2.4. Yeast enumeration10 g sample w

2.4. Yeast enumeration
10 g sample was transferred in peptonized water (90 mL) and homogenized with stomacher for 1 min at room temperature. The homogeneous mixture was used as stock solution for making appropriate decimal dilutions in peptonized water and plated on Rose Bengal Chloramphenicol agar (RBCA; Oxoid CM 549 Supplemented with SR 78, Oxoid Ltd., Hants, United Kingdom). Cultures were incubated for 48 h at 30 °C to determine yeast population. Results were expressed in log10 cfu/g of substrate.

2.5. Optical microscopy
Microbial observation of individual colonies appearing on the Plate Count Agar (Merck 1.05463) and RBCA after plating the appropriately diluted homogeneous fermented samples and incubation at 25 °C for 48 h was conducted by using a Zeiss Axiolab reflected light microscope (100× magnitude) equipped with a Canon Power Shot G 2 mm (Canon, Tokyo, Japan) photographic camera.

2.6. Determination of residual carbon content
Aqueous extract was obtained from 5 g sample by addition of distilled water up to a 5:1 (v/w) ratio. The extraction was assisted by mechanical agitation using an Ultra Turrax T25 homogenizer (IKA Labortechnik, Staufen, Germany) for 30 s, and centrifugation at 4500 rpm for 10 min to remove the solid particles. Residual sugars were determined in the aliquots of the aqueous extract spectrophotometrically by the method of Dubois et al. [26].

2.7. Isolation of volatiles
Flavour-active compounds were extracted from 5 g sample with the addition of dichloromethane up to a 2:1 (v/w) ratio (shaking for about 2 h at 20 °C). The organic fractions were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated initially to 2 mL in a Vigreux column and then under a slow nitrogen stream up to a final volume of 500 μL. The crude extracts were kept at −18 °C until further analysis. Final extracts were analysed both qualitatively and quantitatively as described by Mantzouridou and Paraskevopoulou [8]. An Agilent 6890A gas chromatograph (USA) equipped with MSD 5973 mass spectrometer (MS) as well as an Agilent 6890A gas chromatograph equipped with a flame ionization detector (FID) were used. Volatile compounds were separated on a HP-FFAP column (25 m × 0.20 mm i.d., film thickness 0.30 μm) with helium as carrier gas (2 mL/min). The oven temperature was kept at 40 °C for 2 min and then raised to 230 °C at a rate of 10 °C min−1 (4 min). The injector and the transfer line temperatures were set at 230 and 240 °C, respectively. The injection volume was 2 μL (split ratio 100:1). The MS was operated in the EI mode at 70 eV, scanning the range 35–350 m/z at a scan rate of 2 scans s−1 and the ion source temperature was 230 °C. The identification of the compounds were conducted by comparison of their retention times and mass spectra with those of available authentic standards and with those recorded in NIST library (Version 2.0d, 2005). The concentration of isoamyl acetate, phenylethyl acetate, ethyl hexanoate, ethyl octanoate, ethyl decanoate, ethyl dodecanoate and limonene was measured by comparison with calibration curves made with the reference compounds (supplied by Fluka, Munich, Germany) under the same conditions. Each sample was analysed in triplicate.

In need of validation before application, the extraction protocol was inspected with regard to repeatability of the method and recovery of the six esters using 5 g “sterile OP fermented for 48 h” as a matrix. The recovery was examined at two concentration levels of addition (2 mg/L and 40 mg/L) for each ester standard. A recovery ranging from 88.4 to 103% (n = 5) and a coefficient of variation of the measurement less than 7.43% (n = 5) confirmed that the extraction method used was accurate and convenient for quantitative analysis.

2.8. Pectin extraction
Pectin was extracted from OP using ethylenediamine tetra acetic acid (EDTA) (Sigma–Aldrich, Milan, Italy) in acidic environment (pH 1.5). Specifically, OP was treated with 0.05 M EDTA (prepared by dissolving 1.46 g of EDTA powder into 100 mL of distilled water and adjusting the pH to 1.5) at a ratio 1:20. The extraction took place at 80 °C for 20 min. Pectin was then precipitated and separated from the solution by mixing 15 mL of the extracted solution with 25 mL of heated 95% ethanol (Sigma–Aldrich). The mixture was heated in a water bath at 80 °C under vigorous mixing. After centrifugation for 15 min at 4500 rpm the supernatant was discarded and the sediment was further washed with ethanol and centrifuged repeatedly until there was no sugar left. Five percent 1-naphthol (Sigma–Aldrich), dissolved in ethanol, was used to detect the presence of sugars (appearance of purple colour indicates positive reaction). The recovered pectin was determined gravimetrically after drying at 105 °C for 4 h.

2.9. Extraction of phenolic compounds and determination of total phenol content
The phenolic compounds were extracted from the peels after tissue rupture by freezing and thawing, using liquid nitrogen, and then by manual

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. ยีสต์การแจงนับตัวอย่าง 10 กรัมในน้ำ peptonized (90 mL) และ homogenized กับแผงประดับหน้าอก 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ส่วนผสมเป็นเนื้อเดียวกันใช้เป็นหุ้นสำหรับการทำทศนิยม dilutions สมน้ำ peptonized และชุบบนอาหาร Chloramphenicol โรสเบงกอล (RBCA Oxoid CM 549 เสริม ด้วย SR 78 จำกัด Oxoid, Hants สหราชอาณาจักร) วัฒนธรรมได้รับการกกที่ 30 ° C เพื่อกำหนดประชากรยีสต์ 48 ชั่วโมง ผลลัพธ์ถูกแสดงใน อาหรับ/g log10 ของพื้นผิว2.5. ออปติคัลไมโครสโคสังเกตจุลินทรีย์ของอาณานิคมแต่ละที่ปรากฏบนแผ่นจำนวน Agar (Merck 1.05463) และ RBCA หลังจากชุบตัวอย่างการหมักเหมือนที่เจือจางเหมาะสมและบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C สำหรับ 48 ชั่วโมงดำเนินการ โดยใช้ Zeiss Axiolab สะท้อนแสงกล้องจุลทรรศน์ (ขนาด× 100) พร้อมกับ Canon Power Shot G 2 มม. (Canon โตเกียว ญี่ปุ่น) ถ่ายภาพกล้อง2.6. การกำหนดปริมาณคาร์บอนที่ตกค้างสารสกัดจากน้ำได้รับจากตัวอย่าง 5 กรัม โดยเติมน้ำกลั่นอัตราส่วน 5:1 (v/w) แยกรับการช่วยเหลือ โดยการกวนกลใช้ homogenizer เป็นพิเศษ Turrax T25 (สควิด Labortechnik, Staufen เยอรมนี) สำหรับ 30 s และการหมุนเหวี่ยงที่ 4500 rpm 10 นาทีเพื่อเอาอนุภาคแข็ง น้ำตาลส่วนที่เหลือถูกกำหนดใน aliquots ของสารสกัดน้ำ spectrophotometrically โดยวิธีการของ Dubois et al. [26]2.7 การแยกของ volatilesFlavour-active compounds were extracted from 5 g sample with the addition of dichloromethane up to a 2:1 (v/w) ratio (shaking for about 2 h at 20 °C). The organic fractions were dried over anhydrous Na2SO4 and concentrated initially to 2 mL in a Vigreux column and then under a slow nitrogen stream up to a final volume of 500 μL. The crude extracts were kept at −18 °C until further analysis. Final extracts were analysed both qualitatively and quantitatively as described by Mantzouridou and Paraskevopoulou [8]. An Agilent 6890A gas chromatograph (USA) equipped with MSD 5973 mass spectrometer (MS) as well as an Agilent 6890A gas chromatograph equipped with a flame ionization detector (FID) were used. Volatile compounds were separated on a HP-FFAP column (25 m × 0.20 mm i.d., film thickness 0.30 μm) with helium as carrier gas (2 mL/min). The oven temperature was kept at 40 °C for 2 min and then raised to 230 °C at a rate of 10 °C min−1 (4 min). The injector and the transfer line temperatures were set at 230 and 240 °C, respectively. The injection volume was 2 μL (split ratio 100:1). The MS was operated in the EI mode at 70 eV, scanning the range 35–350 m/z at a scan rate of 2 scans s−1 and the ion source temperature was 230 °C. The identification of the compounds were conducted by comparison of their retention times and mass spectra with those of available authentic standards and with those recorded in NIST library (Version 2.0d, 2005). The concentration of isoamyl acetate, phenylethyl acetate, ethyl hexanoate, ethyl octanoate, ethyl decanoate, ethyl dodecanoate and limonene was measured by comparison with calibration curves made with the reference compounds (supplied by Fluka, Munich, Germany) under the same conditions. Each sample was analysed in triplicate.In need of validation before application, the extraction protocol was inspected with regard to repeatability of the method and recovery of the six esters using 5 g “sterile OP fermented for 48 h” as a matrix. The recovery was examined at two concentration levels of addition (2 mg/L and 40 mg/L) for each ester standard. A recovery ranging from 88.4 to 103% (n = 5) and a coefficient of variation of the measurement less than 7.43% (n = 5) confirmed that the extraction method used was accurate and convenient for quantitative analysis.2.8. Pectin extractionPectin was extracted from OP using ethylenediamine tetra acetic acid (EDTA) (Sigma–Aldrich, Milan, Italy) in acidic environment (pH 1.5). Specifically, OP was treated with 0.05 M EDTA (prepared by dissolving 1.46 g of EDTA powder into 100 mL of distilled water and adjusting the pH to 1.5) at a ratio 1:20. The extraction took place at 80 °C for 20 min. Pectin was then precipitated and separated from the solution by mixing 15 mL of the extracted solution with 25 mL of heated 95% ethanol (Sigma–Aldrich). The mixture was heated in a water bath at 80 °C under vigorous mixing. After centrifugation for 15 min at 4500 rpm the supernatant was discarded and the sediment was further washed with ethanol and centrifuged repeatedly until there was no sugar left. Five percent 1-naphthol (Sigma–Aldrich), dissolved in ethanol, was used to detect the presence of sugars (appearance of purple colour indicates positive reaction). The recovered pectin was determined gravimetrically after drying at 105 °C for 4 h.2.9. Extraction of phenolic compounds and determination of total phenol contentThe phenolic compounds were extracted from the peels after tissue rupture by freezing and thawing, using liquid nitrogen, and then by manual

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ยีสต์การแจงนับ
ตัวอย่าง 10 กรัมถูกย้ายในน้ำ peptonized (90 มิลลิลิตร) และปั่นด้วย Stomacher เวลา 1 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ส่วนผสมเป็นเนื้อเดียวกันถูกใช้เป็นวิธีการแก้ปัญหาสต็อกสำหรับการทำให้เจือจางทศนิยมที่เหมาะสมในน้ำ peptonized และชุบโรสเบงกอล Chloramphenicol วุ้น (RBCA; Oxoid CM 549 เสริมกับอาร์ 78, Oxoid จำกัด ทส์, สหราชอาณาจักร) วัฒนธรรมที่ถูกบ่มเป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสในการกำหนดประชากรยีสต์ ผลลัพธ์ที่ได้แสดงใน log10 CFU / g ของพื้นผิว. 2.5 กล้องจุลทรรศน์ Optical จุลินทรีย์สังเกตของแต่ละอาณานิคมที่ปรากฏบนแผ่นนับวุ้น (เมอร์ค 1.05463) และ RBCA หลังจากชุบเจือจางเหมาะสมตัวอย่างหมักเนื้อเดียวกันและการบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงได้ดำเนินการโดยใช้ Zeiss Axiolab สะท้อนแสงกล้องจุลทรรศน์ (100 ×ขนาด ) พร้อมกับ Canon Power Shot G 2 มิลลิเมตร (Canon, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) กล้องถ่ายภาพ. 2.6 การหาปริมาณคาร์บอนที่เหลือน้ำสารสกัดที่ได้รับจาก 5 กรัมตัวอย่างโดยการเติมน้ำกลั่นได้ถึง 5: 1 (v / W) อัตราการ สกัดได้รับการช่วยเหลือโดยการกวนกลโดยใช้อัลตร้า Turrax T25 homogenizer (IKA Labortechnik, Staufen, เยอรมนี) เป็นเวลา 30 วินาทีและการหมุนเหวี่ยงที่ 4500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีในการลบอนุภาคของแข็ง น้ำตาลที่เหลือได้รับการพิจารณาใน aliquots ของสารสกัดในน้ำ spectrophotometrically โดยวิธีบัว et al, [26]. 2.7 การแยกสารระเหยสารประกอบรสที่ใช้งานถูกสกัดจาก 5 กรัมตัวอย่างด้วยนอกเหนือจากไดคลอโรมีเทนขึ้นไป 2: 1 (v / W) อัตรา (เขย่าประมาณ 2 ชั่วโมงที่ 20 ° C) เศษส่วนอินทรีย์แห้งมากกว่าปราศจาก Na2SO4 และเข้มข้นแรก 2 มิลลิลิตรในคอลัมน์ Vigreux แล้วภายใต้ไนโตรเจนช้าสตรีมได้ถึงเล่มสุดท้ายของ 500 ไมโครลิตร สารสกัดน้ำมันดิบถูกเก็บไว้ที่ -18 ° C จนการวิเคราะห์ต่อไป สารสกัดจากรอบชิงชนะเลิศที่ได้มาวิเคราะห์ทั้งในเชิงคุณภาพและเชิงปริมาณตามที่อธิบาย Mantzouridou และ Paraskevopoulou [8] ก๊าซ chromatograph Agilent 6890A (USA) พร้อมกับเอ็มเอส 5973 สเปกโตรมิเตอร์มวล (MS) เช่นเดียวกับก๊าซ Chromatograph Agilent 6890A พร้อมกับตรวจจับเปลวไฟไอออนไนซ์ (FID) ถูกนำมาใช้ สารระเหยที่ถูกแยกออกในคอลัมน์ HP-FFAP (25 เมตร× 0.20 มิลลิเมตร id, ความหนาของฟิล์ม 0.30 ไมครอน) กับฮีเลียมเป็นก๊าซ (2 มิลลิลิตร / นาที) อุณหภูมิเตาอบได้รับการเก็บรักษาไว้ที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีแล้วยกขึ้นถึง 230 ° C ที่อัตรา 10 องศาเซลเซียสนาที 1 แห่ง (4 นาที) หัวฉีดและการถ่ายโอนอุณหภูมิบรรทัดถูกตั้งไว้ที่ 230 และ 240 ° C ตามลำดับ ปริมาณการฉีด 2 ไมโครลิตร (100 อัตราส่วนแยก: 1) นางสาวดำเนินการในโหมด EI ที่ 70 eV สแกนช่วง 35-350 เมตร / z ในอัตราที่สแกน 2 สแกน S-1 และอุณหภูมิแหล่งกำเนิดไอออน 230 ° C บัตรประจำตัวของสารประกอบได้ดำเนินการโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาของพวกเขาและมวลสเปกตรัมกับบรรดามาตรฐานของแท้ที่มีอยู่และมีผู้บันทึกไว้ในห้องสมุด NIST (เวอร์ชั่น 2.0D, 2005) ความเข้มข้นของอะซิเตท isoamyl, phenylethyl อะซิเตทเอทิล hexanoate เอทิล octanoate เอทิล decanoate เอทิล dodecanoate และ limonene โดยวัดจากการเปรียบเทียบกับเส้นโค้งการสอบเทียบที่ทำด้วยสารอ้างอิง (จัดทำโดย Fluka, มิวนิค, เยอรมนี) ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน แต่ละตัวอย่างมาวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่า. ในความต้องการของการตรวจสอบก่อนที่จะประยุกต์โปรโตคอลสกัดถูกตรวจสอบในเรื่องเกี่ยวกับการทำซ้ำของวิธีการและการฟื้นตัวของเอสเทอใช้ 5 กรัมหกด้วย "OP หมันหมักเป็นเวลา 48 ชั่วโมง" เป็นเมทริกซ์ การฟื้นตัวของการตรวจสอบในสองระดับความเข้มข้นของการเติม (2 มิลลิกรัม / ลิตรและ 40 มิลลิกรัม / ลิตร) สำหรับแต่ละมาตรฐานเอสเตอร์ ฟื้นตัวตั้งแต่ 88.4-103% (n = 5) และสัมประสิทธิ์การแปรผันของการวัดน้อยกว่า 7.43% A (n = 5) ยืนยันว่าวิธีการสกัดที่ใช้ถูกต้องและสะดวกสบายสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณ. 2.8 การสกัดเพคตินเพคตินที่สกัดจาก OP ใช้ ethylenediamine Tetra กรดอะซิติก (EDTA) (Sigma-Aldrich, มิลาน, อิตาลี) ในสภาพแวดล้อมที่เป็นกรด (pH 1.5) โดยเฉพาะ OP รับการรักษาด้วย 0.05 M EDTA (จัดทำโดยการละลาย 1.46 กรัมผง EDTA เป็น 100 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นและการปรับค่า pH 1.5) ในอัตราส่วน 1:20 การสกัดเอาสถานที่ที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที เพคตินที่ได้รับการตกตะกอนแล้วและแยกออกจากการแก้ปัญหาโดยการผสม 15 มลของการแก้ปัญหาสกัดด้วย 25 มลอุ่นเอทานอล 95% (Sigma-Aldrich) ส่วนผสมที่ถูกความร้อนในอ่างน้ำที่ 80 ° C ภายใต้พลังผสม หลังจากการหมุนเหวี่ยงนาน 15 นาทีที่ 4500 รอบต่อนาทีใสที่ถูกทิ้งและตะกอนถูกล้างต่อไปด้วยเอทานอลและหมุนเหวี่ยงซ้ำ ๆ จนกระทั่งไม่มีซ้ายน้ำตาล ห้าร้อยละ 1 naphthol (Sigma-Aldrich) ละลายในเอทานอลถูกใช้ในการตรวจสอบสถานะของน้ำตาล (ลักษณะของสีม่วงบ่งชี้ปฏิกิริยาบวก) เพคตินกู้คืนได้ถูกกำหนด gravimetrically หลังจากการอบแห้งที่อุณหภูมิ 105 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 ชม. 2.9 การสกัดสารฟีนอลและความมุ่งมั่นของเนื้อหาฟีนอลรวมสารประกอบฟีนอลถูกสกัดจากเปลือกหลังจากการแตกเนื้อเยื่อโดยการแช่แข็งและละลายโดยใช้ไนโตรเจนเหลวแล้วโดยคู่มือ