mutations were compared with the GB

mutations were compared with the GBA coding sequence (GenBank accession
no. J03059.1).
The p.L483P (L444P), p.Y402H and p.X537A mutations were verified by
restriction enzyme digestions of the patients’ PCR products, using NciI, RsaI
and Cac8I, respectively. Parents of patients with probable homozygous
mutations for the p.L483P (L444P) mutation were also examined for the
variants by restriction enzyme analysis. RNA from patient 5 who had the IVS6
mutation was extracted from peripheral blood leukocytes using QIAamp RNA
blood mini kit (Qiagen). Reverse transcription was performed using ImProm-II
reverse transcriptase (Promega, Madison, WI, USA) according to company
recommendations. PCR amplification of the GBA cDNA covering the 30-end of
exon 4 through the termination codon to the 50- end of exon 11 was performed
using primers cGBA4 and cGBA-R11 designed to amplify only the functional
GBA cDNA, but not the cDNA of the pseudogene (Table 2).
Haplotype analysis of the p.L483P (L444P) allele
We used PCR-RFLP to detect the p.L483P (L444P) mutation in four additional
patients with GD. Three were homozygous and one heterozygous for the
mutation. DNA of these four cases, patients 1, 2 and 3, and available parents
were PCR-amplified with primers as shown in Table 3 for previously described
microsatellites (5GC3.2, ITG6.2, D1S2777, D1S1595 D1S2721). DNA of patient
4 was not available for this haplotype analysis. Genotyping was performed by

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พันธุ์ถูกเปรียบเทียบกับลำดับรหัส GBA (GenBank ภาคยานุวัติ555 J03059.1)P.L483P (L444P), p.Y402H และ p.X537A พันธุ์ถูกตรวจสอบโดยdigestions เอนไซม์จำกัดผลิตภัณฑ์ PCR ของผู้ป่วย ใช้ NciI, RsaIและ Cac8I ตามลำดับ ผู้ปกครองของผู้ป่วยน่าจะหลักพันธุ์สำหรับผ่า p.L483P (L444P) ยังมีการตรวจสอบสำหรับการตัวแปร โดยการวิเคราะห์เอนไซม์จำกัด RNA จาก 5 ผู้ป่วยมีการ IVS6กลายพันธุ์ถูกแยกจากเลือดหญิงใช้ QIAamp RNAเลือดชุดมินิ (Qiagen) ทำการถอดรหัสย้อนกลับใช้ ImProm IIปเทส (Promega เมดิสัน WI สหรัฐอเมริกา) ตามบริษัทคำแนะนำ ปลักของ cDNA GBA ที่ครอบคลุมด้าน 30 ของทำ exon ที่ 4 ผ่านรหัสพันธุกรรมสิ้นสุดท้าย 50 exon 11ใช้ไพรเมอร์ cGBA4 และ cGBA-R11 ออกแบบมาเพื่อเพิ่มพลังเท่านั้นที่ทำงานGBA cDNA แต่ไม่ cDNA ของ pseudogene (ตารางที่ 2)วิเคราะห์ Haplotype ของอัลลีล p.L483P (L444P)เราใช้ PCR-RFLP เพื่อตรวจหาการกลายพันธุ์ p.L483P (L444P) ที่มาเพิ่มเติมผู้ป่วยที่ มี GD มีสามหลักและ heterozygous สำหรับการกลายพันธุ์ ดีเอ็นเอของสี่กรณี ผู้ปกครอง 1, 2 และ 3 และมีผู้ป่วยได้ขยาย PCR กับไพรเมอร์ดังแสดงในตารางที่ 3 สำหรับอธิบายไว้ก่อนหน้านี้หรือไม่microsatellites (5GC3.2, ITG6.2, D1S2777, D1S1595 D1S2721) ดีเอ็นเอของผู้ป่วยไม่มี 4 นี้วิเคราะห์ haplotype Genotyping ทำโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การกลายพันธุ์ที่ถูกเมื่อเทียบกับการเข้ารหัสลำดับ GBA (GenBank ภาคยานุวัติ
ไม่มี. J03059.1).
p.L483P (L444P) p.Y402H และ p.X537A การกลายพันธุ์ที่ได้รับการตรวจสอบโดย
การย่อยของเอนไซม์ข้อ จำกัด ของผู้ป่วยผลิตภัณฑ์ PCR โดยใช้ NciI, RsaI
และ Cac8I ตามลำดับ พ่อและแม่ของผู้ป่วยที่มี homozygous น่าจะ
กลายพันธุ์สำหรับ p.L483P (L444P) การกลายพันธุ์ยังมีการตรวจสอบสำหรับ
สายพันธุ์โดยการวิเคราะห์เอนไซม์ จำกัด RNA จากผู้ป่วย 5 ที่มี IVS6
กลายพันธุ์เป็นสารสกัดจากเม็ดเลือดขาวใช้ QIAamp RNA
ชุดมินิเลือด (Qiagen) ย้อนกลับถอดความได้รับการดำเนินการโดยใช้ ImProm-II
เอนไซม์ (Promega, Madison, WI, USA) ตามที่ บริษัท
เสนอแนะ ขยาย PCR ของ GBA cDNA ครอบคลุม 30 ตอนท้ายของ
เอกซ์ซอนที่ 4 ถึง codon การเลิกจ้างไปที่ปลาย 50 ของเอกซ์ซอน 11 ได้ดำเนินการ
โดยใช้ไพรเมอร์และ cGBA4 cGBA-R11 ออกแบบมาเพื่อขยายการทำงานเพียง
GBA cDNA แต่ไม่ cDNA ของ pseudogene (ตารางที่ 2).
การวิเคราะห์ของ haplotype p.L483P นี้ (L444P) อัลลีล
เราใช้ PCR-RFLP ในการตรวจสอบ p.L483P นี้ (L444P) การกลายพันธุ์ในเพิ่มเติมสี่
ผู้ป่วยที่มี GD สามคนและเป็นหนึ่ง homozygous heterozygous สำหรับ
การกลายพันธุ์ ดีเอ็นเอของทั้งสี่กรณีผู้ป่วย 1, 2 และ 3 และให้บริการพ่อแม่
ถูก PCR-ขยายด้วยไพรเมอร์ดังแสดงในตารางที่ 3 สำหรับการอธิบายไว้ก่อนหน้า
ไมโคร (5GC3.2, ITG6.2, D1S2777, D1S1595 D1S2721) ดีเอ็นเอของผู้ป่วย
4 ก็ไม่สามารถใช้ได้สำหรับการวิเคราะห์ haplotype นี้ genotyping ได้ดำเนินการโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกลายพันธุ์ เปรียบเทียบกับ GBA ลำดับนะครับ ( ขนาดสูไม่ j03059.1 )การ p.l483p ( l444p ) p.y402h p.x537a การกลายพันธุ์และถูกตรวจสอบโดยเอนไซม์ digestions ของผู้ป่วยซึ่งใช้ ncii rsai , ผลิตภัณฑ์และ cac8i ตามลำดับ พ่อแม่ของผู้ป่วยเป็นโฮโมไซกัสการกลายพันธุ์สำหรับ p.l483p ( l444p ) การกลายพันธุ์ยังตรวจสอบสำหรับตัวแปรโดยการวิเคราะห์เอนไซม์จำกัด . ซึ่งได้จากผู้ป่วยที่มี ivs6 5การกลายพันธุ์เป็นชนิดที่สกัดจากเลือดของอุปกรณ์ต่อพ่วงที่ใช้ qiaamp .ชุดมินิ ( เพิ่มเลือด ) ย้อนกลับการใช้ improm II บัณฑิตยสถานreverse transcriptase ( promega เมดิสัน , WI , USA ) ตามที่ บริษัทแนะนํา การเพิ่มปริมาณยีน PCR ของ GBA ครอบคลุม 30 จบล้อหน้า 4 ผ่านการส่งเสริมการ 50 - จบ exon 11 แสดงใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบมาเพื่อขยายและ cgba4 cgba-r11 เพียงหน้าที่GBA ยีน แต่ไม่ใช่วิธีของ pseudogene ( ตารางที่ 2 )จากการวิเคราะห์พบ p.l483p ( l444p ) กลุ่มเพื่อตรวจสอบว่าเราใช้ p.l483p ( l444p ) การกลายพันธุ์ใน 4 เพิ่มเติมผู้ป่วย GD . สามส่วนและประมาณการสำหรับการกลายพันธุ์ ดีเอ็นเอของทั้ง 4 ราย รายที่ 1 , 2 และ 3 และพ่อแม่ของเป็นเทคนิคของชนิด ดังแสดงในตารางที่ 3 อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ไมโครแซทเทลไลท์ ( 5gc3.2 itg6.2 d1s2777 d1s1595 , , , d1s2721 ) ดีเอ็นเอของผู้ป่วย4 ไม่สามารถใช้ได้นี้พบการวิเคราะห์ การอ่านคือแสดงโดย