR) Fc ต่างๆ FcyRI (CD64), FcyRII (CD32) และ FcyRIII (CD16) เชื่อว่าฟังก์ชันเอฟเฟคเตอร์ CDC ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนและ ADCC บรรเทาเติมเต็มคำว่า "เอฟเฟคเตอร์ทำงาน" เป็นใช้ซึ่งตั้งใจอ้างอิง 20 แอนติบอดีขึ้นต่อเซลล์ mediated cytotoxic กิจกรรม (ADCC), อย่างน้อยหนึ่ง — ขึ้นอยู่ cytotoxic กิจกรรม (CDC) ตอบ mediated, Fc mediated phagocytosis หรือแอนติบอดีขึ้นต่อเซล phagocytosis (ADCP) และแอนติบอดีที่รีไซเคิลผ่านตัวรับ FcRnคุณสมบัติ ADCC หรือ CDC ของโปรตีนแอนติเจนยึดเกาะของการประดิษฐ์นี้อาจจะเพิ่มขึ้นในหลายวิธี25 IgG1 มนุษย์คงภูมิภาคที่ประกอบด้วยการกลายพันธุ์หรือ glycosylation เปลี่ยนแปลงในเรซิดิว Asn297 ได้รับการแสดงเพื่อผูกกับ Fc receptors ในบางกรณี กลายพันธุ์เหล่านี้มีการแสดงเพื่อเพิ่ม ADCC และ CDC (Lazar et al. PNAS 2006, 103, 4005 -4010 ชิลด์ et al. J Biol เคมี 2001, 276 6591-6604 Immunol Nechansky et al. โมล 2007, 44 1815-1817)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การประดิษฐ์จากเซลล์โฮสต์อาจจะเทคนิคปกติ
โดยปกติ วิธีการเลี้ยงของการประดิษฐ์นี้เป็น serum-free วัฒนธรรมแบบปกติ โดยการเพาะเลี้ยงเซลล์ serum-free
ในการระงับ อนึ่ง เมื่อผลิต โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนของ
การการประดิษฐ์อาจจะบริสุทธิ์จากเซลล์วัฒนธรรมเนื้อหาตามมาตรฐานของ
ศิลปะ ที่รวมถึงแอมโมเนียมซัลเฟตตกตะกอน affinity คอลัมน์คอลัมน์ chromatography , เจล 10 วิธี เช่น เทคนิคดังกล่าวอยู่ในทักษะของศิลปะและไม่ จำกัด การประดิษฐ์นี้

ตัวอย่างเช่นการเตรียมการเปลี่ยนแปลง ( จะอธิบายใน 58679 และ wo wo 99 / 96 / 16990 .
อีกวิธีในการแสดงออกของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนอาจใช้สำนวนใน
สัตว์ดัดแปลงพันธุกรรมเช่นที่อธิบายไว้ในสหรัฐอเมริกาสิทธิบัตรเลขที่ 4873316 . นี้เกี่ยวข้องกับการแสดงออกที่ 15 ระบบโดยใช้สัตว์โดยโปรโมเตอร์ซึ่งเมื่อ transgenically รวมเข้าไปในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม
อนุญาตให้สตรี เพื่อผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนในนมที่ต้องการ .
ในลักษณะต่อไปของการประดิษฐ์มีให้วิธีการผลิตแอนติเจน
โปรตีน ( เช่นฮิวเมไนซ์แอนติบอดี ) ของการประดิษฐ์ซึ่งวิธีประกอบรวมด้วย s ขั้นตอน
การเพาะเลี้ยงเซลล์โฮสต์เปลี่ยนไปหรือทรานสเฟคต์เวกเตอร์การเข้ารหัสด้วยแสง และ / หรือ ห่วงโซ่หนักของแอนติบอดีของการประดิษฐ์และการกู้คืนโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนจึงผลิต
ตามการประดิษฐ์นี้มีให้วิธีการผลิตการต่อต้าน -
lag-3 โปรตีนยึดเกาะแอนติเจน ( Eกรัมเป็นฮิวเมไนซ์แอนติบอดี ) ของการประดิษฐ์นี้ซึ่งผูกกับมนุษย์ lag-3 ซึ่งวิธีการขั้นตอนของประกอบรวมด้วย S ;
( A ) ให้แรกเวกเตอร์ห่วงโซ่หนักของแอนติบอดีที่เข้ารหัส ;
25 ( B ) ให้สองเวกเตอร์ห่วงโซ่แสงของแอนติบอดีที่เข้ารหัส ;
( C ) เปลี่ยนเป็นเซลล์เจ้าบ้านซึ่งเป็นสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ( เช่น โช ) ด้วยเวกเตอร์ตัวแรกและตัวที่สอง ;
( D ) การเพาะเลี้ยงเซลล์โฮสต์ของขั้นตอน ( C ) ภายใต้เงื่อนไขที่เอื้อต่อการหลั่งแอนติบอดีจากบอกว่าเซลล์โฮสต์ในสื่อวัฒนธรรม ;
( E ) การกู้คืนหลั่งแอนติบอดีของขั้นตอน ( D )
30 เมื่อแสดงโดยต้องวิธีการ โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนอาจถูกตรวจสอบ
สำหรับใน การใช้กิจกรรมโดยการใช้ที่เหมาะสมเช่น biacore PLASMON เสียงสะท้อนพื้นผิวการวิเคราะห์ ประเมิน ผูกพัน ของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนเพื่อ lag-3 . นอกจากนี้ ในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลองหรืออาจจะใช้ในการตรวจสอบโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนสามารถก่อให้เกิดการลดปริมาณเซลล์แสดง lag-3 เช่นเปิดใช้งานเซลล์ T
ประชากรมนุษย์35 มีทักษะคนจะซาบซึ้ง เมื่อการผลิตของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนเช่น
เป็นแอนติบอดี โดยเฉพาะขึ้นอยู่กับเซลล์แถวลำดับกรดอะมิโนและใช้เฉพาะของโปรตีนยึดเกาะแอนติเจนแก้ไขไปรษณีย์ - แปลอาจจะเกิดขึ้นได้ ตัวอย่างเช่นนี้อาจ
12





รวมถึงลึกบางผู้นำลำดับนอกจากนี้ของโมเลกุลน้ำตาลต่างๆใน glycosylation ต่างๆและรูปแบบ ฟอสโฟริเลชันดีแอมมิ เดชัน ออกซิเดชัน isomerisation แปลงพันธะไดซัลไฟด์ , , ไลซีนกรดอะมิโนกลูตามีน ซึ่งการตัดและจัด . การการประดิษฐ์นี้
ครอบคลุมการใช้โปรตีนยึดเกาะแอนติเจนซึ่งได้รับภายใต้หรือได้รับ , ,5 หนึ่งหรือมากกว่าการไปรษณีย์ - แปล . ดังนั้น " โปรตีนยึดเกาะแอนติเจน " หรือ " แอนติบอดี "
การประดิษฐ์รวมถึง " โปรตีนยึดเกาะแอนติเจน " หรือ " แอนติบอดี " ตามลำดับ ตามที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้ซึ่ง
ได้รับไปรษณีย์ - แปลแก้ไข เช่น
อธิบายในที่นี้ของแอนติบอดีที่อนุรักษ์ glycosylation ตำแหน่งในภูมิภาคคงที่ของพวกเขาเป็นที่รู้จักกันจะมีผลอย่างยิ่งต่อการทำงานของภูมิคุ้มกัน
, ทํางานโดยเฉพาะอย่างยิ่งเอฟเฟคเตอร์ เห็นตัวอย่าง บอยด์ et al . 10 ( 1996 ) โมล immunol . 32 : 1311-1318 . สายพันธุ์ของโปรตีน glycosylation ยึดเกาะแอนติเจนของ
การประดิษฐ์โดยที่หนึ่งหรือมากกว่ากึ่งหนึ่งคาร์โบไฮเดรตเพิ่มแทนที่ , ลบหรือปรับเปลี่ยน
พิจารณา ความรู้เบื้องต้นของ asparagine-x-serine หรือ asparagine-x-threonine แม่ลายสร้างเว็บไซต์ที่มีศักยภาพสำหรับสิ่งที่แนบมา
เอนไซม์คาร์โบไฮเดรตโมเลกุลและดังนั้นจึงอาจต้องใช้

จัดการ glycosylation ของแอนติบอดี ใน Raju et al . ( 2001 ) 40 : ชีวเคมี8868-8876
15 สถานี sialyation ของ tnfr IgG immunoadhesin เพิ่มขึ้นผ่านกระบวนการของ
regalactosylation และ / หรือ resialylation ใช้ beta-1 4-galactosyltransferace , และ / หรือ อัลฟ่า 2
sialyltransferase . เพิ่มสถานี sialylation เชื่อว่าเพิ่มครึ่งชีวิตของ
อิมมูโนโกลบูลิน . แอนติบอดีในทั่วไปที่มีโปรตีนมากที่สุดมักจะผลิตเป็นส่วนผสมของ glycoforms
. ส่วนผสมนี้เป็นที่เห็นได้ชัดโดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อแอนติบอดีที่ผลิตใน
20 เข้ามา โดยเฉพาะ mammalian เซลล์ ความหลากหลายของวิธีการได้รับการพัฒนาเพื่อผลิต
นิยาม glycoforms ดู Zhang et al . ( 2004 ) วิทยาศาสตร์ 303 : 371 : เซียร์ et al . ( 2001 ) วิทยาศาสตร์ 291 :
1 ; Wacker et al . ( 2002 ) วิทยาศาสตร์ 298 : 1790 ; Davis et al . ( 2002 ) เคมี บาทหลวง 102 :579 ; แขวน et al . ( 2001 ) บัญชี เคมี RES 34 : 727 . แอนติบอดี ( ตัวอย่างของ IgG และเช่น ( ) ในที่นี้อธิบายอาจประกอบรวมด้วยกำหนดหมายเลข ( เช่น 5 หรือน้อยกว่า เช่น 5 หรือน้อยกว่า เช่นสอง
25 หรือเดี่ยว ) ของ glycoform ( s )
ดีแอมมิ เดชันเป็นเอนไซม์หลักเปลี่ยน asparagine ปฏิกิริยา ( n ) ISO กรดและ กรด ( D ) ที่ประมาณ 3 :1 อัตราส่วน . ในระดับมากน้อย ดีแอมมิ เดชันสามารถเกิดขึ้นกับกลูตาเรซิดิวในลักษณะที่คล้ายกัน ดีแอมมิ เดชันใน CDR ผลในการเปลี่ยนแปลงในค่าใช้จ่ายของโมเลกุล แต่โดยทั่วไปจะไม่ส่งผลในการเปลี่ยนแปลงแอนติเจนผูก ไม่ส่งผลกระทบต่อ
30 PK / PD .
ออกซิเดชันสามารถเกิดขึ้นในระหว่างการผลิตและการเก็บรักษา ( เช่นในการแสดงตนของภาวะออกซิไดซ์ ) และผลลัพธ์ในมณฑลอันฮุยของโปรตีนกระตุ้นทั้งโดยตรงหรือโดยอ้อมโดยปฏิกิริยาชนิดออกซิเจนปฏิกิริยากับรองจากความเครียดออกซิเดชัน ออกซิเดชันเกิดขึ้นหลักที่มีเมทไธโอนีนเรซิดิว , แต่บางครั้งสามารถเกิดขึ้นได้และกรดอะมิโนทริปฟรี
3 เรซิดิว .





13





พันธะไดซัลไฟด์แปลงอาจเกิดขึ้นในระหว่างการผลิต และสภาวะการเก็บรักษาพื้นฐาน ภายใต้สถานการณ์บางอย่างที่สามารถทำลายหรือพันธบัตรซัลไฟด์แบบไม่ถูกต้อง ส่งผลให้เรซิดิว Unpaired ซิสเทอีน ( - SH ) เหล่านี้ฟรี ( Unpaired ) sulfhydryls ( - SH ) สามารถส่งเสริมสับไพ่
ไอโซเมอไรเซชันมักจะเกิดขึ้นในระหว่างการผลิต การทำให้บริสุทธิ์และ กระเป๋า ( ที่ pH เป็นกรด ) และ 5 มักเกิดขึ้นเมื่อกรดจะถูกแปลงเป็น isoaspartic กรดผ่านกระบวนการทางเคมี
ของกรดอะมิโนกลูตาในโซ่หนักและ / หรือ light chain มีแนวโน้มที่จะฟอร์ม pyroglutamate
( pglu ) ส่วนใหญ่ pglu ก่อตัวเกิดขึ้นในถังปฏิกรณ์ผลิต แต่มันเกิดขึ้นได้ไม่ใช่ -
enzymatically ขึ้นอยู่กับค่า pH และอุณหภูมิของการประมวลผลและสภาพการเก็บรักษา