Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 89,

Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 89, pp. 11486-11489, December 1992 Neurobiology Borna disease virus, a negative-strand RNA virus, transcribes in the nucleus of infected cells (central nervous system infection/behavioral disorders) THOMAS BRIESE*t, JUAN CARLOS DE LA TORREt, ANN LEWIS§, HANNS LUDWIG*, AND W. IAN LIPKIN§¶ *Institute of Virology, Free University of Berlin, Nordufer 20, D 1000 Berlin 65, Federal Republic of Germany; tDepartment of Neuropharmacology, Scripps Research Institute, 10666 North Torrey Pines Road, La Jolla, CA 92037; and IDepartments of Anatomy and Neurobiology, Neurology, and Microbiology and Molecular Genetics, University of California, Irvine, CA 92717 Communicated by D. Carleton Gajdusek, September 1, 1992 (received for review April 22, 1992) ABSTRACT Borna disease virus, an uncas ied Infectious agent, causes immune-mediated neurologic disease in a wide variety of animal hosts and may be involved in pathogenesis of selected neuropsychiatric diseases in man. 1nitial reports suggested that Borna disease virus is a singlesranded RNA virus. We describe here a method for isolatin of viral particles that has allowed definitive identification of the genome as containg a negative-polarity RNA. Further, we show that the viral mRNAs are transcribed in the nucleus. Borna disease is an immune-mediated behavioral syndrome caused by infection with an unclassified agent, Borna disease virus (BDV). Though natural infection has only been confirmed to occur in horses and sheep, the potential host range of BDV includes other mammals and birds. Experimental infection of birds, rodents, and primates leads to the expression of BDV proteins in neural tissues, meningoencephalitis, and behavioral disturbances (1). Antibodies reactive with BDV proteins have been found in patients with neuropsychiatric diseases, suggesting the possibility that BDV or a related virus may be a human pathogen (2-7). Though the agent has not been identified by electron microscopy, molecular approaches have facilitated its partial characterization. BDV cDNA clones have been isolated by subtractive screening of libraries prepared from infected rat brain (8) and infected cells (6). Analyses of BDV transcripts in Northern and in situ hybridization experiments have indicated that BDV is likely to be a single-stranded RNA virus with a genome of 8.5 (8, 9) to 10 kilobases (kb) (6). The polarity of the viral genome has been controversial (6, 8-11). Here we report that infectious BDV particles contain a negative-polarity 8.5-kb RNA and demonstrate that viral mRNAs are synthesized in cell nuclei. MATERIALS AND METHODS Virus Particle Preparation. Oligo/TL, an human oligodendrocyte cell line (12), was infected at an estimated multiplicity of infection of 0.5 focus-forming unit per cell using BD rat brain homogenate (strain V, sixth rat passage) (13-15). Cells were passed every 2-3 days and used for virus particle preparation in passages 10 through 25. Infectious virus was titered in a cell-ELISA system (16). The confluent cell layer (1-2 x 108 cells) was washed once with 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), overlaid with 20 mM Tris HCl, pH 7.4/250 mM MgCl2 (Tris-Mg250 buffer), and incubated for 1.5 hr

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สหรัฐอเมริกา proc. Natl. Acad. Sci. ปี 89 นำ 11486-11489, 1992 ธันวาคม Neurobiology Borna โรคไวรัส การลบเดอะอาร์เอ็นเอไวรัส transcribes ในนิวเคลียสของเซลล์ติดเชื้อ (ระบบประสาทส่วนกลางโรคติดเชื้อ/พฤติกรรม) โทมัส BRIESE * t ฮวนคาร์ลอสเดอลา TORREt, ANN LEWIS§ ลุดวิกแห่ง HANNS * และปริมาณเอียน LIPKIN§¶ * สถาบันชเป็น มหาวิทยาลัยเสรีแห่งเบอร์ลิน Nordufer 20 เบอร์ลิน D 1000 65ประเทศสาธารณรัฐเยอรมนี tDepartment Neuropharmacology, Scripps วิจัย สถาบัน ถนนเหนือ Torrey ไพน์ 10666, La Jolla, CA 92037 และ IDepartments กายวิภาคศาสตร์ และ Neurobiology ประสาทวิทยา และจุลชีววิทยา และอณูพันธุ ศาสตร์ มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย เออร์วิน CA 92717 Communicated โดย D. Carleton Gajdusek, 1 กันยายน 1992 (ได้รับการตรวจทานที่ 22 เมษายน 1992) บทคัดย่อ Borna โรคไวรัส การ uncas ต่าง ๆ ติดเชื้อแทน ทำ mediated ภูมิคุ้มกันโรค neurologic ในโฮสต์สัตว์ที่หลากหลาย และอาจเกี่ยวข้องกับพยาธิกำเนิดของโรค neuropsychiatric เลือกในคน 1nitial รายงานแนะนำว่า ไวรัสโรค Borna singlesranded อาร์เอ็นเอไวรัส ที่นี่เราอธิบายวิธีการ isolatin ของอนุภาคไวรัสที่ได้รับอนุญาตรหัสทั่วไปของกลุ่มที่เป็น containg อาร์เอ็นเอเป็นขั้วลบ ต่อไป เราแสดงว่า mRNAs ไวรัสจะทับศัพท์ในนิวเคลียส โรค Borna เป็นการ mediated ภูมิคุ้มกันพฤติกรรมอาการเกิดจากการติดเชื้อกับตัวแทนไม่ได้แยกประเภท ไวรัสโรค Borna (BDV) แต่ยืนยันติดเชื้อตามธรรมชาติเกิดขึ้นในม้า และแกะ เป็นโฮสต์ช่วงของ BDV เท่านั้น รวมถึงการเลี้ยงลูกด้วยนมและนกอื่น ๆ ทดลองติดเชื้อของนก งาน และ primates นำไปสู่ค่าของ BDV โปรตีนในเนื้อเยื่อประสาท meningoencephalitis และเกิดพฤติกรรม (1) แอนตี้ปฏิกิริยากับ BDV โปรตีนพบในผู้ป่วยโรค neuropsychiatric แนะนำความเป็นไปได้ว่า BDV หรือไวรัสที่เกี่ยวข้องอาจจะเป็นการศึกษามนุษย์ (2-7) แม้ไม่ได้ระบุ โดย microscopy อิเล็กตรอนตัวแทน วิธีโมเลกุลมีบริการจำแนกเป็นบางส่วน BDV cDNA โคลนได้รับแยกต่างหาก โดยคัดกรอง subtractive ของไลบรารีที่เตรียมจากสมองหนูที่ติดเชื้อ (8) และเซลล์ติดเชื้อ (6) วิเคราะห์ใบแสดงผล BDV เหนือและทดลองใน situ hybridization ได้บ่งชี้ว่า BDV จะ ควั่นเดียวไวรัสอาร์เอ็นเอ มีจีโนมของ 8.5 (8, 9) กับ kilobases 10 (kb) (6) ขั้วของกลุ่มไวรัสได้แย้ง (6, 8-11) ที่นี่เรารายงานว่า ติดเชื้ออนุภาค BDV ประกอบด้วยอาร์เอ็นเอ 8.5 kb เป็นขั้วลบ และแสดงให้เห็นว่า มีสังเคราะห์ไวรัส mRNAs ในแอลฟาเซลล์ วัสดุและวิธีการเตรียมอนุภาคไวรัส Oligo/TL บรรทัดเซลล์มนุษย์ oligodendrocyte (12), มีการติดเชื้อที่มีมากมายหลายหลากโดยประมาณติดเชื้อ 0.5 หน่วยความขึ้นต่อเซลล์ใช้ BD หนูสมอง homogenate (ต้องใช้ V หกราชกาล) (13-15) เซลล์ถูกส่งผ่านทุก ๆ 2-3 วัน และใช้สำหรับการเตรียมอนุภาคไวรัสในทางเดิน 10 ถึง 25 ติดเชื้อไวรัสเป็น titered ในระบบเซลล์ ELISA (16) ชั้นเซลล์ confluent (1-2 x 108 เซลล์) ถูกล้าง ด้วย 20 มม. overlaid กับ 20 มม.ทริสเรทติ้ง HCl ค่า pH 7.4/250 มม. MgCl2 (ตรี Mg250 บัฟเฟอร์), ทริสเรทติ้ง HCl (pH 7.4), และ incubated 1.5 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พร Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกาฉบับ 89, pp. 11486-11489, ธันวาคม 1992 ไวรัสโรคชีววิทยา Borna, RNA ไวรัสลบสาระ transcribes ในนิวเคลียสของเซลล์ที่ติดเชื้อ (ระบบประสาทส่วนกลางติดเชื้อ / ความผิดปกติของพฤติกรรม) THOMAS BRIESE * t, Juan Carlos DE LA TORREt, ANN LEWIS§, HANNS LUDWIG * และดับบลิวเอียนLIPKIN§¶ * สถาบันไวรัสวิทยา, ฟรีมหาวิทยาลัยเบอร์ลิน Nordufer 20 D 1000 เบอร์ลิน 65, สหพันธ์สาธารณรัฐเยอรมนี tDepartment ของ Neuropharmacology, Scripps Research Institute, 10666 เหนือ Torrey Pines ถนน La Jolla, CA 92037; และ IDepartments กายวิภาคศาสตร์และชีววิทยาวิทยาและจุลชีววิทยาและอณูพันธุศาสตร์, มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนียเออร์ไวน์, CA 92717 สื่อสารโดย D. Carleton Gajdůšek, 1 กันยายน 1992 (รับสำหรับความคิดเห็น 22 เมษายน 1992) บทคัดย่อ Borna ไวรัสโรค UNCAS IED ตัวแทนติดเชื้อทำให้เกิดโรคทางระบบประสาทระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายในหลากหลายของครอบครัวสัตว์และอาจจะมีส่วนร่วมในการเกิดโรคของโรค neuropsychiatric ในมนุษย์ รายงาน 1nitial ชี้ให้เห็นว่าไวรัสโรค Borna เป็นไวรัส RNA singlesranded ที่นี่เราอธิบายวิธีการ isolatin ของอนุภาคไวรัสที่ได้รับอนุญาตให้ระบุตัวตนที่ชัดเจนของจีโนมเป็น containg RNA เชิงลบขั้ว นอกจากนี้เราแสดงให้เห็นว่า mRNAs ไวรัสจะคัดลอกในนิวเคลียส โรค Borna เป็นดาวน์ซินโดรพฤติกรรมระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายที่เกิดจากการติดเชื้อตัวแทนไม่เป็นความลับไวรัสโรค Borna (BDV) แม้ว่าการติดเชื้อตามธรรมชาติมีเพียงการยืนยันที่จะเกิดขึ้นในม้าและแกะช่วงโฮสต์ที่มีศักยภาพของ BDV รวมถึงการเลี้ยงลูกด้วยนมและนกอื่น ๆ การติดเชื้อของนกหนูและลิงจะนำไปสู่​​การแสดงออกของโปรตีน BDV ในเนื้อเยื่อระบบประสาทสมองอักเสบและพฤติกรรมที่ผิดปกติ (1) แอนติบอดีปฏิกิริยากับโปรตีน BDV ได้รับการพบในผู้ป่วยที่มีโรค neuropsychiatric บอกความเป็นไปได้ที่ BDV หรือไวรัสที่เกี่ยวข้องอาจจะเป็นเชื้อโรคของมนุษย์ (2-7) แม้ว่าตัวแทนยังไม่ได้รับการยืนยันจากกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนวิธีโมเลกุลมีการอำนวยความสะดวกของตัวละครบางส่วน BDV cDNA โคลนได้รับการแยกโดยการตรวจคัดกรอง subtractive ของห้องสมุดจัดทำขึ้นจากสมองของหนูที่ติดเชื้อ (8) และเซลล์ที่ติดเชื้อ (6) การวิเคราะห์จิตบำบัด BDV ในภาคเหนือและในแหล่งกำเนิดการทดลองผสมข้ามพันธุ์ได้ชี้ให้เห็นว่า BDV จะเป็นไวรัส RNA สายเดี่ยวสายกับจีโนม 8.5 (8, 9) ถึง 10 kilobases (KB) (6) ขั้วของจีโนมของไวรัสที่ได้รับความขัดแย้ง (6, 8-11) ที่นี่เรารายงานว่าอนุภาค BDV ติดเชื้อมีขั้วลบ RNA 8.5 กิโลและแสดงให้เห็นว่า mRNAs ไวรัสมีการสังเคราะห์ในนิวเคลียสของเซลล์ วัสดุและวิธีการเตรียมอนุภาคไวรัส Oligo / TL, โอลิโกเดนโดรไซต์เซลล์ของมนุษย์ (12) ได้รับการติดเชื้อที่หลายหลากของการติดเชื้อประมาณ 0.5 โฟกัสการจัดตั้งหน่วยต่อเซลล์โดยใช้ BD homogenate สมองของหนู (สายพันธุ์ V ทางเดินของหนูที่หก) (13-15) เซลล์ที่ถูกส่งผ่านไปทุก 2-3 วันและใช้สำหรับการเตรียมอนุภาคไวรัสในทางเดินที่ 10 ถึง 25 ติดเชื้อไวรัส titered ในระบบเซลล์ ELISA (16) ชั้นเซลล์ไหลมารวมกัน (1-2 x 108 เซลล์) ได้รับการล้างครั้งเดียวกับ 20 มิลลิเมตร Tris-HCl (pH 7.4) ซ้อนทับกับ 20 มม Tris HCl ค่า pH 7.4 / 250 มิลลิ MgCl2 (บัฟเฟอร์ Tris-Mg250) และบ่มเป็นเวลา 1.5 ชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

proc . NATL . ราช . สภาวะโลกร้อน อเมริกา Vol . 89 , . 11486-11489 เดือนธันวาคม 2535 ประสาทชีววิทยาไวรัสโรคบอร์นา , ลบ strand RNA ไวรัสมากในนิวเคลียสของเซลล์ที่ติดเชื้อ ( ติดเชื้อ / ความผิดปกติทางระบบประสาทส่วนกลาง ) โทมัส briese * T , ฮวน คาร์ลอส เด ลา torret Ann Lewis §โครงการลุดวิก , * , และ ยน Lipkin §¶ * สถาบันไวรัสวิทยา มหาวิทยาลัยอิสระเบอร์ลิน nordufer 20 ,65 D 1000 เบอร์ลิน สหพันธ์สาธารณรัฐเยอรมนี tdepartment ของ neuropharmacology สถาบันวิจัย Scripps 10666 เหนือ , ใกล้ถนน , La Jolla , CA 92037 และ idepartments ของกายวิภาคศาสตร์และชีววิทยา ระบบประสาท และจุลชีววิทยาและอณูชีววิทยา มหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนีย เออร์ไวน์ , แคลิฟอร์เนีย 92717 สื่อสารโดย คาร์ลตัน กาดูเซ็ก กันยายน 2535 ( 1 ที่ได้รับความคิดเห็นที่ 22 เมษายน1992 ) โรคไวรัสบอร์นานามธรรม , เอินเคิสได้ตัวแทนติดเชื้อ สาเหตุ immune-mediated ทางประสาทวิทยาโรคในหลากหลายของโฮสต์ของสัตว์ และอาจเกี่ยวข้องกับพยาธิกำเนิดของโรค neuropsychiatric คัดสรรในมนุษย์ รายงาน 1nitial ชี้ให้เห็นว่าโรคไวรัสบอร์นาเป็นไวรัส RNA singlesranded .เราอธิบายที่นี่วิธีการ isolatin อนุภาคของไวรัสที่ได้รับอนุญาตการแตกหักของโครโมโซมเป็น RNA containg เป็นขั้วที่เป็นลบ นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นว่ารหัสไวรัสจะคัดลอกในนิวเคลียส โรคบอร์นาเป็น immune-mediated พฤติกรรมโรคที่เกิดจากการติดเชื้อกับตัวแทน Unclassified ไวรัสโรคบอร์นา ( bdv )แม้ว่าการติดเชื้อในธรรมชาติมีเพียงได้รับการยืนยันที่จะเกิดขึ้นในม้าและแกะ มีศักยภาพเป็นเจ้าภาพช่วง bdv รวมถึงสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและนก การติดเชื้อในคน นก หนู และสัตว์ที่นำไปสู่การแสดงออกของโปรตีนในเนื้อเยื่อประสาท bdv , เยื่อหุ้มสมองกับสมองอักเสบและพฤติกรรมแปรปรวน ( 1 )แอนติบอดีปฏิกิริยากับโปรตีน bdv ได้รับพบได้ในผู้ป่วยโรค neuropsychiatric ชี้ให้เห็นความเป็นไปได้ที่ bdv หรือเกี่ยวข้องไวรัสอาจจะก่อให้เกิดโรคกับมนุษย์ ( 2-7 ) แต่เจ้าหน้าที่ไม่ได้ระบุโดยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนชนิดส่องกราด โมเลกุลของมันมีแนวทางสนับสนุนบางส่วน ทำให้bdv cDNA โคลนได้ถูกแยกโดยการใช้การของห้องสมุดที่เตรียมจากไวรัสสมองหนู ( 8 ) และเซลล์ที่ติดเชื้อ ( 6 ) การวิเคราะห์ bdv transcripts ในภาคเหนือและใน situ hybridization การทดลองได้แสดงให้เห็นว่า bdv น่าจะเดียวควั่น RNA ไวรัสกับจีโนมของ 8.5 ( 8 , 9 ) 10 กิโลเบส ( KB ) ( 6 ) ขั้วของจีโนมของไวรัสมีการโต้แย้ง ( 68-11 ) ที่นี่เรารายงานว่าอนุภาค bdv ติดเชื้อประกอบด้วยลบขั้ว 8.5-kb RNA และแสดงให้เห็นว่า ไวรัสรหัสถูกสังเคราะห์ในเซลล์ นิวเคลียส วัสดุและวิธีการเตรียมอนุภาคไวรัส โอลิโก / TL , มนุษย์เซลล์โอลิโกเดนโดรไซต์ไลน์ ( 12 ) , ติดเชื้อที่หลายหลากของการติดเชื้อประมาณ 0.5 มุ่งเน้นสร้างหน่วยต่อเซลล์ใช้ BD สมองหนูอน ( สายพันธุ์ V ,หนูเดิน 6 ) ( 9 ) เซลล์ก็ผ่านทุก 2-3 วัน และใช้สำหรับการเตรียมอนุภาคไวรัสในหัวข้อ 10 ถึง 25 โรคติดเชื้อไวรัสในเซลล์ ระบบ titered ) ( 16 ) ชั้นเซลล์กระจู๋กระจี๋ ( 1-2 x 108 เซลล์ ) ซักครั้งกับ HCl หรือ 20 มม. ( pH 7.4 ) หุ้มด้วย HCl หรือ 20 มม. , pH 7.4/250 มม. ชุด ( tris-mg250 บัฟเฟอร์ ) และ บ่มประมาณ 1.5 ชม.