Aspergillus niger and Rhizopus spec

Aspergillus niger and Rhizopus species as described in section 3.4 (each carrying

20µg of proteins) were mixed with loading buffer in 1:1 ratio. The loading buffer was prepared as described in Appendix 8. The mixtures were thoroughly mixed by

vortexing and the homogenized mixtures heated at 95°C for 5 minutes in a Dry Bath Incubator. After heating, the mixtures were vortexed again. The mixtures were loaded into wells in cast gel placed in a running buffer (prepared as shown in Appendix 9) using micro-syringes. The cast gel was prepared as shown in Appendix 10. A standard marker produced by Sigma-Aldrich Company, USA, containing proteins of known molecular weights was loaded alongside the samples. The gel was run at 80 V and
100 mA. As soon as the tracking dye entered the resolving gel, the voltage and the current were changed to 100 V and 120 mA to facilitate better running of the proteins through the gel. The electrophoresis was run for three hours (Bolt and Mahoney,
1997). After electrophoresis, the gel was stained in Coomassie Brilliant Blue solution (comprising 40% distilled water, 10% acetic acid, 50% methanol and 0.25% by weight of Coomassie Brilliant Blue R-250; the Coomassie Brilliant Blue R-250 was dissolved in the methanol before adding acetic acid and water) for 2 hours on a shaker. Thereafter, the gel was destained for 2 hours in a solution comprising 67.5% distilled water, 7.5% acetic acid and 25% methanol on a shaker. The solution was replaced from time to time to enhance result.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Aspergillus ไนเจอร์และ Rhizopus พันธุ์ตามที่อธิบายไว้ในส่วน 3.4 (แต่ละชิ้น20µg ของโปรตีน) ที่ผสมกับโหลดบัฟเฟอร์ในอัตราส่วน 1:1 มีเตรียมบัฟเฟอร์โหลดตามที่อธิบายไว้ในภาคผนวก 8 ส่วนผสมได้ผสมอย่างละเอียดโดย vortexing และน้ำยาผสม homogenized เป็นกลุ่มความร้อนที่ 95° C สำหรับ 5 นาทีในการบ่มเพาะวิสาหกิจน้ำแห้ง หลังจากเครื่องทำความร้อน น้ำยาผสมได้ vortexed อีกครั้ง น้ำยาผสมจะถูกโหลดลงในบ่อในเจหล่อไว้ในบัฟเฟอร์ทำงาน (เตรียมแสดงในภาคผนวก 9) โดยใช้เข็มฉีดยาไมโคร เจหล่อได้เตรียมดังแสดงในภาคผนวก 10 เครื่องหมายมาตรฐานที่ผลิต โดย บริษัทซิก-Aldrich สหรัฐอเมริกา ประกอบด้วยโปรตีนของน้ำหนักโมเลกุลที่รู้จักถูกโหลดจากตัวอย่าง เจรันที่ 80 V และ100 mA เป็นสีย้อมติดตามป้อนเจ resolving แรงดันไฟฟ้าและกระแสมีการเปลี่ยนแปลง 100 V และ 120 mA เพื่อให้ง่ายต่อการทำงานของโปรตีนที่ดีกว่า ผ่านเจ Electrophoresis การรันเวลา 3 ชั่วโมง (Bolt และ Mahoneyปี 1997) . หลัง electrophoresis เจมีสีในโซลูชัน Coomassie Brilliant Blue (ประกอบด้วย 40% กลั่นน้ำ กรดอะซิติก 10%, 50% เมทานอล และ 0.25% โดยน้ำหนักของ Coomassie Brilliant Blue R-250; Coomassie Brilliant บลู R-250 ถูกละลายในเมทานอลก่อนที่จะเพิ่มกรดน้ำส้มและน้ำ) 2 ชั่วโมงในการเชคเกอร์ หลังจากนั้น เจมี destained 2 ชั่วโมงในการแก้ไขปัญหาที่ประกอบด้วยน้ำกลั่น 67.5%, 7.5% กรดอะซิติก และเมทานอล 25% ในการเชคเกอร์ การแก้ปัญหาถูกแทนเวลาในการเพิ่มผล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Aspergillus ไนเจอร์และพันธุ์ Rhizopus ตามที่อธิบายไว้ในส่วน 3.4 (แต่ละคนถือ20μgของโปรตีน) ได้รับการผสมกับบัฟเฟอร์โหลดในอัตราส่วน 1: 1 บัฟเฟอร์โหลดได้จัดทำขึ้นตามที่อธิบายไว้ในภาคผนวก 8. ผสมถูกผสมโดยvortexing และสารผสมหดหายร้อนที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีในการอาบน้ำแห้งบ่มเพาะวิสาหกิจ หลังจากที่ความร้อนผสมได้รับการ vortex อีกครั้ง ผสมถูกโหลดลงในบ่อในเจลโยนวางไว้ในบัฟเฟอร์ทำงาน (จัดทำขึ้นตามที่แสดงในภาคผนวกที่ 9) โดยใช้เข็มฉีดยาขนาดเล็ก เจลโยนได้จัดทำขึ้นตามที่แสดงในภาคผนวก 10. เครื่องหมายมาตรฐานที่ผลิตโดย บริษัท Sigma-Aldrich บริษัท สหรัฐอเมริกาที่มีโปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลที่รู้จักกันถูกโหลดตัวอย่างข้าง เจลก็วิ่งที่ 80 V และ100 mA ทันทีที่ย้อมติดตามป้อนเจลแก้ปัญหาแรงดันไฟฟ้าและปัจจุบันมีการเปลี่ยนแปลงถึง 100 โวลต์และ 120 mA เพื่ออำนวยความสะดวกในการทำงานที่ดีขึ้นของโปรตีนที่ผ่านการเจล อิเล็กก็วิ่งเป็นเวลาสามชั่วโมง (Bolt และฮอนี่ย์, 1997) หลังจาก electrophoresis เจลที่ถูกย้อมสีในการแก้ปัญหา Coomassie สดใสสีฟ้า (ประกอบด้วย 40% น้ำกลั่น 10% กรดอะซิติก, เมทานอล 50% และ 0.25% โดยน้ำหนักของ Coomassie สดใสสีฟ้า R-250; Coomassie สดใสสีฟ้า R-250 ถูกกลืนหายไปใน เมทานอลก่อนที่จะเพิ่มกรดอะซิติกและน้ำ) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงในเครื่องปั่น หลังจากนั้นเจลถูก destained 2 ชั่วโมงในการแก้ปัญหาประกอบด้วย 67.5% น้ำกลั่น 7.5% กรดอะซิติกและเมทานอล 25% ในเครื่องปั่น วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกแทนที่เป็นครั้งคราวเพื่อเพิ่มผล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ เชื้อราชนิด Aspergillus niger ที่อธิบายไว้ในมาตรา 4 ( แต่ละถือ

20 µกรัมของโปรตีน ) ผสมกับโหลดบัฟเฟอร์ ในอัตรา 1 : 1 โหลดบัฟเฟอร์เตรียมไว้ตามที่อธิบายไว้ในภาคผนวก 8 ผสมโดยผสมด้วย

vortexing และบดผสมอุณหภูมิ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีในการอาบน้ำเข้าตู้อบแห้ง หลังเครื่อง ผสมอยู่ vortexed อีกครั้งส่วนผสมถูกโหลดลงในหลุมในโยนเจลอยู่ในบัฟเฟอร์ ( เตรียมวิ่งตามที่แสดงในภาคผนวกที่ 9 ) การใช้ไมโคร เข็มฉีดยา โยนเจลที่เตรียมไว้ดังแสดงในภาคผนวกที่ 10 เครื่องหมายมาตรฐาน ผลิตโดย บริษัท ซิกม่า Aldrich , สหรัฐอเมริกา , โปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลที่รู้จักกันคือ โหลด พร้อมกับตัวอย่าง เจลใช้ V
มา 80 และ 100ทันทีที่ติดตามย้อมเข้าแก้ไขเจล แรงดัน และกระแส ถูกเปลี่ยนเป็น 100 และ 120 มาเพื่ออำนวยความสะดวกดีกว่าวิ่ง ของโปรตีนจากเจล การใช้เอนไซม์ 3 ชั่วโมง ( Bolt และมาโฮนี่
, 1997 ) หลังจากอิเล็กเจลถูกย้อมสีในการแก้ปัญหาเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสดใส ( ประกอบด้วย 40% น้ำกลั่น 10 % กรดเมทานอล 50% และ 025 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนักของเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใส ; เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสดใส r-250 ละลายในเมทานอลก่อนที่จะเพิ่มกรดและน้ำเป็นเวลา 2 ชั่วโมงในเครื่องปั่น . หลังจากนั้นเจลคือ destained เป็นเวลา 2 ชั่วโมงในการแก้ปัญหาประกอบด้วย 67.5 % น้ำกลั่น , 7.5 % กรด 25% เมทานอลในเครื่องปั่น . สารละลายจะเปลี่ยนจากเวลาเพื่อเพิ่มผล .