Determination of NAC, GSH, CYS, HCY

Determination of NAC, GSH, CYS, HCYS, and GGC by the HPLC
method
An HPLC method for determining thiols was developed in this
laboratory by analysing c-glutamyl cycle intermediates (Winters,
Zukowski, Ercal, Matthews & Spitz; 1995). All spices (0.1 g each)
were placed in a 1 mL of serine borate buffer and homogenised
on ice for 2 min. Ginger samples were prepared as described above.
The slurry was centrifuged at 5000g for 1 min at 4 C and supernatant
(250 lL) was derivatized with 750 lL of NPM (1 mM in acetonitrile).
This compound reacts with the free sulfhydryl groups to
form fluorescent derivatives. The resulting solution was mixed
and incubated at room temperature for 5 min. Ten micro litres of
2 N HCl were added to stop the reaction. After filtration through
a 0.2 lm acrodisc, the derivatized samples were injected onto a
5 lm C18 column in a reverse phase HPLC system. NAC, GGC,
CYS, and HCYS were determined concurrently with GSH since they
also form fluorescent derivatives with NPM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความมุ่งมั่นของ NAC, GSH, CYS, HCYS และ GGC โดย HPLC การวิธีพัฒนาวิธีการ HPLC การกำหนด thiols ในนี้ห้องปฏิบัติการวิเคราะห์กลูตามิ c วงจร intermediates (หนาวZukowski, Ercal แมตทิวส์ และ Spitz 1995) . เครื่องเทศทั้งหมด (0.1 g)ใน 1 มล.ที่บัฟเฟอร์ borate รอบเส้นใยประสาท และนี้บนน้ำแข็งนาที 2 ขิงมีเตรียมตัวอย่างอธิบายข้างต้นสารละลายคือผลิตภัณฑ์ที่ 1 นาทีที่ 4 C และ supernatant 5000 กรัม(250 lL) คือ derivatized กับ 750 lL ของ NPM (1 mM ใน acetonitrile)สารนี้ทำปฏิกิริยากับกลุ่ม sulfhydryl ฟรีไปแบบอนุพันธ์เรืองแสง แก้ปัญหาเกิดถูกผสมและที่อุณหภูมิห้อง 5 นาทีสิบไมโครลิตรได้รับการกก2 N HCl ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยา หลังจากกรองผ่านlm เป็น 0.2 acrodisc ตัวอย่าง derivatized ถูกฉีดลงบนคอลัมน์ lm C18 5 ในขั้นตอนย้อนกลับในระบบ HPLC NAC, GGCCYS และ HCYS ดำเนินการพร้อมกันกับ GSH ตั้งแต่พวกเขายัง เป็นอนุพันธ์เรืองแสงกับ NPM