Hand-poured gradient gels were gene

Hand-poured gradient gels were generated using Bio-Rad mini gel casting apparatus. The glass
spacer plates consisted of a 1.5 mm spacer, and this was assembled with a short plate creating a
resolving gel volume that accommodated 7.5 mL of resolving gel solution. To generate the acrylamide
gradient, two solutions were generated in separate vessels. The first consisted 0.375 M Tris–Cl pH 8.8,
0.1% SDS, and 4% acrylamide (29:1 acrylamide:bis-acrylamide). The second solution was identical
except that the acrylamide concentration was 15%. To begin polymerization of the acrylamide, 50 mL of a
10% ammonium persulfate solution was added to 10 mL each gel solution followed by 5 mL TEMED. The
solutions were separately mixed gently and thoroughly. Using a 10 mL serological pipet and a Drummond
Pipet-Aid, 3.5 mL of the 4% acrylamide solution was drawn into the pipet, and this was followed
by slowly drawing up an additional 4 mL of the 15% acrylamide solution into the same pipet while
avoiding air bubbles. At this point, the pipet contained a total of 7.5 mL of gel solution consisting of two
phases of acrylamide density. Next, sufficient air was drawn into the pipet to allow a single air bubble to
flow through the 15% acrylamide phase into the 4% phase and to the top of the solution. This causes
mixing of the phases at their interface and creates a semi-linear gradient. The solution was then ejected
into the assembled casting plates at a rate of approximately 0.25 mL per second. Once all 7.5 mL of
solution was ejected, 1 mL of isopropyl alcohol was gently added to the top of the solution and polymerization
was allowed to proceed. When polymerization was complete, the isopropyl alcohol was
removed and the gel was overlaid with a stacking gel solution consisting of 0.125 M Tris–Cl pH 6.8, 0.1%
SDS, and 4% acrylamide along with ammonium persulfate and TEMED. A ten-well comb was inserted
into the top of the stacking gel and polymerization was allowed to completion.
Molecular weight markers consisting of nine proteins of approximate masses 250, 98, 64, 50, 36, 30, 16,
10, and 4 kD were run in lanes 2, 5, and 8 of each gel with the other lanes containing Laemmli sample buffer
(2% SDS, 10% glycerol, 60 mM Tris–Cl pH 6.8, 0.01% bromophenol blue). The same organization of molecular
weight markers was also run on commercially obtained 4–15% gradient gels purchased from Bio-Rad.
Electrophoresis was applied at 100 V with constant voltage until the bromophenol blue dye front reached

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เจเทมือไล่ระดับสีถูกสร้างขึ้นโดยใช้อุปกรณ์หล่อเจมินิ Bio-ล้อ แก้วประกอบด้วยแผ่นสเปเซอร์ spacer 1.5 มม. และนี้ถูกประกอบ ด้วยการสร้างแผ่นสั้นการแก้ไขปริมาณเจที่อาศัย 7.5 mL ของการแก้ไขทางออกเจ การสร้างของอะคริลาไมด์ไล่ระดับสี โซลูชั่นที่สองถูกสร้างขึ้นในภาชนะแยกต่างหาก แรกประกอบด้วยค่า pH 0.375 เมตรทริสเรทติ้ง – Cl 8.80.1% SDS และ 4% อะคริลาไมด์ (คง acrylamide:bis-อะคริลาไมด์) แก้ไขปัญหาสองก็เหมือนกันยกเว้นว่าความเข้มข้นของอะคริลาไมด์เป็น 15% การเริ่มต้นของอะคริลาไมด์ 50 mL เป็นโซลูชั่นเพอร์ซัลเฟตแอมโมเนีย 10% ถูก 10 มล.แต่ละโซลูชั่นเจลตาม ด้วย 5 มล. TEMED การโซลูชั่นแยกต่างหากถูกผสมอย่างอ่อนโยน และอย่างละเอียด ใช้ปิเปตชุก 10 มล.และดรัมเป็นปิยา 3.5 mL ของสารละลาย 4% อะคริลาไมด์ถูกดึงเข้าไปในปิเปต และแล้วโดยการวาดช้าขึ้น 15% อะคริลาไมด์โซลูชัน mL 4 ที่เพิ่มเติมในปิเดียวขณะหลีกเลี่ยงฟองอากาศ ที่จุดนี้ ปิเปตมีอยู่ทั้งหมด 7.5 mL ของสารละลายเจลประกอบด้วยสองขั้นตอนของความหนาแน่นของอะคริลาไมด์ ถัดไป พออากาศถูกดึงเข้าไปในปิเปตให้ฟองอากาศที่เดียวกับไหลผ่าน 15% ขั้นตอนอะคริลาไมด์ เข้าเฟส 4% และด้านบนของการแก้ปัญหา ซึ่งทำให้ผสมของเฟสที่อินเตอร์เฟซ และสร้างการไล่ระดับสีกึ่งเชิงเส้น การแก้ปัญหาถูกดีดตัวออกแล้วในแผ่นประกอบหล่อที่อัตราประมาณ 0.25 มิลลิลิตรต่อวินาที เมื่อทั้งหมด 7.5 mLโซลูชันถูกดีดตัวออก 1 มิลลิลิตรแอลกอฮอล์ isopropyl ค่อย ๆ ถูกด้านบนของ polymerization และการแก้ไขปัญหาได้รับอนุญาตให้ดำเนินการต่อไป เมื่อ polymerization เสร็จสมบูรณ์ isopropyl แอลกอฮอล์ได้เอาออก และเจถูกซ้อน ด้วยโซลูชันเจซ้อนประกอบด้วย 0.125 M ทริสเรทติ้ง – Cl pH 6.8, 0.1%SDS และ 4% อะคริลาไมด์เพอร์ซัลเฟตแอมโมเนียและ TEMED แทรกหวีสิบดีด้านของเจลและ polymerization ซ้อนได้รับอนุญาตให้เสร็จสมบูรณ์เครื่องหมายโมเลกุลที่ประกอบด้วยโปรตีนเก้าของมวลประมาณ 98, 64, 50, 250, 36, 30, 1610 และ 4 kD ถูกเรียกใช้ในเลนที่ 2, 5 และ 8 เจแต่ละกับช่องอื่น ๆ ที่ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ตัวอย่าง Laemmli(2% SDS กลีเซอรอล 10%, 60 mM ทริสเรทติ้ง – Cl pH 6.8, 0.01% bromophenol blue) องค์กรเดียวกันของโมเลกุลน้ำหนักเครื่องหมายยังรันบนเจไล่ระดับได้รับในเชิงพาณิชย์ 4 – 15% ซื้อจาก Bio-ล้ออิใช้ 100 V แรงดันไฟฟ้าคงจนถึงด้านหน้าย้อมสี bromophenol

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มือเทเจลไล่ระดับสีที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้เครื่องมือหล่อมินิเจล Bio-Rad แก้ว
จาน spacer ประกอบด้วย 1.5 มม spacer และนี้ประกอบกับแผ่นสั้นสร้าง
ปริมาณการแก้ไขเจลที่รองรับ 7.5 มลแก้ไขปัญหาการแก้ปัญหาเจล เพื่อสร้าง acrylamide
ลาดสองโซลูชั่นถูกสร้างขึ้นในภาชนะที่แยกต่างหาก คนแรกประกอบด้วย 0.375 M Tris-Cl ค่า pH 8.8,
0.1% SDS และ% ริลาไมด์ 4 (29: 1 ริลาไมด์: ทวิริลาไมด์) วิธีการแก้ปัญหาที่สองคือเหมือนกัน
ยกเว้นว่ามีความเข้มข้นริลาไมด์เป็น 15% ในการเริ่มต้นของพอลิเมริลาไมด์ 50 มิลลิลิตรของ
การแก้ปัญหาแอมโมเนียมเพอร์ซัลเฟต 10% ถูกบันทึกอยู่ใน 10 มลแต่ละวิธีการแก้ปัญหาตามด้วยเจลขนาด 5 ml TEMED
การแก้ปัญหาที่ถูกผสมแยกเบา ๆ และทั่วถึง ใช้มลปิเปตซีรั่ม 10 และดรัมมอนด์
Pipet-Aid 3.5 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาริลาไมด์ 4% ก็ถูกดึงเข้าไปปิเปตและนี้ตามมา
โดยค่อย ๆ วาดภาพขึ้นเพิ่มอีก 4 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาริลาไมด์ 15% เข้ามาในปิเปตขณะเดียวกัน
หลีกเลี่ยงฟองอากาศ ณ จุดนี้ปิเปตที่มีอยู่ทั้งหมด 7.5 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาเจลประกอบด้วยสอง
ขั้นตอนของความหนาแน่นริลาไมด์ ถัดไปอากาศเพียงพอก็ถูกดึงเข้าไปปิเปตเพื่อให้ฟองอากาศเดียวที่จะ
ไหลผ่านเฟสริลาไมด์ 15% ไปสู่ขั้นที่ 4% และด้านบนของการแก้ปัญหา นี้ทำให้เกิด
การผสมของขั้นตอนที่อินเตอร์เฟซของพวกเขาและสร้างการไล่ระดับสีกึ่งเชิงเส้น วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกขับออกมาแล้ว
เข้ามาประกอบแผ่นหล่อในอัตราประมาณ 0.25 มิลลิลิตรต่อวินาที เมื่อทั้งหมด 7.5 มล
แก้ปัญหาที่ถูกออกมา 1 มิลลิลิตรของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl ถูกเพิ่มเข้ามาเบา ๆ ไปด้านบนของการแก้ปัญหาและพอลิเมอ
ได้รับอนุญาตให้ดำเนินการต่อไป เมื่อพอลิเมอเสร็จสมบูรณ์ isopropyl แอลกอฮอล์ที่ถูก
ถอดออกและเจลที่ถูกวางทับด้วยโซลูชั่นซ้อนเจลประกอบด้วย 0.125 M Tris-Cl ค่า pH 6.8, 0.1%
SDS และริลาไมด์ 4% พร้อมกับเพอร์ซัลเฟตแอมโมเนียมและ TEMED หวีสิบดีถูกแทรก
ลงในด้านบนของเจลซ้อนและพอลิเมอได้รับอนุญาตที่จะเสร็จสิ้น.
เครื่องหมายน้ำหนักโมเลกุลประกอบด้วยเก้าโปรตีนของมวลชนประมาณ 250, 98, 64, 50, 36, 30, 16,
10 และ 4 kD วิ่งในเลนที่ 2, 5 และ 8 ของแต่ละเจลที่มีถนนอื่น ๆ ที่มี Laemmli บัฟเฟอร์ตัวอย่าง
(2% SDS, กลีเซอรีน 10%, 60 mM Tris-Cl ค่า pH 6.8, 0.01% bromophenol สีฟ้า) องค์กรเดียวกันของโมเลกุล
เครื่องหมายน้ำหนักก็ยังทำงานในเชิงพาณิชย์ได้ 4-15% เจลไล่ระดับสีที่ซื้อมาจาก Bio-Rad.
Electrophoresis ที่ถูกนำมาใช้กับ 100 V แรงดันคงที่จนถึงด้านหน้า bromophenol สีฟ้าสีย้อมถึง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มือเทลาดเจลถูกสร้างขึ้นโดยใช้ไบโอ ราดมินิเจลหล่ออุปกรณ์ แก้วสเปเซอร์แผ่นมี spacer 1.5 มิลลิเมตร และประกอบกับจานสร้างสั้น ๆการแก้ไขปัญหาไดรฟ์ที่อาศัย 7.5 ml เจลเจลและสารละลาย เพื่อสร้างอะคริลาไมด์การไล่ระดับสี สองโซลูชั่นถูกสร้างขึ้นในภาชนะที่แยกต่างหาก แรกคือ M หรือ CL ) และพีเอช 8.8 ,0.1 % SDS และ 4% อะคริลาไมด์ ( 29:1 อะคริลาไมด์ : บิสอะคริลาไมด์ ) วิธีที่สอง คือ เหมือนกันยกเว้นว่าอะคริลาไมด์ความเข้มข้น 15% เพื่อเริ่มต้นกระบวนการของอะคริลาไมด์ , 50 ml ของแอมโมเนียมเพอร์ซัลเฟตในสารละลาย 10% เพิ่ม 10 มล. เจลแต่ละโซลูชั่นตามด้วย 5 ml temed . ที่โซลูชั่นแยกผสมเบา ๆ และทั่วถึง ใช้ 10 ml ผลิตปิเปตและดรัมมอนด์ช่วยปิเปต , 3.5 มิลลิลิตรของสารละลาย 4% อะคริลาไมด์วาดเป็นปิเปต และนี้คือตามโดยค่อยๆ วาดขึ้นอีก 4 มล. 15% อะคริลาไมด์ในปิเปตสารละลายเดียวกันขณะที่หลีกเลี่ยงฟองอากาศ ณจุดนี้ ปิเปต ที่มีอยู่ทั้งหมด 7.5 ml เจลประกอบด้วยสองโซลูชั่นส่วนความหนาแน่นของอะคริลาไมด์ ถัดไป , อากาศที่เพียงพอคือวาดเป็นปิเปตให้ฟองเครื่องเดียวไหลผ่าน 15% อะคริลาไมด์ 1 มาเป็น 4 % ระยะและด้านบนของสารละลาย สาเหตุนี้การผสมของเฟสที่ติดต่อของพวกเขาและสร้างกึ่งเชิงเส้นลาด . สารละลายแล้วปฏิเสธในแผ่นประกอบหล่อในอัตราประมาณ 0.25 มิลลิลิตรต่อวินาที เมื่อทั้งหมด 7.5 ml ของออก 1 มิลลิลิตรของสารละลาย , isopropyl แอลกอฮอล์เพิ่มเบา ๆไปด้านบนของสารละลายพอลิเมอไรเซชันได้รับอนุญาตให้ดำเนินการได้ เมื่อกระบวนการเสร็จสมบูรณ์ , isopropyl แอลกอฮอล์คือลบออกและเจลถูกวางทับด้วยเจลโซลูชั่นซ้อนประกอบด้วย 0.125 เมตรโดย Cl pH 6.8 และ 0.1%SDS และ 4% อะคริลาไมด์พร้อมกับเพอร์ซัลเฟตแอมโมเนียมและ temed . สิบดี หวีก็แทรกเป็นด้านบนของการซ้อนเจลและแบบให้เสร็จสมบูรณ์เครื่องหมายโมเลกุลที่ประกอบด้วยโปรตีนประมาณเก้าของมวล 250 , 98 , 64 , 50 , 40 , 30 , 1610 และ 4 ชนิดคือวิ่งในเลน 2 , 5 และ 8 ของแต่ละอื่น ๆที่มีเจลเลน laemmli ตัวอย่างบัฟเฟอร์( 1 ) SDS , 10% กลีเซอรอล , 60 มม. โดย Cl pH 6.8 และโบรโมฟีน 0.01% , สีฟ้า ) องค์กรเดียวกันของโมเลกุลน้ำหนักตัวยังใช้ในเชิงพาณิชย์ได้ 4 – 15 % ลาดเจลซื้อจากไบแรด .วิธีประยุกต์ที่ 100 V แรงดันคงที่จนกว่าโบรโมฟีนอลบลูย้อมหน้า ถึง