3.3. Cell growth and desired differ

3.3. Cell growth and desired differentiation in the scaffolds
First, we determined if the scaffolds support the cell growth and intercellular connections. As shown in Fig. 4 (F-actin staining), 1.5 days after seeding, the cells displayed a spherical morphology inside the scaffolds.
Seven days later, most of the cells stretched out and extended along the NF matrix walls.
The cells also produced significantly more connexin 43, a gap junction protein in differentiated
cardiomyocytes [37], at day 7 than day 1.5. As gap junctions are essential for many physiological processes, increased expression of connexin 43 with increasing 3D culture time indicated that these cells on the NF matrix were robust enough to communicate with one another for tissue construction [38,39].
Then, we investigated the differentiation of the CPCs in the scaffolds.
We detected a dramatic transition of the seeded cells in the scaffolds from cardiac progenitors to the three desired cell types (Fig. 5A).
At day 1.5, the cells showed strong expression of CPC marker ISL1 as indicated by intense green fluorescence, which was almost undetectable after 7 days of induction.
After 7 days of culture, the seeded cells were found growing evenly within the scaffolds (Fig. 5B), positively expressing cardiomyocyte marker (cTnT) and smooth muscle cell markers (SM-22a and a-SMA).
However, endothelial cell marker (CD31) expression was relatively weaker.
The differentiation profile in 3D scaffolds was consistent with that in 2D culture plates.
Moreover, RT-PCR assay showed that the differentiation trend in 3D scaffolds was similar to that in 2D culture plates (Fig. 5C).
When the induction proceeded further, the seeded cells lost their progenitor features and differentiated
into specific lineages.
The semi-quantification data as shown in Fig. 5D clearly indicated the robust differentiation under 3D culture.
Taken together, the above data indicated that the porous NF PLLA scaffolds favorably supported the cell extension, growth, and differentiation towards desired lineages in vitro.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.3 การเจริญเติบโตและต้องการสร้างความแตกต่างใน scaffolds เซลล์ครั้งแรก เรากำหนดถ้า scaffolds สนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์และเชื่อมต่อ intercellular ดังแสดงใน (F-แอกตินย้อมสี) 4 Fig., 1.5 วันหลังปลูก เซลล์แสดงสัณฐานวิทยาทรงกลมภายใน scaffolds เจ็ดวันภายหลัง ส่วนใหญ่ของเซลล์ยืดออก และขยายไปตามผนังเมตริกซ์ NF เซลล์ยังผลิตมาก connexin 43 โปรตีนเชื่อมช่องว่างแตกต่างกันcardiomyocytes [37], 7 วันกว่าวัน 1.5 เป็นช่องว่าง junctions จำเป็นสำหรับกระบวนการสรีรวิทยาต่าง ๆ เพิ่มนิพจน์ของ connexin 43 กับเพิ่มเวลาวัฒนธรรม 3D ระบุว่า เซลล์เหล่านี้ในเมตริกซ์ NF ได้แข็งแกร่งพอที่จะสื่อสารกับอีกแบบหนึ่งสำหรับสร้างเนื้อเยื่อ [38,39]จากนั้น เราตรวจสอบสร้างความแตกต่างของ CPCs ในการ scaffoldsเราพบช่วงละครของเซลล์ seeded ใน scaffolds จากหัวใจ progenitors เพื่อระบุเซลล์สามชนิด (ของ 5A Fig.) เซลล์พบว่าค่าแรงของ CPC เครื่องหมาย ISL1 ตามที่ระบุ โดยเข้มเขียว fluorescence ซึ่งเกือบสามคหลัง 7 วันของวันที่ 1.5 หลังจาก 7 วันวัฒนธรรม seeded เซลล์พบเติบโตอย่างสม่ำเสมอภายใน scaffolds (Fig. 5B), บวกแสดงเครื่องหมาย cardiomyocyte (cTnT) และกล้ามเนื้อเรียบเครื่องหมายเซลล์ (SM 22a และแบบ SMA)อย่างไรก็ตาม เซลล์บุผนังหลอดเลือด (CD31) เครื่องหมายนิพจน์ค่อนข้างแข็งแกร่งโพรไฟล์การสร้างความแตกต่างใน 3D scaffolds สอดคล้องกับที่ในแผ่น 2D วัฒนธรรมได้ นอกจากนี้ RT-PCR assay พบว่า แนวโน้มสร้างความแตกต่างใน 3D scaffolds เหมือนกับที่ในแผ่น 2D วัฒนธรรม (Fig. 5C) เมื่อเหนี่ยวนำที่ครอบครัวเพิ่มเติม seeded เซลล์สูญเสียคุณสมบัติของ progenitor และแตกต่างกันเป็นเฉพาะเชื้อชาติ ข้อมูลนับกึ่งแสดงใน Fig. 5D ชัดเจนระบุสร้างความแตกต่างแข็งแกร่งภายใต้วัฒนธรรม 3Dเอากัน ข้อมูลข้างต้นระบุว่า scaffolds NF PLLA porous พ้องต้องสนับสนุนส่วนขยายของเซลล์ เติบโต การสร้างความแตกต่างทางเชื้อชาติที่ต้องการเพาะเลี้ยง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.3 เจริญเติบโตของเซลล์และความแตกต่างที่ต้องการในโครงครั้งแรกที่เรากำหนดถ้าโครงสนับสนุนการเจริญเติบโตของเซลล์และการเชื่อมต่อระหว่างเซลล์
ดังแสดงในรูป 4 (การย้อมสี F-โปรตีน) 1.5 วันหลังจากการเพาะเซลล์แสดงสัณฐานกลมภายในโครงได้.
เจ็ดวันต่อมาส่วนใหญ่ของเซลล์ยืดออกและขยายไปตามผนังเมทริกซ์ NF.
เซลล์ยังผลิต Connexin อย่างมีนัยสำคัญมากขึ้น 43, โปรตีนที่สถานีชุมทางช่องว่างในความแตกต่าง
cardiomyocytes [37] ในวันที่ 7 วันกว่า 1.5 ในฐานะที่เป็นทางแยกช่องว่างมีความจำเป็นสำหรับกระบวนการทางสรีรวิทยาหลายที่เพิ่มขึ้นการแสดงออกของ Connexin 43 เพิ่มเวลากับวัฒนธรรม 3D ชี้ให้เห็นว่าเซลล์เหล่านี้บนเมทริกซ์อิทเป็นที่แข็งแกร่งพอที่จะสื่อสารกับคนอื่นสำหรับการก่อสร้างเนื้อเยื่อ [38,39].
จากนั้นเราจะตรวจสอบ ความแตกต่างของค่า CPC ในโครงได้.
เราตรวจพบการเปลี่ยนแปลงอย่างมากของเซลล์เมล็ดในโครงจากบรรพบุรุษหัวใจสามเซลล์ชนิดที่ต้องการ (รูป. 5A).
ในวัน 1.5 เซลล์แสดงให้เห็นว่าการแสดงออกที่แข็งแกร่งของเครื่องหมาย CPC ISL1 ตามที่ระบุไว้ โดยการเรืองแสงสีเขียวที่รุนแรงซึ่งก็เกือบจะไม่สามารถตรวจพบหลังจากวันที่ 7 ของการเหนี่ยวนำ.
หลังจาก 7 วันของวัฒนธรรมเซลล์เมล็ดพบว่ามีการเติบโตอย่างสม่ำเสมอภายในโครง (รูป. 5B) บวกแสดงเครื่องหมาย cardiomyocyte (cTnT) และเครื่องหมายของเซลล์กล้ามเนื้อเรียบ ( SM-22a และ-SMA).
แต่เครื่องหมายเซลล์บุผนังหลอดเลือด (CD31) การแสดงออกค่อนข้างอ่อนแอ.
รายละเอียดความแตกต่างในโครง 3D สอดคล้องกับว่าในแผ่นวัฒนธรรม 2D.
นอกจากนี้ยังมีการทดสอบ RT-PCR พบว่าแนวโน้มความแตกต่างในแบบ 3 มิติ โครงคล้ายกับว่าในแผ่นวัฒนธรรม 2D (รูปที่ 5C).
เมื่อเหนี่ยวนำดำเนินการต่อเซลล์สูญเสียคุณสมบัติเมล็ดต้นกำเนิดของพวกเขาและความแตกต่างเข้า lineages เฉพาะ. ข้อมูลกึ่งปริมาณดังแสดงในรูป 5D แสดงให้เห็นถึงความแตกต่างที่มีประสิทธิภาพภายใต้วัฒนธรรม 3D. ที่ร่วมกันข้อมูลข้างต้นแสดงให้เห็นว่าโครงที่มีรูพรุน NF PLLA ในเกณฑ์ดีได้รับการสนับสนุนการขยายเซลล์เจริญเติบโตและความแตกต่างที่มีต่อ lineages ที่ต้องการในหลอดทดลอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.3 . การเจริญเติบโตของเซลล์และการเปลี่ยนแปลงที่ต้องการในนั่งร้าน
ก่อน เรายืนยันว่า โครงการสนับสนุนการเจริญและการเชื่อมต่อ intercellular . ดังแสดงในรูปที่ 4 ( f-actin staining ) 1.5 วัน น้ำหนักเซลล์แสดงภายในทรงกลมของนั่งร้าน
7 วันต่อมา ส่วนใหญ่ของเซลล์ยืดและขยายตามผนัง NF เมทริกซ์
เซลล์ที่ผลิตมากคอนเน็กซิน 43 , ช่องว่างแยกโปรตีนที่แตกต่าง
cardiomyocytes [ 37 ] , วันที่ 7 วัน 1.5 เป็นช่องว่างต่างๆที่จำเป็นสำหรับกระบวนการทางสรีรวิทยาหลายเพิ่มการแสดงออกของคอนเน็กซิน 43 เพิ่ม 3D วัฒนธรรมเวลาพบว่าเซลล์เหล่านี้ใน NF เมทริกซ์ยังแข็งแกร่งพอที่จะสื่อสารกับคนอื่นเพื่อสร้างเนื้อเยื่อ [ 3839 ] .
แล้ว เราได้ตรวจสอบความแตกต่างของ cpcs ในนั่งร้าน
เราพบอย่างมากการเปลี่ยนแปลงของเมล็ดเซลล์ใน scaffolds จากหัวใจตั้งต้นทั้งสามชนิดของเซลล์ที่ต้องการ ( รูปที่ 43 )
ที่ 1.5 วัน เซลล์ที่พบการแสดงออกที่แข็งแกร่งของ isl1 CPC เครื่องหมายตามที่ระบุโดยเขียวเรืองแสง ซึ่งเกือบจะได้หลังจาก 7 วันของแม่เหล็กไฟฟ้า
หลังจาก 7 วัน ของวัฒนธรรม , seeded เซลล์พบเติบโตอย่างเท่าเทียมกันภายในโครง ( มะเดื่อ 5B ) มีเครื่องหมายแสดง cardiomyocyte ( ctnt ) และเครื่องหมาย ( sm-22a เซลล์กล้ามเนื้อเรียบ และ a-sma ) .
แต่เครื่องหมายเซลล์เยื่อบุ ( cd31 ) การแสดงออกค่อนข้างแข็งแกร่ง .
ความแตกต่างโปรไฟล์ใน 3D นั่งร้านนี้สอดคล้องกับที่ ในจานเพาะ 2D
นอกจากนี้วิธี RT-PCR พบว่าแนวโน้มในการ 3D นั่งร้านก็คล้ายกับว่าในวัฒนธรรม 2 แผ่น ( รูปที่ 5 )
เมื่อการสอนเพิ่มเติม เมล็ดเซลล์เสียบุรพาจารย์ของพวกเขามีความแตกต่างและในที่เฉพาะเจาะจงเมื่อ
.
กึ่งปริมาณข้อมูลดังแสดงในรูปที่ชี้ให้เห็นความแตกต่าง 5D แข็งแกร่งภายใต้วัฒนธรรม 3 .
ถ่ายด้วยกันข้อมูลข้างต้นพบว่า รูพรุน NF plla นั่งร้านพ้องต้องกันสนับสนุนเซลล์ขยายการเจริญเติบโตและความแตกต่างทางเชื้อชาติ
ที่ต้องการในเด็ก