Polymerase chain reactions (PCR) we

Polymerase chain reactions (PCR) were performed in 12 lL reaction mixtures
using the Biometra TGradient Thermal Cycler (Germany). Each reaction
mixture contained 1.0 lL (final concentration 0.5 UÆlL1) of Ex TaqTM,
DNA polymerase (TaKaRa Biotechnology Co., Ltd., Japan), 1.2 lL of
10 X PCR buffer, 1.5 lL of MgCl2
(25 mmolÆL1), 0.75 lL of dNTPs
(2.5 mmolÆL1), 1.0 lL of primers (10 lmolÆL1), 2.0 lL of template DNA
(50 ngÆlL1), and 4.55 lL of sterile H2O. The following PCR conditions were
used: initial denaturation at 95 C for 2 min, followed by 35 cycles of 30 s at
94 C (denaturation), 30 s at the optimal temperature for each primer pair
(annealing), and 45 s at 72 C (elongation), and a final extension step
at 72 C for 10 min. The reaction mixtures were stored at 4 C. After the
PCR amplification, 3–4 lL of PCR product was loaded onto an 8% polyacrylamide
non-denaturing gel with pBR322 DNA/MspI as the molecular size
marker. After electrophoresis (3–4 h at 120 V), the gels were stained with silver

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) ได้ดำเนินการในส่วนผสมของปฏิกิริยาจะ 12โดยใช้การ Biometra TGradient ร้อน Cycler (เยอรมนี) แต่ละปฏิกิริยาส่วนผสมประกอบด้วย 1.0 จะ (สุดท้ายเข้มข้น 0.5 UÆlL 1) ของ Ex TaqTMดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (TaKaRa เทคโนโลยีชีวภาพ Co., Ltd. ญี่ปุ่น), 1.2 จะของ10 x PCR บัฟเฟอร์ 1.5 จะของ MgCl2(25 mmolÆL 1), 0.75 จะของ dNTPs(2.5 mmolÆL 1), 1.0 จะของไพรเมอร์ (10 lmolÆL 1), 2.0 จะของดีเอ็นเอต้นแบบ(50 ngÆlL 1), และ 4.55 จะของ H2O กอซ สภาพ PCR ได้ใช้: denaturation เริ่มที่ C 95 ใน 2 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 30 s ที่94 C (denaturation), 30 s ที่อุณหภูมิเหมาะสมสำหรับแต่ละคู่รองพื้น(การอบเหนียว), และ 45 s ที่ 72 C (elongation), และขั้นตอนสุดท้ายต่อที่ C 72 สำหรับ 10 นาที น้ำยาผสมปฏิกิริยาถูกเก็บไว้ที่ค. 4 หลังจากPCR ขยาย 3 – 4 จะผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโหลดลงใน polyacrylamide เป็น 8%ไม่ใช่ denaturing เจกับดีเอ็น เอ/MspI pBR322 เป็นขนาดโมเลกุลเครื่องหมาย หลัง electrophoresis (3 – 4 h ที่ 120 V), ตัวเจถูกสี ด้วยเงิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โพลีเมอปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ได้รับการดำเนินการใน 12 จะผสมปฏิกิริยา
โดยใช้ความร้อน Biometra TGradient Cycler (เยอรมนี) ปฏิกิริยาแต่ละ
ส่วนผสมที่มีอยู่ 1.0 LL (ความเข้มข้น 0.5 UÆlLสุดท้าย? 1) ของอดีต TaqTM,
ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ (Takara เทคโนโลยีชีวภาพ จำกัด ประเทศญี่ปุ่น) 1.2 LL ของ
10 X บัฟเฟอร์ PCR 1.5 LL ของ MgCl2
(25 mmolÆL? 1) 0.75 LL ของ dNTPs
(2.5 mmolÆL 1) 1.0 LL ของไพรเมอร์ (10 lmolÆL 1) 2.0 LL ดีเอ็นเอของแม่แบบ
(50 ngÆlL 1) และ 4.55 ของ H2O จะผ่านการฆ่าเชื้อ ต่อไปนี้เงื่อนไข PCR ถูก
ใช้ denaturation เริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาทีตามด้วย 35 รอบของ 30 วินาทีที่?
94 C (denaturation) 30 วินาทีที่อุณหภูมิที่เหมาะสมสำหรับแต่ละคู่ไพรเมอร์?
(อบ) และ 45 s ที่ 72? C (ยืดตัว) และขั้นตอนสุดท้ายส่วนขยาย
ที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ผสมปฏิกิริยาถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากที่
ขยาย PCR 3-4 LL ของผลิตภัณฑ์ PCR ถูกโหลดลง polyacrylamide 8%
ที่ไม่ denaturing เจลที่มีดีเอ็นเอ pBR322 / MspI เป็นขนาดโมเลกุล
เครื่องหมาย หลังจาก electrophoresis (3-4 ชั่วโมงที่ 120 V) เจลที่ถูกย้อมด้วยสีเงิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส ( พีซีอาร์ ) ได้ดำเนินการใน 12 จะเกิดปฏิกิริยาผสม
ใช้ biometra tgradient Thermal cycler ( เยอรมนี ) แต่ละปฏิกิริยา
ส่วนผสมที่มีอยู่ 1.0 จะสุดท้าย ( ความเข้มข้น 0.5 U กู้จะ  1 ) ของอดีต taqtm
ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ( Takara , เทคโนโลยีชีวภาพ Co . , Ltd . Japan ) 1.2 จะ
x 10 เทคนิคบัฟเฟอร์ 1.5 จะไอโซโทป
( 25 มิลลิโมลกู้ผม  1 ) 0.75 จะ dntps
( 2.5 mmol l  กู้ 1 ) , 1.0 จะไพรเมอร์ ( 10 lmol กู้ผม  1 ) 2 .0 จะ
ดีเอ็นเอแม่แบบ ( 50 ng กู้จะ  1 ) และ 4.55 ของ H2O จะเป็นหมัน ต่อไปนี้เงื่อนไขทั้งหมดจะถูกใช้ : เริ่มต้นที่ 95 (
 C เป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย 35 รอบ 30 s
94  C ( ( ) , 30 วินาทีที่อุณหภูมิที่เหมาะสม สำหรับแต่ละ ไพรเมอร์คู่
( อบ ) และ 45 S ที่ 72  C ( ยืด ) และสุดท้ายขยายขั้นตอน
72  C นาน 10 นาที ปฏิกิริยาผสมที่อุณหภูมิ 4  หลัง
CPCR ( 3 – 4 จะถูกโหลดลงในผลิตภัณฑ์ PCR 8 % โพลีอะคริลาไมด์เจล pbr322
โนนี่ ดีเอ็นเอ โดยใช้เครื่องหมาย / ตามขนาด
โมเลกุล หลังจากอิเล็กโตรโฟรีซิส ( 3 – 4 ชั่วโมง 120 V ) เจลถูกย้อมด้วยสีเงิน