Cytotoxicity assayThe ADCC activity

Cytotoxicity assay
The ADCC activity of FAC in vitro was measured by lactase dehydrogenase
(LDH)-releasing assay, using the CytoTox 96 non-Radioactive
Cytotoxicity Assay kit (Promega, Beijing, China) according to the manufacturer’s
instructions. Human erythroleukemic cells K562 and SMMC-
7721 cells were used as the target cells and were placed in 96 wellplates
at 5 104 cells per well. The effector cells NK-92 were incubated
with different doses of FAC for 72 h. After washing, the cells were cultured
with K562 cells or SMMC-7721 cells at various E:T ratios, effector
to target ratios, (1:1, 5:1 or 10:1) in a 5% CO2 incubator for 24 h at 37 °C.
The cell lysis was determined by measuring the amount of released
LDH in culture supernatants. The maximum LDH release was determined
by lysis in 0.2% Triton-X100. Cytotoxicity was calculated as
follows: % cytotoxicity¼[(experimental)(effector spontaneous)(target
spontaneous)]/[(target maximum)(target spontaneous)] 100.
158

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดสอบความเป็นพิษกิจกรรม ADCC ของ FAC ในหลอดทดลองโดยวัดจาก lactase dehydrogenase (LDH) -releasing ทดสอบโดยใช้ CytoTox 96 กัมมันตรังสีที่ไม่เป็นพิษAssay ชุด (Promega, ปักกิ่ง, จีน) ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ เซลล์ erythroleukemic มนุษย์ K562 และ SMMC- 7721 เซลล์ถูกนำมาใช้เป็นเซลล์เป้าหมายและถูกวางไว้ใน 96 wellplates ที่ 5 104 เซลล์ต่อกัน เซลล์ effector NK-92 ถูกบ่มกับปริมาณที่แตกต่างกันของFAC 72 ชั่วโมง หลังจากล้างเซลล์เพาะเลี้ยงเซลล์ K562 หรือเซลล์ SMMC-7721 ที่ E ต่างๆ: อัตราส่วน T, effector ในการกำหนดเป้าหมายอัตราส่วน (1: 1, 5: 1 หรือ 10: 1) ในศูนย์บ่มเพาะ CO2 5% เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 ° C. สลายเซลล์ที่ถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณการปล่อยออกมาLDH ใน supernatants วัฒนธรรม รุ่นสูงสุด LDH ถูกกำหนดโดยการสลายในไทรทัน0.2%-X100 พิษที่คำนวณได้เป็นดังนี้% cytotoxicity¼ [(จากการทดลอง) (effector ที่เกิดขึ้นเอง) (เป้าหมายที่เกิดขึ้นเอง)] / [(เป้าหมายสูงสุด) (เป้าหมายที่เกิดขึ้นเอง)] 100 158

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเป็นพิษต่อ
adcc กิจกรรมของ 2 ในหลอดทดลองได้แลค dehydrogenase ( LDH )
- ปล่อยโดยการใช้ cytotox 96 ไม่กัมมันตภาพรังสี
พิษ assay Kit ( promega , ปักกิ่ง , จีน ) ตามคำแนะนำของ
ผู้ผลิต มนุษย์ erythroleukemic k562 smmc -
7721 เซลล์และเซลล์ที่ใช้เป็นเซลล์เป้าหมายและถูกวางไว้ใน 96 wellplates
5 104 เซลล์ต่อดีโดยโต้งเซลล์ nk-92 ถูกบ่มด้วยปริมาณที่แตกต่างกันของ SC
สำหรับ 72 ชั่วโมง หลังจากการล้างเซลล์เพาะเลี้ยงกับเซลล์หรือเซลล์ smmc-7721
k562 ที่ต่างๆ E : T (
เป้าหมายอัตราส่วนอัตราส่วน ( 1 : 1 1 : 5 : 1 หรือ 10 : 1 ) ที่อยู่ในตู้ก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ 5% เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศา C .
การสลายเซลล์ถูกกำหนดโดยการวัดปริมาณของการปล่อย
LDH ใน supernatants วัฒนธรรม เปิดตัวลีดาเฮสูงสุดถูกกำหนด
โดยการสลายใน 0.2% triton-x100 . เซลล์ก็คำนวณเป็นดังนี้ : % ต่อ
¼ [ ( ทดลอง ) ( ( ธรรมชาติ ) ( เป้าหมาย
ธรรมชาติ ) ] / [ ( เป้าหมายสูงสุด ) ( เป้าหมายเอง ) ]
158 100