TUNEL (terminal deoxynucleotidyl tr

TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling) is a method of choice for rapid identification and quantification of the apoptotic cell fraction in cultured cell preparations. However, TUNEL application has been restricted to a narrow spectrum of sample conditions, and only detergents have been proposed as labeling enhancers. This study was aimed at extending TUNEL to variously fixed cells and improving TUNEL sensitivity by optimized pretreatments, the specificity being assessed by reference to the apoptotic morphology. Comparative TUNEL was performed with three protocols on CEM-C7 cells, a model of glucocorticoid-induced apoptosis. Samples were submitted to six modalities of fixation and TUNEL was performed after each of the following conditions: no pretreatment; detergent permeabilization; proteolytic digestion; microwave irradiation; and a recently published combination of the latter two. The proportion of TUNEL-stained elements within the cell fraction, with and without apoptotic morphology, was quantified. Our results showed that: (a) with an adequate pretreatment, reliable TUNEL can be obtained after each fixative tested; (b) detergent was inefficient in improving sensitivity; (c) whatever the fixation, microwave pretreatment provided the best TUNEL sensitivity without notable loss of specificity; (d) under adaptive technical conditions, TUNEL can be associated with detection of various proteins by double labeling; and (e) the existence of a limited population of intensely TUNEL-positive cells that lacked apoptotic morphology contributes to the current debate about a preapoptotic state.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

TUNEL (เทอร์มินัล deoxynucleotidyl transferase สื่อ dUTP นิติดฉลากสิ้น) เป็นวิธีการที่เลือกสำหรับรหัสอย่างรวดเร็วและนับจำนวนเซลล์ apoptotic เศษส่วนในการเตรียมเซลล์ล้าง อย่างไรก็ตาม โปรแกรม TUNEL จำกัดมีเงื่อนไขตัวอย่างสเปคตรัมแคบ ๆ และผงซักฟอกเท่านั้นได้รับการเสนอเป็นฉลากเพิ่ม การศึกษานี้มุ่งขยาย TUNEL ถาวรเพิ่มเซลล์ และเพิ่มความไวของ TUNEL โดย pretreatments เหมาะสม ความจำเพาะที่ถูกประเมิน โดยอ้างอิงถึงสัณฐาน apoptotic เปรียบเทียบ TUNEL ดำเนินการกับโพรโทคอสามในเซลล์ CEM C7 แบบจำลอง glucocorticoid เกิดตาย ตัวอย่างส่งมาที่รังสีหกของการตรึง และ TUNEL ดำเนินการหลังจากแต่ละเงื่อนไขต่อไปนี้: ปรับสภาพไม่ ผงซักฟอก permeabilization ย่อยโปรตีนย่อย ฉายรังสีไมโครเวฟ และเผยแพร่เมื่อเร็ว ๆ นี้ชุดของทั้งสองหลัง คือวัดสัดส่วนของ TUNEL ย้อมสีองค์ประกอบภายในเซลล์ส่วน มี และไม่ มีลักษณะทางสัณฐาน วิทยา apoptotic ผลของเราแสดงให้เห็นว่า: (ก) มีการปรับสภาพที่เพียงพอ TUNEL ที่เชื่อถือได้สามารถรับได้หลังจากตรึงละทดสอบ (ข) ผงซักฟอกคือขาดประสิทธิภาพในการปรับปรุงความไว (ค) สิ่งตรึง ไมโครเวฟปรับสภาพให้ไว TUNEL ที่ดีที่สุดโดยไม่สูญเสียความจำเพาะ โดดเด่น (ง) ภายใต้เงื่อนไขทางเทคนิคที่ปรับ TUNEL สามารถเชื่อมโยงกับการตรวจจับของโปรตีนต่าง ๆ โดยติดฉลากคู่ และ (e) การดำรงอยู่อย่างเข้มข้น TUNEL บวกเซลล์ที่ขาดสัณฐาน apoptotic ประชากรจำกัดก่อให้เกิดการโต้เถียง preapoptotic สถานะปัจจุบัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

TUNEL (ขั้ว deoxynucleotidyl transferase พึ่ง dUTP นิคสิ้นการติดฉลาก) เป็นวิธีการของทางเลือกสำหรับประชาชนอย่างรวดเร็วและการหาปริมาณของส่วนเซลล์ apoptotic ในการเตรียมเซลล์เพาะเลี้ยง แต่โปรแกรม TUNEL ได้รับการ จำกัด ให้แคบสเปกตรัมของเงื่อนไขตัวอย่างและมีเพียงผงซักฟอกได้รับการเสนอเป็นเพิ่มการติดฉลาก การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อขยายเซลล์ TUNEL คงที่แตกต่างและการปรับปรุงความไว TUNEL โดยการเตรียมการที่ดีที่สุดที่เฉพาะเจาะจงที่ถูกประเมินโดยอ้างอิงถึงลักษณะทางสัณฐานวิทยา apoptotic TUNEL เปรียบเทียบได้ดำเนินการกับสามโปรโตคอลเซลล์ CEM-C7, รูปแบบของการตายของเซลล์ glucocorticoid-เหนี่ยวนำ ตัวอย่างที่ถูกส่งมาถึงหกรังสีของการตรึงและ TUNEL ได้ดำเนินการหลังจากที่แต่ละเงื่อนไขต่อไปนี้: การปรับสภาพไม่; permeabilization ผงซักฟอก; การย่อยโปรตีน; การฉายรังสีไมโครเวฟ และการรวมกันตีพิมพ์เมื่อเร็ว ๆ นี้ของทั้งสองฝ่าย สัดส่วนขององค์ประกอบ TUNEL เปื้อนภายในเสี้ยวเซลล์ที่มีและไม่มีลักษณะทางสัณฐานวิทยา apoptotic ถูกวัด ผลของเราแสดงให้เห็นว่า (ก) ที่มีการปรับสภาพอย่างเพียงพอและเชื่อถือได้ TUNEL สามารถได้รับหลังจากที่แต่ละตรึงทดสอบ; (ข) เป็นผงซักฟอกที่ไม่มีประสิทธิภาพในการปรับปรุงความไว; (ค) สิ่งที่ตรึงไมโครเวฟปรับสภาพให้ไว TUNEL ที่ดีที่สุดโดยไม่สูญเสียความโดดเด่นของความจำเพาะ; (ง) ภายใต้เงื่อนไขทางเทคนิคปรับ TUNEL สามารถเชื่อมโยงกับการตรวจสอบของโปรตีนต่างๆโดยการติดฉลากคู่ และ (จ) การดำรงอยู่ของประชากร จำกัด ของเซลล์ TUNEL บวกอย่างแรงกล้าที่ขาดสัณฐาน apoptotic ก่อให้เกิดการอภิปรายในปัจจุบันเกี่ยวกับรัฐ preapoptotic