2.8. Determination of GSH and Cys,

2.8. Determination of GSH and Cys, by the HPLC Method
The GSH and Cys contents of extracts were measured by the
chromatographic method developed by Winters, Zukowski, Ercal,
Matthews, and Spitz (1995) to analyse c-glutamyl cycle intermediates
and modified by Demirkol et al. (2004).The supernatants prepared
for the thiol contents (250 ll for ginger, 50 ll for tomato)
were derivatised with NPM. This compound reacts with free sulfhydryl
groups to form fluorescent derivatives. Each sample was
first diluted with distilled water to make the volume up to
250 ll, and then 750 ll of NPM (1 mM in acetonitrile) were added.
The resulting solution was mixed and incubated at room temperature
for 5 min. 10 ll of 2 N HCl were added to stop the reaction.
After filtration through a 0.2 lm acrodisc, the derivatised samples
were injected onto a 5 lmC18 column in a reverse phase HPLC system.
GSH and Cys were determined concurrently since all known
monothiols form fluorescent derivatives with NPM. All determinations
were performed in triplicate (n = 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8 การตัดสินใจของ GSH และ Cys โดยวิธี HPLCเนื้อหา GSH และ Cys สกัดถูกวัดโดยการวิธีโครมาโดยหนาว Zukowski, Ercalแมธธิวส์ และสปิทซ์ (1995) การวิเคราะห์กลูตาซีรอบตัวกลางและแก้ไขโดย Demirkol et al. (2004) Supernatants ที่เตรียมไว้สำหรับเนื้อหา thiol (250 ll สำหรับขิง 50 จะสำหรับมะเขือเทศ)มี derivatised กับ NPM สารนี้ทำปฏิกิริยากับ sulfhydryl ฟรีกลุ่มแบบฟลูออเรสเซนต์อนุพันธ์ แต่ละอย่างได้ก่อน เจือจาง ด้วยน้ำกลั่นให้ระดับเสียงสูงสุด250 จะ และ 750 จะของ NPM (1 mM ใน acetonitrile) เพิ่มขึ้นการแก้ปัญหาได้ถูกผสม และได้รับการกกที่อุณหภูมิห้องสำหรับ 5 นาที 10 ll ของ 2 N HCl ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยาหลังจากกรองผ่าน 0.2 lm acrodisc ตัวอย่าง derivatisedถูกฉีดลงในคอลัมน์ lmC18 5 ในขั้นตอนการย้อนกลับระบบ HPLCGSH และ Cys ดำเนินการพร้อมกันทั้งหมดตั้งแต่รู้จักกันmonothiols แบบฟลูออเรสเซนต์สัญญากับ NPM วัดทั้งหมดดำเนินลข้อ (n = 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 ความมุ่งมั่นของ GSH และ Cys, โดยวิธี HPLC
GSH และ Cys เนื้อหาของสารสกัดจากวัดโดย
วิธีโครมาพัฒนาโดยฤดูหนาว Zukowski, Ercal,
แมตทิวส์และ Spitz (1995) ในการวิเคราะห์ตัวกลางวงจร C-glutamyl
และแก้ไขโดย Demirkol et อัล (2004) ได้โดยง่าย supernatants เตรียม
สำหรับเนื้อหา thiol (250 LL สำหรับขิง 50 LL มะเขือเทศ)
ถูก derivatised กับ NPM สารนี้จะทำปฏิกิริยากับ sulfhydryl ฟรี
กลุ่มในรูปแบบสัญญาซื้อขายล่วงหน้าเรืองแสง แต่ละตัวอย่าง
แรกเจือจางด้วยน้ำกลั่นที่จะทำให้ปริมาณถึง
250 LL แล้ว 750 LL ของ NPM (1 มิลลิใน acetonitrile) ถูกเพิ่ม.
การแก้ปัญหาที่เกิดขึ้นก็แตกต่างกันและบ่มที่อุณหภูมิห้อง
เป็นเวลา 5 นาที 10 LL 2 N HCl ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยา.
หลังจากการกรองผ่าน acrodisc 0.2 LM, ตัวอย่าง derivatised
ถูกฉีดลงบน 5 lmC18 คอลัมน์ในระบบเฟส HPLC ย้อนกลับ.
GSH และ Cys ได้รับการพิจารณาควบคู่กันไปตั้งแต่ที่รู้จักกันทั้งหมด
monothiols รูปแบบเรืองแสง สัญญาซื้อขายล่วงหน้าที่มี NPM พิจารณาทั้งหมด
ได้รับการดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่า (n = 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . การวิเคราะห์ภาวะและ GSH โดยวิธี HPLCและสารสกัดจากเนื้อหาของ GSH ในภาวะถูกวัดโดยวิธีโครมาโทกราฟี ที่พัฒนาโดย zukowski ercal , , หนาวแมทธิวและสเปช ( 1995 ) เพื่อวิเคราะห์ c-glutamyl วัฏจักรตัวกลางและแก้ไขโดย demirkol et al . ( 2004 ) . supernatants เตรียมสำหรับเนื้อหา thiol ( 250 จะให้ขิง , 50 จะมะเขือเทศ )เป็น derivatised กับแนว . สารนี้ทำปฏิกิริยากับ sulfhydryl ฟรีกลุ่มรูปแบบอนุพันธ์เรืองแสง แต่ละตัวอย่างครั้งแรกที่เจือจางด้วยน้ำกลั่นเพื่อให้ระดับเสียงขึ้น250 จะแล้ว 750 จะของ NPM 1 mm ไน ) มีการเพิ่มส่งผลให้สารละลายผสมบ่มที่อุณหภูมิห้อง5 นาที 10 จะ 2 N HCl ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยาหลังจากการกรองผ่าน acrodisc 0.2 LM , derivatised ตัวอย่างฉีดไป 5 lmc18 กลับเฟส HPLC คอลัมน์ในระบบและถูกกำหนดโดยกลุ่มภาวะตั้งแต่รู้จักทั้งหมดmonothiols รูปแบบอนุพันธ์เรืองแสงด้วยแนว . ใช้ ทั้งหมดมีการปฏิบัติทั้งสามใบ ( n = 3 )