6.3. DNA hybridizationIn addition t

6.3. DNA hybridization

In addition to PCR assays, DNA–DNA hybridization methods were also developed for specific detection of V. parahaemolyticus. Nishibuchi et al. (1985, 1986) con- structed oligodeoxyribonucleotide probes labeled with P32 for detecting tdh gene in V. parahaemolyticus and found that colony hybridization test with the gene probes was more suitable than immunological assays for definitive detection of V. parahaemolyticus that produced positive reactions in the Kanagawa Phenomenon test. Lee et al. (1992) also reported a procedure using synthesized oligonucleotide probe labeled with P32 for direct detection of tdh gene of V. parahaemolyticus in artificially contami- nated foods. In addition, Yamamoto et al. (1992) reported an enzyme-labeled oligonucleotide for detecting both tdh and trh genes by hybridization.
Recently, two non-radioactive probes [alkaline phospha- tase (AP)-labeled and digoxigenin (DIG)-labeled probes] were developed for specific and sensitive detection of tlh gene of V. parahaemolyticus (McCarthy et al., 1999). Based on the AP- and DIG-labeled probe methods, two direct- plating procedures using AP-and DIG-labeled probes to detect the tlh gene were subsequently developed for detecting total V. parahaemolyticus (Gooch et al., 2001). These direct-plating procedures were reported to be equivalent to a modified MPN method using AP-labeled NDA probe for detecting V. parahaemolyticus and could be completed in 1–2 days. However, it may require skilled workers to conduct the tests because both procedures involve colony lift, hybridization, and colorimetric detec- tion with an additional preparation of probe and mem- brane if the digoxigenin-labeled probe method is used.
More recently, Banerjee et al. (2002) developed a rapid DNA probe method for detecting V. parahaemolyticus grown on hydrophobic grid membrane filters (HGMF). In the HGMF procedure, V. parahaemolyticus is detected through hybridization between V. parahaemolyticus DNA immobilized onto HGMF and DIG-labeled probes specific for the tlh gene. Although, the method was reported
capable of detecting V. parahaemolyticus in 1 day after an enrichment process, it is a complicate detecting system involving DNA isolation, synthesis of DIG-labeled probes, preparation of V. parahaemolyticus primers, and colony hybridization.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

6.3. DNA hybridizationนอกจาก PCR assays ดีเอ็นเอ-DNA hybridization วิธีถูกพัฒนาขึ้นสำหรับ specific การตรวจหา V. parahaemolyticus Nishibuchi et al. (1985, 1986) คอน structed oligodeoxyribonucleotide ติดป้าย P32 สำหรับการตรวจหายีน tdh ใน V. parahaemolyticus และพบว่าอาณานิคม hybridization ทดสอบยีนการวัดได้เหมาะสมกว่า assays ภูมิคุ้มกันสำหรับ definitive การตรวจหา V. parahaemolyticus ที่ผลิตปฏิกิริยาเชิงบวกในการทดสอบปรากฏการณ์วะ Lee et al. (1992) รายงานได้โดยใช้กระบวนสังเคราะห์ oligonucleotide สอบสวนกำกับ ด้วย P32 สำหรับการตรวจหายีน tdh ของ V. parahaemolyticus ในอ.ประสพมัจฉาชีพ nated เปื้อนอาหารโดยตรง นอกจากนี้ Yamamoto et al. (1992) รายงานเป็น oligonucleotide ชื่อเอนไซม์สำหรับการตรวจหายีน tdh และ trh โดย hybridizationเมื่อเร็ว ๆ นี้ สองกัมมันตรังสี probes [อัลคาไลน์ phospha-ทะเล (AP) -ป้าย และ digoxigenin (ขุด) -ป้ายหัว] ได้มีพัฒนา specific และตรวจพบสำคัญ tlh ยีนของ V. parahaemolyticus (McCarthy et al. 1999) อิงจากชื่อ AP และขุดสอบสวนวิธีการ ขั้นตอนชุบตรงที่สองใช้ AP- และขุดชื่อวัดเพื่อตรวจหายีน tlh ถูกพัฒนาขึ้นมาสำหรับตรวจจับรวม V. parahaemolyticus (Gooch et al. 2001) ขั้นตอนการชุบโดยตรงเหล่านี้รายงานจะเทียบเท่ากับวิธี MPN modified ใช้ชื่อ AP ระบบ NDA probe สำหรับการตรวจหา V. parahaemolyticus และอาจจะแล้วเสร็จใน 1-2 วัน อย่างไรก็ตาม มันอาจจำเป็นต้องมีฝีมือในการดำเนินการทดสอบเนื่องจากกระบวนการทั้งสองเกี่ยวข้องกับการอาณานิคมลิฟต์ hybridization และโปรด หารือ detec เทียบเคียงกับการเตรียมรบและ mem brane ถ้าใช้วิธีโพรบ digoxigenin ป้ายเมื่อเร็ว ๆ นี้ Banerjee et al. (2002) ได้พัฒนาวิธีการโพรบดีเอ็นเออย่างรวดเร็วสำหรับการตรวจหา V. parahaemolyticus ปลูกบนกริดแบบเมมเบรนฟิลเตอร์ (HGMF) ในขั้นตอน HGMF, V. parahaemolyticus พบผ่าน hybridization ระหว่าง V. parahaemolyticus ตรึง HGMF และป้ายขุดโพรบดีเอ็นเอ specific สำหรับยีน tlh ถึงแม้ว่า วิธีการรายงาน ความสามารถในการตรวจหา V. parahaemolyticus ใน 1 วันหลังจากกระบวนการเพิ่มคุณค่า มันเป็นระบบตรวจจับซับซ้อนเกี่ยวข้องกับการแยกดีเอ็นเอ การสังเคราะห์ป้ายขุดหัว การเตรียมการของ V. parahaemolyticus ไพรเมอร์ และ hybridization อาณานิคม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

6.3 ดีเอ็นเอ

นอกเหนือจากการตรวจ PCR วิธีดีเอ็นเอดีเอ็นเอยังได้รับการพัฒนาสำหรับ speci Fi C การตรวจสอบของ V. parahaemolyticus Nishibuchi et al, (1985, 1986) ทํา structed oligodeoxyribonucleotide ฟิวส์ที่มีป้ายกำกับ P32 สำหรับการตรวจหายีน TDH ใน V. parahaemolyticus และพบว่าการทดสอบอาณานิคมผสมพันธุ์กับฟิวส์ยีนมีความเหมาะสมมากกว่าการตรวจทางภูมิคุ้มกันสำหรับ Fi nitive การตรวจสอบของ V. parahaemolyticus ที่ผลิตปฏิกิริยาในเชิงบวกใน ทดสอบปรากฏการณ์คานากาว่า Lee et al, (1992) ยังมีรายงานขั้นตอนการสอบสวนโดยใช้ oligonucleotide สังเคราะห์ที่มีป้ายกำกับ P32 สำหรับการตรวจสอบโดยตรงของยีน TDH ของ V. parahaemolyticus ใน Arti Fi จากเศษอาหารที่ปนเปื้อน cially นอกจากนี้ยามาโมโตะ, et al (1992) รายงาน oligonucleotide เอนไซม์ที่มีป้ายกำกับสำหรับการตรวจสอบทั้ง TDH และ TRH ยีนโดยการผสมพันธุ์.
เมื่อเร็ว ๆ นี้สอง probes ไม่มีกัมมันตภาพรังสี [อัลคาไลน์ phospha- TASE (AP) และ -labeled digoxigenin (DIG) -labeled probes] ได้รับการพัฒนาสำหรับ speci Fi และ C การตรวจสอบที่มีความสำคัญของยีน TLH ของ V. parahaemolyticus (แมคคาร์ et al., 1999) ขึ้นอยู่กับ AP- และขุดป้ายวิธีการสอบสวนทั้งสองขั้นตอนการชุบโดยตรงและโดยใช้ยานสำรวจ AP-และขุดติดฉลากเพื่อตรวจหายีน TLH ได้รับการพัฒนาต่อมาสำหรับการตรวจสอบ parahaemolyticus V. รวม (กูช et al., 2001) ขั้นตอนเหล่านี้โดยตรงชุบได้รับรายงานว่าเป็นที่เทียบเท่ากับ Modi Fi เอ็ดวิธี MPN ใช้ AP-ที่มีป้ายกำกับสอบสวน NDA สำหรับการตรวจสอบ V. parahaemolyticus และอาจจะแล้วเสร็จใน 1-2 วัน แต่ก็อาจต้องใช้แรงงานที่มีทักษะในการดำเนินการทดสอบเพราะขั้นตอนทั้งสองเกี่ยวข้องกับการยกอาณานิคมการผสมพันธุ์และการจับได้สีที่มีการเตรียมการเพิ่มขึ้นของการสอบสวนและหน่วยความ brane ถ้า digoxigenin ป้ายวิธีการสอบสวนจะใช้.
เมื่อเร็ว ๆ นี้ Banerjee et อัล (2002) การพัฒนาดีเอ็นเอวิธีการสอบสวนอย่างรวดเร็วสำหรับการตรวจสอบ V. parahaemolyticus ที่ปลูกใน lters ชอบน้ำเมมเบรนตาราง Fi (HGMF) ในขั้นตอน HGMF, V. parahaemolyticus มีการตรวจพบผ่านการผสมข้ามพันธุ์ระหว่าง V. parahaemolyticus ดีเอ็นเอตรึงบนยานสำรวจและขุด HGMF ป้าย speci Fi C ยีน TLH แม้ว่าวิธีการที่ได้รับการรายงาน
ความสามารถในการตรวจสอบ V. parahaemolyticus ใน 1 วันหลังจากขั้นตอนการเพิ่มปริมาณมันเป็นระบบที่ซับซ้อนที่เกี่ยวข้องกับการตรวจสอบการแยกดีเอ็นเอสังเคราะห์ของยานสำรวจขุดป้ายเตรียมความพร้อมของ V. parahaemolyticus ไพรเมอร์และอาณานิคมการผสมพันธุ์