2. Materials and methods2.1. Plant

2. Materials and methods
2.1. Plant materials and treatments
Banana (Musa spp., AAA group, cv. Williams 8818) plantlets,
obtained from tissue culture, were transplanted into plastic pots
filled with sterile soil. For acclimatization, plants were placed in a
humid and shady environment for 15 days then transferred to a
greenhouse and kept for 8 weeks till the plantlets were 13–15 cm
in height (3–4 leaf stage).
In this study, a total of 342 plantlets were used for two
treatments: (i) MeJA treated + inoculated plants and (ii) nontreated + inoculated plants. For the MeJA treatment, methyl
jasmonate (Sigma–Aldrich, Inc.) was first dissolved in absolute
ethanol (EtOH) before dilution to the required concentrations with
distilled water. The exogenous application treatment was performed by spraying MeJA at 1.5 mM (this particular concentration
was chosen because of being optimal from preliminary experiments using 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mM MeJA) solution on the whole
above-ground part of test plants until run off from the leaves
while control plants were sprayed with an equivalent amount of
EtOH (the solvent for MeJA) in distilled water. The treatments
were repeated for three consecutive days and inoculation with
the pathogen was carried out on the fifth day after the first spray.
FocR4 was obtained from the Laboratory of Tropical and Subtropical Fruit (South China Agricultural University, Guangzhou, China).
For inoculation of roots the plantlets were carefully uprooted from
plastic trays and root apices were cut with a scalpel. The roots of
the plantlets were immersed in a suspension of 5 × 10
6
spores of
FocR4 per ml for 1 h while distilled water was used for the inoculation of control plantlets. Inoculated plantlets were placed again into
the trays and kept in a greenhouse for sampling. In order to determine the biochemical and physiological changes, three replicates
(27 plantlets per replicate) were used for each treatment. Roots of
three plantlets from each replicate were sampled at 12 h intervals.
The samples were mixed and frozen immediately in liquid nitrogen, then stored at −80
◦
C until analysis. Another three replicates
(30 plantlets per replicate) were evaluated for disease incidence
(DI) and disease severity (DS) at 10 day intervals.
2.2. Determination of chitinase and ˇ-1,3-glucanase
Chitinase was determined by measuring the release of N-acetyld-glucosanmine (NAG) from colloidal chitin as the substrate (Tonon
et al., 1998). One gram of root tissue sample was homogenized
in 5 ml sodium acetate buffer (50 mM, pH 5.2) at 4
◦
C, then centrifuged at 8000 rpm (5 min) to obtain the crude extracts. One
milliliter chitin was added with 0.4 ml crude extract and shaken
for 3 h at 37
◦
C. The mixture was centrifuged at 8000 rpm for
10 min. After that, 0.1 ml supernatant was added into 0.02 ml borate
buffer (0.8 M, pH 9.0) with 0.5 ml of dimethyl amino benzaldehyde (DMAB). The mixture was incubated at 37
◦
C for 30 min and
absorbance at 585 nm was measured. N-acetylglucosamine was
used as a standard. One unit of chitinase activity was defined as
the amount of enzyme required to catalyze the production of 1 g
NAG h
−1
at 37
◦
C.
-1,3-Glucanase activity was determined following the method
of Abeles and Forrence (1979) with some modification. One gram of
root tissue sample was homogenized in 5 ml sodium acetate buffer
(50 mM, pH 5) and centrifuged at 8000 rpm for 20 min at 4
◦
C to
obtain the crude extract. For the assay of -1,3-glucanase, 100 ml
crude extract was mixed with 100 ml 1% laminarin and incubated
at 37
◦
C for 60 min. The reaction was terminated by heating the
sample in boiling water for 10 min. One unit of -1,3-glucanase
activity was defined as the amount of enzyme required to catalyze
the production of 1 mg glucose equivalent h
−1
at 37
◦
C.
2.3. Determination of total phenolics (TP)
Total phenolics (TP) were determined using the method proposed by Slinkard and Singleton (1977) with modification. Each
frozen sample (5 g) was homogenized with 20 ml of 80% ethanol for
10 min. The extract was then filtered and centrifuged at 8000 rpm
for 15 min. An aliquot (0.5 ml) of extract was mixed with 1.5 ml
Folin–Ciocalteu reagent and diluted ten times. After 6 min, 2 ml of
7% Na2CO3 solution was added to the final mixture. Absorbance
was measured after 90 min against a blank at 750 nm. A standard
curve of gallic acid was used for quantifying the TP content, and the
results expressed as mg in 100 g of fresh weight (FW).
2.4. Determination of H2O2and O2
−
H2O2levels were determined following the method of Ferguson
et al. (1983) with modification. Roots (1 g) were homogenized in
3.0 ml of chilled acetone and centrifuged at 3000 rpm for 10 min at
4
◦
C. The supernatant (1 ml) was mixed with 0.1 ml of 20% (v/v) titanium tetrachloride (TiCl4) then centrifuging at 3000 rpm for 15 min.
The precipitate was collected and 3 ml of 1 M H2SO4 was added
to the mix then centrifuging at 3000 rpm for another 15 min. The
absorbance of the solution was measured at 415 nm against a blank
which had been carried through the same procedure. The content
of H2O2was determined using a standard curve.
Content of O2
−
was measured according the method of Xu et al.
(2006) with slight modifications. Banana roots (1 g) were ground
with liquid nitrogen and homogenized in 15 ml of a 65 mM phosphate buffer [pH 7.8, containing 1 mM ethylene diaminetetraacetic
acid (EDTA) and 2% polyvinyl polypyrrolidone (PVPP)]. The samples were centrifuged at 3000 rpm for 30 min at 4
◦
C, and 0.5 ml of
the supernatant was mixed with 1 ml hydroxylammonium chloride
(1 mM). The mixture was then placed at 25
◦
C for 1 h. The color was
486 D. Sun et al. / Scientia Horticulturae 164 (2013) 484–491
developed by the addition of 1 ml 4-aminobenzenesulfonic acid
(17 mM) and 1 ml alpha-naphthylamine (7 mM) for 20 min at 25
◦
C.
The absorbance was measured at 530 nm, and the formation rate
of O2
−
was calculated from a standard curve of a NaNO2reagent.
2.5. Enzyme activity assay
Banana roots (3 g) were homogenized in 8 ml of phosphate
buffer (50 mM, pH 7.8) containing 2% PVPP and 0.2 mM EDTA. The
extracts were then centrifuged at 10,000 rpm for 15 min at 4
◦
C,
and the supernatant was used to determine the activity of superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POD) and polyphenol oxidase
(PPO) activities, according to the methods of Lu et al. (2010); the
activity of catalase (CAT) was measured by the procedure of Hong
et al. (2012). As for phenylalanine ammonia-lyase (PAL) activity, the
assay mixture consisted of sodium borate buffer (20 mM, pH 8.8)
and l-phenylalanine (2 mM) and the determination was carried out
by using the principle of Lu et al. (2011).
2.6. Malondialdehyde (MDA) content assay
The content of MDA was determined using the thiobarbituric
acid (TBA) reaction method (Zhang et al., 2009) with a modification. Root samples (1.0 g) were homogenized in 5.0 ml of 5%
(w/v) trichloroacetic acid (TCA) and centrifuged at 8000 rpm for
30 min. The supernatant was mixed with 2.0 ml of 0.67% TBA,
heated at 100
◦
C for 30 min and then quickly cooled down on
ice. After centrifugation at 3000 rpm for 15 min, absorbance of
the supernatant was measured at 450, 532 and 600 nm, respectively. The MDA content was measured based on the formula:
6.45 × (A532 − A600) − 0.56 × A450

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การปลูกวัสดุและรักษากล้วย (Musa โอ กลุ่ม AAA พันธุ์วิลเลียมส์ 8818) plantletsได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ มี transplanted ลงในกระถางพลาสติกเต็มไป ด้วยดินที่ผ่านการฆ่าเชื้อ สำหรับ acclimatization พืชถูกเก็บไว้ในสภาพแวดล้อมที่ชื้น และร่ม 15 วันแล้วโอนย้ายไปเรือนกระจกและ 8 สัปดาห์จน plantlets ได้ 13 – 15 ซม.สูง (ขั้นตอน 3-4 ใบ)ในการศึกษานี้ ใช้จำนวน 342 plantlets สำหรับสองการรักษา: (i) MeJA ถือว่า + inoculated พืชและพืช (ii) nontreated + inoculated รักษา MeJA, methyljasmonate (ซิก-Aldrich, Inc.) เป็นครั้งแรกละลายในสัมบูรณ์เอทานอล (EtOH) ก่อนเจือจางให้ความเข้มข้นต้องมีน้ำกลั่น ทำการรักษาใช้บ่อย โดยพ่น MeJA ที่ 1.5 มม. (นี้เฉพาะความเข้มข้นถูกเลือกเนื่องจากมีประสิทธิภาพสูงสุดจากการทดลองเบื้องต้นที่ใช้ 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 มม. MeJA) โซลูชันบนทั้งหมดส่วนเหนือดินของพืชทดสอบจนกว่ารันออกจากใบไม้ในขณะที่พืชควบคุมถูกพ่น ด้วยเทียบเท่าจำนวนEtOH (ตัวทำละลายสำหรับ MeJA) ในน้ำกลั่น การรักษามีซ้ำสามวันติดต่อกันและ inoculation ด้วยการศึกษาถูกดำเนินในวันหลังจากพ่นครั้งแรกFocR4 ได้รับจากห้องปฏิบัติการของเขตร้อนและแบบผลไม้ (มหาวิทยาลัยเกษตรจีนใต้ กวางเจา จีน)สำหรับ inoculation ราก plantlets ถูกอย่าง uprooted จากถาดพลาสติกและ apices รากถูกตัด ด้วย scalpel เป็น รากของplantlets ถูกแช่อยู่ในระงับ 5 × 106เพาะเฟิร์นของFocR4 ต่อ ml สำหรับ h 1 ในขณะที่ใช้น้ำกลั่นสำหรับ inoculation ของ plantlets ควบคุม Inoculated plantlets ถูกวางอีกครั้งในถาด และเก็บไว้ในเรือนกระจกสำหรับสุ่มตัวอย่าง เพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงสรีรวิทยา และชีวเคมี สามเหมือนกับ(plantlets 27 ต่อจำลอง) ถูกใช้ในการรักษาแต่ละ รากของplantlets สามจากจำลองแต่ละมีตัวอย่างในช่วงเวลา 12 hตัวอย่างถูกผสม และแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวทันที แล้วเก็บไว้ที่ −80◦C จนถึงการวิเคราะห์ เหมือนกับอีก 3(plantlets 30 ต่อจำลอง) ถูกประเมินอุบัติการณ์ของโรค(DI) และความรุนแรงของโรค (DS) ในช่วงเวลา 10 วัน2.2 การกำหนด chitinase และคัดˇ-1,3กำหนด โดยการวัดการปล่อย N-acetyld-glucosanmine (NAG) จากไคทิน colloidal เป็นพื้นผิว (Tonon Chitinaseและ al., 1998) หนึ่งกรัมของตัวอย่างเนื้อเยื่อรากถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 5 ml โซเดียม acetate บัฟเฟอร์ (50 มม. pH 5.2) ที่ 4◦C, centrifuged แล้ว ที่ 8000 rpm (5 นาที) เพื่อให้ได้สารสกัดหยาบ หนึ่งไคทิน milliliter เพิ่ม 0.4 ml สกัดจากน้ำมันดิบ และเขย่าสำหรับ h 3 ที่ 37◦C. ส่วนผสมถูก centrifuged ที่ 8000 รอบต่อนาทีสำหรับ10 นาที หลังจากนั้น เพิ่ม 0.1 มล. supernatant เป็น 0.02 ml borateบัฟเฟอร์ (0.8 M, pH 9.0) กับ 0.5 ml ของ dimethyl benzaldehyde อะมิโน (DMAB) ส่วนผสมคือ incubated ที่ 37◦C ใน 30 นาที และabsorbance ที่ 585 nm ที่วัด N acetylglucosamine มีใช้เป็นมาตรฐาน หน่วยหนึ่งของ chitinase กิจกรรมถูกกำหนดให้เป็นจำนวนเอนไซม์ต้องสถาบันการผลิตของ 1 gNAG h−1ที่ 37◦ค-1,3-กิจกรรมคัดได้กำหนดวิธีการดังต่อไปนี้Abeles และ Forrence (1979) มีการปรับเปลี่ยนบาง หนึ่งกรัมของตัวอย่างเนื้อเยื่อรากถูก homogenized เป็นกลุ่มในบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม 5 ml(50 มม. pH 5) และ centrifuged ที่ 8000 rpm สำหรับ 20 นาทีที่ 4◦C เพื่อได้รับสารสกัดหยาบ การวิเคราะห์ของ - 1,3-คัด 100 mlสารสกัดหยาบผสมกับ laminarin 100 มล 1% และ incubatedที่ 37◦C สำหรับ 60 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิก โดยความร้อนตัวอย่างในการต้มน้ำ 10 นาที หนึ่งหน่วย - 1,3-คัดกิจกรรมถูกกำหนดเป็นจำนวนของเอนไซม์ที่จำเป็นให้สถาบันการผลิตของ h เท่ากับกลูโคส 1 มิลลิกรัม−1ที่ 37◦ค2.3 การกำหนด phenolics รวม (TP)Phenolics รวม (TP) ถูกกำหนดโดยใช้วิธีการนำเสนอ โดย Slinkard และซิงเกิลตัน (1977) มีการปรับเปลี่ยน แต่ละแช่แข็งตัวอย่าง (5 กรัม) ถูก homogenized เป็นกลุ่ม มีปริมาณของเอทานอล 80% สำหรับ 20 ml10 นาที การดึงข้อมูลที่ถูกกรอง แล้ว centrifuged ที่ 8000 รอบต่อนาทีใน 15 นาที เป็นส่วนลงตัว (0.5 มล.) ของสารสกัดที่ผสมกับ 1.5 mlรีเอเจนต์ Folin – Ciocalteu และแตกออก 10 ครั้ง หลังจาก 6 นาที 2 ml ของเพิ่ม 7% Na2CO3 โซลูชันการผสมขั้นสุดท้าย Absorbanceวัดหลังจาก 90 นาทีกับช่องว่างที่ 750 nm มาตรฐานใช้เส้นโค้งของกรด gallic สำหรับ quantifying เนื้อหา TP และผลที่แสดงเป็นมิลลิกรัมใน 100 กรัมของน้ำหนักสด (FW)2.4 การกำหนด H2O2and O2−H2O2levels ได้กำหนดตามวิธีการของเฟอร์กูสันal. ร้อยเอ็ด (1983) มีการปรับเปลี่ยน ราก (1 g) ถูก homogenized เป็นกลุ่มใน3.0 ml ของแช่อะซีโตน และ centrifuged ที่ 3000 rpm สำหรับ 10 นาทีที่4◦C. การ supernatant (1 ml) ถูกผสมกับ 0.1 มล.ของ 20% (v/v) ไทเทเนียมเตตระคลอไรด์ (TiCl4) แล้ว centrifuging ที่ 3000 rpm สำหรับ 15 นาทีPrecipitate ถูกรวบรวม และเพิ่ม 3 ml 1 กำมะถัน Mเข้ามาผสมผสานแล้ว centrifuging ที่ 3000 rpm สำหรับ 15 นาทีอีกมีวัด absorbance ของโซลูชันที่ 415 nm กับช่องว่างซึ่งมีการทำโดยใช้กระบวนการเดียวกัน เนื้อหาของ H2O2was ที่กำหนดโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐานเนื้อหาของ O2−ถูกวัดตามวิธีของ Xu et al(2006) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย พื้นดินมีรากกล้วย (1 กรัม)ไนโตรเจนเหลวและ ml 15 homogenized เป็นกลุ่มในที่ 65 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ [pH 7.8 ประกอบด้วย diaminetetraacetic เอทิลีน 1 มม.กรด (EDTA) และโพลีไวนิล polypyrrolidone 2% (PVPP)] ตัวอย่างถูก centrifuged ที่ 3000 rpm ใน 30 นาทีที่ 4◦C และ 0.5 ml ของsupernatant ถูกผสมกับคลอไรด์ hydroxylammonium 1 ml(1 มม.) ส่วนผสมถูกอยู่ที่ 25◦C สำหรับ 1 h สีถูกD. 486 ซันและ al. / Scientia Horticulturae 164 (2013) 484-491พัฒนา โดยการเพิ่มกรด 4 aminobenzenesulfonic 1 ml(17 mM) และ 1 ml อัลฟา-naphthylamine (7 มม) สำหรับ 20 นาทีที่ 25◦คมีที่วัด absorbance ที่ 530 nm และอัตราการก่อตัวของ O2−มีคำนวณจากเส้นโค้งมาตรฐานของ NaNO2reagent2.5 ทดสอบกิจกรรมเอนไซม์รากกล้วย (3 g) ถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 8 ml ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (50 มม. pH 7.8) มี 2% PVPP และ 0.2 mM EDTA ที่แยกได้แล้ว centrifuged ที่ 10000 rpm สำหรับ 15 นาทีที่ 4◦Cและ supernatant ถูกใช้เพื่อระบุกิจกรรมซูเปอร์ออกไซด์ dismutase (SOD), peroxidase (POD) และ polyphenol oxidaseกิจกรรม (PPO) ตามวิธีของ Lu et al. (2010), ที่กิจกรรมของ catalase (แมว) ถูกวัด โดยวิธีของ Hongal. ร้อยเอ็ด (2012) สำหรับกิจกรรม phenylalanine แอมโมเนีย-lyase (PAL) การวิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วยโซเดียม borate บัฟเฟอร์ (20 มม. pH 8.8)และ l phenylalanine (มม. 2) และจะถูกดำเนินการโดยใช้หลักการของ Lu et al. (2011)2.6. Malondialdehyde (MDA) วิเคราะห์เนื้อหากำหนดเนื้อหาของ MDA thiobarbituric ใช้กรด (TBA) ปฏิกิริยาวิธี (Zhang et al., 2009) มีการปรับเปลี่ยน ตัวอย่างราก (1.0 กรัม) ถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 5.0 มล.ของ 5%(w/v) trichloroacetic กรด (TCA) และ centrifuged ที่ 8000 รอบต่อนาทีสำหรับ30 นาที Supernatant ถูกผสมกับ 2.0 ml ของ 0.67% TBAความร้อนที่ 100◦C ใน 30 นาทีแล้ว อย่างรวดเร็วระบายความร้อนด้วยลงบนน้ำแข็ง หลังจาก centrifugation ที่ 3000 rpm สำหรับ 15 นาที absorbance ของsupernatant ถูกวัดที่ 450, 600 และ 532 nm ตามลำดับ เนื้อหา MDA ถูกวัดตามสูตร:A450-0.56 ×−× 6.45 (A532 − A600)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุพืชและการรักษากล้วย (Musa spp. กลุ่ม AAA, พันธุ์. วิลเลียมส์ 8818) ต้นกล้า, ที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อถูกปลูกลงในกระถางพลาสติกที่เต็มไปด้วยดินที่ผ่านการฆ่าเชื้อ สำหรับเคยชินกับสภาพพืชถูกวางไว้ในสภาพแวดล้อมที่ชื้นและร่มรื่นเป็นเวลา 15 วันจากนั้นก็ย้ายไปยังเรือนกระจกและเก็บไว้เป็นเวลา8 สัปดาห์จนถึงต้นอยู่ที่ 13-15 ซม. ความสูง (เวทีใบ 3-4). ในการศึกษานี้รวมของ 342 ต้นถูกนำมาใช้สำหรับสองการรักษา: (i) การได้รับการรักษาเชื้อร + เชื้อพืชและ (ii) nontreated + เชื้อพืช สำหรับการรักษาเชื้อร, เมธิลjasmonate (Sigma-Aldrich, Inc) ก็เลือนหายไปแน่นอนครั้งแรกในเอทานอล(EtOH) ก่อนที่จะเจือจางความเข้มข้นที่จำเป็นกับน้ำกลั่น การรักษาการประยุกต์ใช้ภายนอกได้ดำเนินการโดยการฉีดพ่นเชื้อรที่ 1.5 มิลลิเมตร (ความเข้มข้นนี้โดยเฉพาะได้รับเลือกเพราะของการเป็นที่ดีที่สุดจากการทดลองเบื้องต้นโดยใช้0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5 มิลลิเชื้อร) วิธีการแก้ปัญหาในทั้งส่วนเหนือพื้นดินของพืชทดสอบจนกว่าวิ่งออกจากใบในขณะที่พืชควบคุมถูกพ่นด้วยจำนวนเงินเทียบเท่าEtOH (ตัวทำละลายสำหรับเชื้อร) ในน้ำกลั่น การรักษาซ้ำเป็นเวลาสามวันติดต่อกันและการให้วัคซีนกับเชื้อโรคได้ดำเนินการในวันที่ห้าหลังจากที่สเปรย์เป็นครั้งแรก. FocR4 ที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการของเขตร้อนและกึ่งเขตร้อนผลไม้ (ภาคใต้ของจีนมหาวิทยาลัยเกษตร, กว่างโจว, จีน). สำหรับการฉีดวัคซีนของ รากต้นที่ถูกถอนรากถอนโคนอย่างระมัดระวังจากถาดพลาสติกและapices รากถูกตัดด้วยมีดผ่าตัด รากของต้นกล้าที่ถูกแช่อยู่ในการระงับ 5 × 10 6 สปอร์ของFocR4 ต่อมล. เป็นเวลา 1 ชั่วโมงในขณะที่น้ำกลั่นที่ใช้สำหรับการฉีดวัคซีนจากการควบคุมของต้นอ่อน ต้นกล้าเชื้อถูกวางไว้อีกครั้งในถาดและเก็บไว้ในเรือนกระจกสำหรับการสุ่มตัวอย่าง เพื่อที่จะตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงทางชีวเคมีและสรีรวิทยาซ้ำสาม(27 ต้นต่อซ้ำ) ถูกนำมาใช้ในการรักษาแต่ละ รากของสามต้นจากการทำซ้ำแต่ละตัวอย่างที่ 12 ช่วงเวลาชม. กลุ่มตัวอย่างที่ถูกผสมและแช่แข็งทันทีในไนโตรเจนเหลวแล้วเก็บไว้ที่ -80 ◦ C จนการวิเคราะห์ อีกสามซ้ำ(30 ต้นต่อซ้ำ) ได้รับการประเมินสำหรับอุบัติการณ์การเกิดโรค(DI) และความรุนแรงของโรค (DS) ในช่วงเวลา 10 วัน. 2.2 ความมุ่งมั่นของไคติเนสและ 1,3-glucanase ไคติเนสได้รับการกำหนดโดยการวัดการเปิดตัวของ N-acetyld-glucosanmine (จู้จี้) จากไคตินคอลลอยด์เป็นสารตั้งต้น (เกet al., 1998) หนึ่งกรัมของตัวอย่างเนื้อเยื่อรากหดหาย5 มล. โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (50 มิลลิค่า pH 5.2) 4 ◦ C, ปั่นแล้วที่ 8,000 รอบต่อนาที (5 นาที) เพื่อให้ได้สารสกัดหยาบ หนึ่งมิลลิลิตรไคตินถูกบันทึกด้วยสารสกัดจากน้ำมันดิบ 0.4 มิลลิลิตรและเขย่าเป็นเวลา3 ชั่วโมง 37 ◦ซี ส่วนผสมที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 8000 รอบต่อนาทีสำหรับ10 นาที หลังจากนั้น 0.1 มิลลิลิตรใสถูกเพิ่มเข้าไปใน 0.02 มล. borate บัฟเฟอร์ (0.8 ล้านค่า pH 9.0) 0.5 มิลลิลิตรไดเมทิลอะมิโน benzaldehyde (DMAB) ส่วนผสมที่ถูกบ่มที่ 37 ◦ C เป็นเวลา 30 นาทีและการดูดกลืนแสงที่585 นาโนเมตรวัด N-acetylglucosamine ถูกนำมาใช้เป็นมาตรฐาน หนึ่งหน่วยของกิจกรรมไคติเนสถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการกระตุ้นการผลิต 1 หรือไม่กรัมจู้จี้เอช-1 ที่ 37 ◦ซี? กิจกรรม -1,3-glucanase ถูกกำหนดดังต่อไปนี้วิธีการของAbeles และ Forrence (1979) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง หนึ่งกรัมตัวอย่างเนื้อเยื่อรากหดหาย 5 มล. โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (50 มิลลิพีเอช 5) และหมุนเหวี่ยงที่ 8000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 ◦ C เพื่อให้ได้สารสกัดหยาบ สำหรับการทดสอบของ? -1,3-glucanase 100 มลสารสกัดหยาบผสมกับ100 มล. 1% laminarin และบ่มที่37 ◦ C เป็นเวลา 60 นาที ปฏิกิริยาถูกยกเลิกโดยความร้อนตัวอย่างในน้ำเดือด 10 นาที หนึ่งหน่วยของ? -1,3-glucanase กิจกรรมถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการกระตุ้นการผลิตของเอช 1 มิลลิกรัมเทียบเท่ากลูโคส -1 ที่ 37 ◦ C. 2.3 การกำหนดรวมฟีนอล (TP) รวมฟีนอล (TP) ได้รับการพิจารณาโดยใช้วิธีการที่เสนอโดย Slinkard และโทน (1977) ที่มีการปรับเปลี่ยน แต่ละตัวอย่างแช่แข็ง (5 กรัม) ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันกับ 20 มล. เอทานอล 80% สำหรับ 10 นาที สารสกัดถูกกรองแล้วและหมุนเหวี่ยงที่ 8000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา15 นาที หาร (0.5 ml) ของสารสกัดผสมกับ 1.5 มลสารFolin-Ciocalteu และเจือจางสิบครั้ง หลังจากนั้น 6 นาที, 2 มิลลิลิตร7% วิธีการแก้ปัญหา Na2CO3 ถูกบันทึกอยู่ในส่วนผสมสุดท้าย การดูดกลืนแสงวัดหลังจาก 90 นาทีกับว่างเปล่าที่ 750 นาโนเมตร มาตรฐานเส้นโค้งของกรดฝรั่งเศสที่ใช้สำหรับปริมาณเนื้อหา TP และผลแสดงเป็นมก. ใน 100 กรัมของน้ำหนักสด (FW). 2.4 การกำหนด H2O2and O2 - H2O2levels ได้รับการพิจารณาดังต่อไปนี้วิธีการของเฟอร์กูสันและอัล (1983) ที่มีการปรับเปลี่ยน ราก (1 กรัม) ได้รับการปั่นใน3.0 มิลลิลิตรอะซีโตนแช่เย็นและหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่4 ◦ซี สารละลาย (1 มล.) ผสมกับ 0.1 มล. 20% (v / v) ไทเทเนียม tetrachloride (TiCl4) แล้วเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที. โดยตะกอนที่ถูกเก็บรวบรวมและ3 มล. 1 M H2SO4 ถูกบันทึกอยู่ในการผสมแล้วเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีอีก 15 นาที การดูดกลืนแสงของการแก้ปัญหาวัดที่ 415 นาโนเมตรกับว่างเปล่าซึ่งได้รับการดำเนินการผ่านขั้นตอนเดียวกัน เนื้อหาของ H2O2was การพิจารณาโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน. เนื้อหาของ O2 - วัดตามวิธีการของ Xu et al,. (2006) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย รากกล้วย (1 กรัม) เป็นพื้นดินที่มีไนโตรเจนเหลวและปั่นใน15 มิลลิลิตร 65 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ [ค่า pH 7.8 ที่มีเอทิลีน 1 มิลลิ diaminetetraacetic กรด (EDTA) และ 2% polypyrrolidone โพลีไวนิล (PVPP)] กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ◦ C และ 0.5 มิลลิลิตรใสผสมกับคลอไรด์1 มิลลิลิตร hydroxylammonium (1 มิลลิ) ส่วนผสมที่ถูกวางไว้แล้ว ณ วันที่ 25 ◦ C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง สีเป็น486 D. อาทิตย์ et al, / วิทยาศาสตร์ Horticulturae 164 (2013) 484-491 การพัฒนาโดยการเพิ่มขึ้นของ 1 มิลลิลิตร 4 aminobenzenesulfonic กรด(17 มิลลิเมตร) 1 มล. อัลฟา naphthylamine (7 มิลลิ) เป็นเวลา 20 นาทีที่ 25 ◦ C. การดูดกลืนแสงที่ได้รับการวัดที่ 530 นาโนเมตร และอัตราการก่อตัวของO2 - ที่คำนวณได้จากกราฟมาตรฐานของ NaNO2reagent. 2.5 การทดสอบการทำงานของเอนไซม์รากกล้วย (3 กรัม) กำลังหดหาย 8 มิลลิลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์(50 มิลลิค่า pH 7.8) ที่มี PVPP 2% และ 0.2 มิลลิ EDTA สารสกัดถูกปั่นแล้วที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 ◦ C, และใสถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบการทำงานของ superoxide dismutase (SOD) peroxidase (POD) และเอนไซม์โพลีฟีน(PPO) กิจกรรมตามวิธีการของลู et al, (2010); กิจกรรมของ catalase (กสท.) โดยวัดจากขั้นตอนของฮ่องกงet al, (2012) สำหรับ phenylalanine แอมโมเนียไอเลส (PAL) กิจกรรมที่ผสมทดสอบประกอบด้วยโซเดียมบอเรตบัฟเฟอร์(20 มิลลิค่า pH 8.8) และ l-phenylalanine (2 มิลลิเมตร) และความมุ่งมั่นได้ดำเนินการโดยใช้หลักการของลูเอตอัล (2011). 2.6 Malondialdehyde (MDA) การวิเคราะห์เนื้อหาเนื้อหาของภาคตะวันออกเฉียงเหนือถูกกำหนดโดยใช้thiobarbituric กรด (TBA) วิธีปฏิกิริยา (Zhang et al., 2009) ที่มีการปรับเปลี่ยน ตัวอย่างราก (1.0 กรัม) ได้รับการปั่นใน 5.0 มล. 5% (w / v) กรดไตรคลอโร (TCA) และหมุนเหวี่ยงที่ 8000 รอบต่อนาทีสำหรับ30 นาที สารละลายผสมกับ 2.0 มิลลิลิตร 0.67% ส ธ , ความร้อนที่ 100 ◦ C เป็นเวลา 30 นาทีแล้วระบายความร้อนได้อย่างรวดเร็วลงบนน้ำแข็ง หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที, การดูดกลืนแสงของสารละลายที่ถูกวัดที่450, 532 และ 600 นาโนเมตรตามลำดับ เนื้อหาที่ภาคตะวันออกเฉียงเหนือวัดขึ้นอยู่กับสูตร: 6.45 เท่า (A532 - A600) - 0.56 × A450

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . วัสดุพืชและการรักษา
กล้วย ( Musa spp . , AAA กลุ่มพันธุ์ วิลเลียม 8818 ) ต้นอ่อนที่ได้จากการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อ
, , ถูกย้ายลงกระถางพลาสติก
เต็มไปด้วยดินปลอดเชื้อ สำหรับการ , พืชอยู่ในสภาพแวดล้อมที่ชื้นและร่ม

15 วันแล้วโอนไปยังเรือนกระจกและเก็บไว้เป็นเวลา 8 สัปดาห์ จนต้นเป็น 13 – 15 ซม.
ความสูง ( 3 ) ขั้นที่ 4 ใบ ) .
ในการศึกษานี้ทั้งหมดแต่ต้นเป็นใช้รักษา 2
: ( i ) ตารางปฏิบัติ ปลูกพืชและ ( 2 ) ไม่มีที่ปลูกพืช สำหรับการรักษาตาราง , Methyl
jasmonate ( Sigma ) ดิช , Inc . ) เป็นครั้งแรกที่ละลายในแอลกอฮอล์ ( แอลกอฮอล์ ) ก่อนแน่นอน

ต้องเจือจางกับความเข้มข้นด้วยน้ำกลั่นการรักษาโปรแกรมภายนอกกระทำโดยการพ่นตาราง 1.5 มม. ( เฉพาะสมาธิ
ถูกเลือกเพราะเหมาะสมที่สุดจากการทดลองเบื้องต้นโดยใช้ 0.5 , 1.0 , 1.5 , 2.0 , 2.5 มม. ตาราง ) โซลูชั่นทั้งหมดใน
เหนือพื้นดินส่วนหนึ่งของพืชทดสอบจนวิ่งหนีจากใบ
ในขณะที่พืชควบคุมพ่นด้วย เทียบเท่า
เอโตะ ( ตัวทำละลายสำหรับตาราง ) ในน้ำกลั่น การรักษา
เป็นเวลาสามวัน และการ
เชื้อโรคได้ดําเนินการในวันที่ 5 หลังจากพ่นครั้งแรก .
focr4 ได้จากห้องปฏิบัติการของผลไม้เขตร้อนและเขตกึ่งร้อน ( มหาวิทยาลัยเกษตรภาคใต้จีนกว่างโจว , จีน ) .
สำหรับการฉีดวัคซีนของรากต้นเป็นอย่างดีจาก
ถูกถอนรากถอนโคนถาดพลาสติกและราก apices ถูกตัดด้วยมีด รากของต้น
ถูกแช่อยู่ในการหยุดชะงักของ 5 × 10
6

focr4 สปอร์ต่อมิลลิลิตร เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ในขณะที่น้ำกลั่นที่ใช้สำหรับการปลูกต้นควบคุม ปลูกต้นไว้อีกครั้งใน
ถาดและเก็บไว้ในเรือนกระจกสำหรับคน เพื่อศึกษาการเปลี่ยนแปลงทางชีวเคมีและสรีรวิทยา