Overnight cultures of S. aureus 832

Overnight cultures of S. aureus 8325–4 were diluted 1:50 in TSB and allowed to grow to OD600 of 0.2 1 μCi/ml (37MBq) of [methyl-3H] thymidine was added to the culture. After 10 min of incubation at 37°C, LP5 was added at 1 × MIC and 5 × MIC. Samples of 500 μl were removed immediately before addition of LP5 (0 min) and at 5, 10, 20 and 30 min after addition of LP5 and added to 2 volume of 99.9% ice cold EtOH and 0.1 volume of 3M sodium acetate (NaAc) pH 5.5 in order to precipitate macromolecules. After overnight precipitation at −20°C samples were collected by centrifugation (12000 rpm, 10 min) and washed twice in 1 ml of ice cold 70% EtOH. Samples were resuspended in 100 μl of milliQ water and added to 4 ml scintillation vials with EcoscintA liquid scintillation cocktail, and counts were obtained in a Beckman scintillation counter for 5 min for each sample using the tritium program. The reported results are from three independent experiments.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ค้างคืนวัฒนธรรมของหมอเทศข้างลาย S. 8325 – 4 ได้แตกออก 1:50 ใน TSB และสามารถเติบโตใน OD600 ของ 0.2 เพิ่ม 1 μCi/ml (37MBq) ของ [methyl - 3H] thymidine การวัฒนธรรม หลังจาก 10 นาทีของการบ่มที่ 37° C, LP5 ถูกเพิ่มที่ไมค์ 1 × 5 ×ไมค์ ตัวอย่างของ 500 μl ออกก่อนแห่ง LP5 (0 นาที) และ 5, 10, 20 และ 30 นาทีหลังจากเพิ่ม LP5 และเพิ่มปริมาตร 2 ของ 99.9% น้ำแข็งเย็น EtOH และปริมาตร 0.1 ของ 3M โซเดียม acetate (NaAc) ค่า pH 5.5 เพื่อ precipitate macromolecules หลังจากฝนค้างคืนที่ −20 ° C ตัวอย่างเก็บรวบรวม โดย centrifugation (12000 รอบต่อนาที 10 นาที) และล้างสองครั้งใน 1 ml ของน้ำแข็งเย็น 70% EtOH ตัวอย่าง resuspended ใน μl 100 milliQ น้ำ และเพิ่ม vials scintillation 4 ml กับค็อกเทล scintillation เหลว EcoscintA และการตรวจนับถูกรับในเคาน์เตอร์ scintillation Beckman สำหรับ 5 นาทีในแต่ละตัวอย่างใช้โปรแกรมทริเทียม รายงานผลลัพธ์ได้จากการทดลองอิสระ 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของเชื้อ S. aureus 8325-4 ถูกเจือจาง 1:50 ใน TSB และได้รับอนุญาตจะเติบโตถึง 0.2 OD600 1 μCi / ml (37MBq) ของ [methyl-3H] thymidine ถูกบันทึกอยู่ในวัฒนธรรม หลังจาก 10 นาทีของการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส LP5 ถูกบันทึก ณ วันที่ 1 × MIC และ 5 × MIC ตัวอย่าง 500 ไมโครลิตรถูกถอดออกทันทีก่อนที่จะเพิ่มขึ้นของ LP5 (0 นาที) และที่ 5, 10, 20 และ 30 นาทีหลังจากที่นอกเหนือจาก LP5 และเพิ่ม 2 ปริมาณของน้ำแข็ง 99.9% เย็น EtOH และ 0.1 ปริมาณของอะซิเตตโซเดียม 3M (NAAC) พีเอช 5.5 เพื่อให้เกิดการตกตะกอนโมเลกุล หลังจากที่เกิดฝนค้างคืนที่ -20 ° C ตัวอย่างที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยง (12,000 รอบต่อนาที, 10 นาที) และล้างสองครั้งใน 1 มิลลิลิตรของน้ำแข็งเย็น 70% EtOH ตัวอย่าง resuspended ใน 100 ไมโครลิตรน้ำ milliQ และเพิ่มถึง 4 มล. ขวดประกายกับค๊อกเทลประกายของเหลว EcoscintA และข้อหาที่ได้รับในเบคค์ประกายนับเป็นเวลา 5 นาทีสำหรับแต่ละตัวอย่างการใช้โปรแกรมไอโซโทป ผลการรายงานจากการทดลองสามอิสระ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของ S . aureus 8325 – 4 ลด 50 ใน TSB และได้รับอนุญาตให้เติบโต od600 0.2 1 μ CI / ml ( 37mbq ) [ methyl-3h ] เพียงถูกเพิ่มให้กับวัฒนธรรม หลังจาก 10 นาทีของการบ่มที่ 37 ° C , lp5 เพิ่มที่ไมค์ 1  × และ 5  ×  MIC ตัวอย่างของ 500 μผมออกทันที ก่อนที่จะเพิ่ม lp5 ( 0 นาที ) และที่ 5 , 10 ,20 และ 30 นาทีหลังจากที่เพิ่ม lp5 และเพิ่ม 2 ปริมาณของแอลกอฮอล์ 99.9% เย็นของ 3M และปริมาณ 0.1 โซเดียมอะซิเตต ( naac ) pH 5.5 ในการตกตะกอนผลึกโมเลกุล . หลังจากคืนที่ 20 ° C −โดยเก็บตัวอย่างโดยการเหวี่ยงแยก ( 12 , 000 รอบต่อนาที , 10 นาที ) และล้าง 2 ครั้งใน 1 มิลลิลิตร เย็น 70 % แอลกอฮอล์จำนวน resuspended 100 μ l milliq น้ำและเพิ่ม 4 หลอด แสงมล กับ ecoscinta ของเหลวข้อมูล ค็อกเทล และนับได้ในเคาน์เตอร์แสงแบคแมนเป็นเวลา 5 นาทีสำหรับแต่ละตัวอย่าง โดยใช้โปรแกรมไอโซโทปกัมมันตรังสี . รายงานผลจากสามการทดลองที่เป็นอิสระ