Results Here we address the questio

Results Here we address the question of how the large surface-exposed hydrophobic patch of BslA is stabilized in aqueous environments to mediate the surface activity of the protein. One possible trivial mechanism is the formation of higher order oligomers, such as the decamer observed in the BslA crystal structure, or the tetramer observed for the class II fungal hydrophobin HFB II (15). However, although size exclusion chromatography indicated that purified BslA forms a mixture of monomers, dimers, and higher order oligomers (SI Appendix, Figs. S1 and S2), addition of a reducing agent such as dithiothreitol or β-mercaptoethanol yielded a sample containing purely monomeric protein (SI Appendix, Figs. S2 and S3) stable on the timescale of days. BslA contains two closely spaced cysteine residues, and the role of these residues in biofilm formation and/or maturation is as yet unclear. That said, here we show that the oxidation state of the cysteine residue is not important to the in vitro biophysical properties of the protein; dimeric BslA gives equivalent results to that of monomer if we assume that the concentration of surface-active species comprises 50% of the protein in the sample (i.e., only one subunit of the disulfide-bonded dimer is available for surface activity; SI Appendix, Fig. S4). We have therefore established that the monomeric protein is stable and soluble over a timescale of days, suggesting that the large hydrophobic cap we observed in the crystal structure must be shielded in aqueous solution, likely through some form of structural rearrangement. All experiments presented here used monomeric protein unless otherwise stated.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลที่นี่เราอยู่ที่คำถามที่ว่าแพทช์ไม่ชอบน้ำพื้นผิวสัมผัสที่มีขนาดใหญ่ของ BslA มีเสถียรภาพในสภาพแวดล้อมที่น้ำจะไกล่เกลี่ยกิจกรรมพื้นผิวของโปรตีน หนึ่งที่เป็นไปได้เล็กน้อยก็คือกลไกการก่อตัวของ oligomers การสั่งซื้อที่สูงขึ้นเช่น decamer สังเกตในโครงสร้างผลึก BslA หรือ tetramer สังเกตสำหรับชั้นที่สอง hydrophobin HFB เชื้อราที่สอง (15) อย่างไรก็ตามแม้ว่าโคยกเว้นขนาดชี้ให้เห็นว่าบริสุทธิ์ BslA รูปแบบที่มีส่วนผสมของโมโนเมอร์, dimers และ oligomers การสั่งซื้อที่สูงขึ้น (SI ภาคผนวก, มะเดื่อ. S1 และ S2) การเพิ่มขึ้นของรีดิวซ์เช่น dithiothreitol หรือβ-mercaptoethanol ตัวอย่างที่มีผลอย่างหมดจด โปรตีน monomeric (SI ภาคผนวก, มะเดื่อ. S2 และ S3) ในเวลาที่มีเสถียรภาพของวัน BslA มีสองระยะใกล้ cysteine​​ ตกค้างและบทบาทของสารตกค้างเหล่านี้ในการสร้างไบโอฟิล์มและ / หรือการเจริญเติบโตที่ยังไม่มีความชัดเจน ที่กล่าวว่าที่นี่เราแสดงให้เห็นว่าสถานะออกซิเดชันของสารตกค้าง cysteine​​ ไม่ได้เป็นสิ่งสำคัญที่จะในหลอดทดลองคุณสมบัติทางชีวภาพของโปรตีน; dimeric BslA ให้ผลเทียบเท่ากับที่ของโมโนเมอร์ถ้าเราคิดว่าความเข้มข้นของสายพันธุ์พื้นผิวที่ใช้งานประกอบด้วย 50% ของโปรตีนในตัวอย่าง (เช่นเดียว subunit ของ dimer ซัลไฟด์ถูกผูกมัดสามารถใช้ได้สำหรับกิจกรรมผิว SI ภาคผนวก รูป. S4) เราได้สร้างเหตุที่ monomeric โปรตีนมีเสถียรภาพและละลายน้ำได้ในช่วงวันเวลาที่บอกว่าหมวกน้ำขนาดใหญ่ที่เราพบในโครงสร้างผลึกจะต้องมีการป้องกันในการแก้ปัญหาน้ำน่าจะผ่านรูปแบบของการปรับปรุงใหม่ที่มีโครงสร้างบางส่วน ทั้งหมดที่นำเสนอการทดลองใช้ที่นี่โปรตีน monomeric ยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลลัพธ์ที่นี่เราที่อยู่คำถามของวิธีการขนาดใหญ่ ผิวสัมผัสของแพทช์ ) bsla ทรงตัวในสภาพแวดล้อมของสารละลายไกล่เกลี่ยพื้นผิวกิจกรรมของโปรตีน กลไกที่เป็นไปได้คือการก่อตัวของจุกจิกหนึ่งหน่วยระดับสูง เช่น decamer สังเกตใน bsla โครงสร้างผลึก หรือมีสังเกตสำหรับคลาส II เชื้อรา hydrophobin HFB II ( 15 ) อย่างไรก็ตามถึงแม้ว่าขนาดยกเว้นโครมาโตกราฟีพบว่าบริสุทธิ์ bsla รูปแบบส่วนผสมของโมโนเมอร์ ิและระดับสูง ( ซีบริเวณปลายไส้ติ่ง , มะเดื่อ . S1 และ S2 ) , นอกจากนี้ รีดิวซ์ เช่น บัตรแข็ง หรือบีตา - mercaptoethanol ให้ผลอย่างหมดจดวิธีที่มีโปรตีน ( ศรีไส้ติ่ง , มะเดื่อ . S2 และ S3 ) มั่นคงในเวลาของวันbsla ประกอบด้วยสองอย่างใกล้ชิดระยะ 8-12 ตกค้าง และบทบาทของสารตกค้างเหล่านี้ในการสร้างไบโอฟิล์มและ / หรือวุฒิภาวะก็ยังไม่ชัดเจน ที่บอกว่าที่นี่เราแสดงให้เห็นว่าภาวะออกซิเดชันของซีสเตอีนตกค้างไม่ได้สำคัญกับประสิทธิภาพในทางชีวกายภาพคุณสมบัติของโปรตีนท้องเฟ้อ bsla ให้ผลลัพธ์ที่เทียบเท่ากับที่ของโมโนเมอร์ ถ้าเราสมมติว่า สมาธิชนิดของพื้นผิวที่ใช้งานประกอบด้วย 50% ของโปรตีนในตัวอย่าง ( i.e . , เพียงหนึ่งชนิดของไดเมอร์ ผูกพัน พร้อมกิจกรรม ผิวศรีไส้ติ่ง , มะเดื่อ S4 ) เราจึงสร้างโปรตีนที่ละลายน้ำได้เกิดมีเสถียรภาพและผ่านเวลาของวันแนะนำว่า ให้เราสังเกตหมวกขนาดใหญ่ ) ในโครงสร้างผลึกต้องป้องกันในสารละลายจะผ่านบางรูปแบบของการปรับปรุงโครงสร้าง การทดลองที่แสดงที่นี่ใช้วิธีโปรตีน
ยกเว้นที่ระบุเป็นอย่างอื่น